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基于关键酶靶点基因研究内生青霉P116-1a提高刺五加皂苷含量的机制被引量：2: 2015年; 为了探明刺五加鲨烯合酶(squalene synthase,SS)、鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)和β-香树酯醇合成酶(β-amyrin synthase,β-AS)基因家族各成员中靶点基因在内生青霉P116-1a提高皂苷含量的作用机制,我们利用Real time PCR法检测了回接P116-1a对刺五加SS、SE和β-AS基因家族各成员表达的影响;应用分光光度法测定总皂苷含量变化,并以SPPS17.0软件进行相关性分析。结果表明,回接菌株P116-1a后,SS1的表达量显著降低(p<0.05),SS2呈先高后低的变化趋势。SE1的表达量显著提高(p<0.05)。回接的早期,P116-1a显著抑制了SE2的表达(pAS2<0.05),之后回复正常。β-AS1呈现先高后低的变化趋势与SS1的变化趋势相似;β-基因的表达量显著提高(p<0.05)。菌株P116-1a显著提高了刺五加的皂苷含量(p<0.05)。SS2、SE1和β-AS2的表达量变化与刺五加的皂苷含量变化呈显著的正相关关系。我们初步判断,SS2、SE1和β-AS2是P116-1a提高刺五加皂苷含量的作用靶点基因。; 龙月红杨果李非非邢朝斌; 关键词：刺五加皂苷类

刺五加鲨烯环氧酶基因家族2成员表达特性的分析被引量：6: 2015年; 刺五加的鲨烯环氧酶(SE)基因家族存在2个成员。为了探明其表达特性,利用实时荧光定量PCR技术,分析刺五加SE1,SE2在不同生长发育时期、器官和茉莉酸甲酯(Me JA)处理对其表达及皂苷含量的影响。结果表明,刺五加SE2在各时期、器官中表达量均显著高于SE1。在整个生长期中SE1表现为低-高-低的特点,SE2则表现出随着生长的进行而显著降低的变化趋势,两者均在根中的表达量最低,Me JA处理对SE1的提升水平显著高于SE2。刺五加的皂苷含量与SE1表达量间的相关系数为0.858,呈显著的正相关关系(P<0.05),而SE2未达显著水平。说明SE1是催化刺五加三萜皂苷生物合成的关键酶。; 龙月红李非非杨果邢朝斌; 关键词：刺五加皂苷

刺五加细胞色素P450基因的克隆与表达分析被引量：2: 2014年; 根据已报道的人参、三七等植物的细胞色素P450(Cytochrome P450,P450)基因的cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法克隆刺五加P450基因的cDNA全长序列,并分析其在不同生长发育时期和器官中的表达情况。结果显示,克隆了全长为1 410 bp的刺五加P450基因的cDNA序列,该基因编码469个氨基酸残基组成的蛋白质。GenBank登录号为KF498590,与人参、三七的P450氨基酸序列一致性分别为91.5%和90.4%。刺五加的P450基因在不同生长发育时期和器官中均有表达,但表达量具有显著差异(P<0.05)。最大表达量出现在盛花期,为最低表达量(萌芽期)的1.26倍。各器官中,叶片的表达量最高,是最低量幼茎的1.49倍。; 邢朝斌吴鹏李非非刘岩周秘修乐山; 关键词：刺五加细胞色素P450 克隆

珍稀植物跳舞草愈伤组织的诱导被引量：1: 2014年; ①目的筛选出跳舞草外植体的最佳消毒方案及愈伤组织诱导的最佳条件。②方法以跳舞草的叶片为实验材料,利用离体培养技术,分析了不同消毒时间和培养条件对跳舞草愈伤组织诱导的影响。③结果外植体最佳的消毒方案为:75%的酒精消毒30s;愈伤组织诱导的最佳条件为:MS,NAA:0.02 mg/L,BA:2 mg/L,糖:30 g/L,琼脂:6 g/L。④结论为进一步建立跳舞草组培快速繁殖体系奠定了基础。; 周秘柴丽花李非非龙月红邢朝斌; 关键词：跳舞草

