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心肌营养素1分子的克隆及其反转录病毒载体的构建: 2007年; 实验于2005-10/2006-06在江苏省干细胞重点实验室进行。体外分离培养新生SD大鼠心室肌细胞2周后,Trizol法抽提细胞总RNA,RT-PCR获得心肌营养素1基因,与克隆载体PMD18-T-Vector连接,转化TOP10感受态细菌,阳性克隆经鉴定正确后,PCR扩增心肌营养素1基因,EcoRI和BamHI双酶切,T4DNA连接酶连接,构建pEGZ-CT-1的反转录病毒载体。经PCR及酶切鉴定,测序表明心肌营养素1基因成功插入pEGZ-Term载体。pEGZ-CT-1载体的构建,为转基因细胞的制备和移植治疗心肌梗死奠定了基础。; 吕海军张学光王如兴陈永井张稷杨丽华李肖蓉; 关键词：心室肌细胞心肌营养素1 反转录病毒

成纤维细胞生长因子2的分子结构和生物学效应被引量：8: 2007年; 目的:成纤维细胞生长因子2是一种多功能、作用广泛的细胞因子。就成纤维细胞生长因子2分子结构和生物学效应以及与骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的相关研究进行综述。资料来源:应用计算机检索PubMed数据库1990-01/2006-10有关成纤维细胞生长因子2的文章,检索词“FGF-2,molecular structure,biological effect,myocardial infarction and rat and marrows tem cell”,限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库1990-01/2006-10期间的相关文章,检索词“碱性成纤维细胞生长因子”,限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选取符合研究要求的有关文章找全文。纳入标准:①有关成纤维细胞生长因子2分子结构、生物学特性的研究。②有关骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死的研究。资料提炼:共收集到34篇有关成纤维细胞生长因子2分子结构和生物学效应的文章,67篇有关骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性心肌梗死的研究。选取其中31篇归纳总结。资料综合:①成纤维细胞生长因子2在人体内普遍存在,许多体外培养的细胞也自分泌成纤维细胞生长因子2。成纤维细胞生长因子2包括18000的低相对分子质量成纤维细胞生长因子2和高相对分子质量成纤维细胞生长因子2。成纤维细胞生长因子2翻译的起始密码子有两种:AUG和CUG。②成纤维细胞生长因子2有两种不同的受体,它们可与相应的受体结合发挥生物学功能。③在体外培养骨髓间充质干细胞的过程中,成纤维细胞生长因子2可促进其向心肌样细胞分化,在相对缺氧的环境下,提高心肌样细胞存活率。结论:成纤维细胞生长因子2作为一种多功能的细胞生长因子,在胚胎发育,创伤修复以及缺血、炎症、肿瘤等情况下,可作用于靶细胞上的特异性受体,发挥多种生理功能。它对新生血; 杨丽华李肖蓉王如兴; 关键词：成纤维细胞生长因子2 分子结构

肿瘤标志蛋白抑制剂及其在抑制肿瘤标志蛋白中的应用: 本发明提供一种肿瘤标志蛋白抑制剂及其在抑制肿瘤标志蛋白中的应用，具体地本发明人在研究过程中意外地发现砷化物可显著抑制14‑3‑3η蛋白活性，能够作为14‑3‑3η蛋白抑制剂从而用于体外抑制14‑3‑3η蛋白活性，或用于治...; 李远金铭仇咏欣杨叶戴易黄光明杨丽华张建平; 文献传递

超声介导心肌营养素1基因转移骨髓间充质干细胞及表达测定被引量：1: 2009年; 目的探讨超声介导白蛋白微泡破裂促进心肌营养素1(CT-1)基因转移骨髓间充质干细胞(MSC)表达