刺五加P450基因原核表达体系的建立与表达条件的优化: 2015年; 根据已克隆得到的刺五加P450基因的cDNA序列设计引物,构建刺五加P450基因的原核表达载体pET30a-P450,并对重组菌株BL21/pET30a-P450的原核表达条件进行了筛选优化。实验结果显示,pET30a-P450转化大肠杆菌BL21后可实现P450基因的原核表达,SDS-PAGE分析显示其在53 kDa处有显著诱导条带;表达体系的最佳诱导温度为27~37℃,最佳IPTG浓度为1 mmol·L^(-1),最佳培养基为LB液体培养基,最佳诱导时间为24 h。因此,刺五加P450基因能够通过表达载体BL21/pET30a-P450实现该基因的原核表达,该体系的诱导温度、IPTG浓度、培养基种类以及诱导时间均可影响目的蛋白的表达量,但影响强度不同。; 吴鹏修乐山李非非邢朝斌; 关键词：P450基因

刺五加糖基转移酶基因的表达及其对皂苷含量的影响被引量：3: 2014年; 为了探明刺五加糖基转移酶基因(glycosyltransferase,GT)的表达特点及其对刺五加总皂苷含量的影响。以GAPDH基因为内参照基因,采用实时定量PCR技术分析了不同产地、不同生长发育时期、不同器官刺五加中GT基因的表达规律及茉莉酸甲酯(MeJA)对其表达的影响。并采用浓硫酸-香草醛比色法测定刺五加总皂苷的含量,利用SPPS17.0软件进行相关性分析。结果表明,GT基因在根、幼茎、叶片和叶柄中均有表达,但表达量差异不显著。刺五加的GT基因在叶片完全展开期的表达量最高,盛花期和果实基本成熟期的表达量最低,仅为叶片完全展开期表达量的66.9%。MeJA处理可显著提高GT基因的表达量(p<0.05)。不同产地刺五加的GT基因表达量和总皂苷含量差异显著,但GT基因的表达量与总皂苷含量同升同降,存在极显著的正相关关系(p<0.01)。初步判定,GT基因的表达量决定了刺五加中总皂苷的含量,GT是决定刺五加中总皂苷含量的关键酶。; 修乐山李非非周秘邢朝斌; 关键词：刺五加糖基转移酶基因皂苷

刺五加鲨烯合酶基因家族两成员的表达及其与皂苷含量的关系被引量：15: 2014年; 为了探明刺五加鲨烯合酶(SS)基因家族2成员对皂苷含量的作用机制,以actin为内参基因,利用real time PCR技术,分析刺五加不同生长发育时期、不同器官及茉莉酸甲酯(MeJA)处理对SS1、SS2基因表达及皂苷含量的影响。结果表明:刺五加SS基因家族的SS1和SS2在整个生长期和各器官中均有表达,且表达量差异显著(P<0.05),其中,在萌芽期两者的表达量差异最大。SS1在叶片、叶柄和根器官中的表达量显著高于SS2的表达量(P<0.05)。MeJA处理可显著提高SS1和SS2基因的表达量。刺五加SS1的表达量与皂苷含量间的相关系数低,未达显著水平。SS2的表达量与皂苷含量呈显著的正相关关系(P<0.01)。SS2表达量的高低决定了皂苷含量的高低,是刺五加中三萜皂苷生物合成中的关键酶。; 邢朝斌龙月红李非非周秘修乐山劳凤云; 关键词：刺五加 REAL 皂苷

刺五加HMGR基因的表达及其对皂苷合成的影响被引量：4: 2015年; 以actin为内参基因,采用Real time PCR法分析产地、发育时期、器官以及茉莉酸甲酯(MeJA)对刺五加HMGR基因表达的影响,并采用分光光度法测定皂苷含量,利用SPSS 17.0软件分析两者的相关性。结果表明:HMGR基因在各器官中均有表达,相对表达量间差异较明显(p<0.05)。刺五加HMGR基因在盛花期表达量最大,叶片衰老期表达量最低。Me JA处理后显著提升了萌芽期至盛花期HMGR的表达量,而对果实快速生长期之后的影响较小。不同产地刺五加的HMGR基因表达量和总皂苷含量差异显著,而HMGR基因的表达量与总皂苷含量同升同降,存在极显著的正相关关系(p<0.01)。; 李非非杨果吴鹏邢朝斌; 关键词：刺五加皂苷

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李非非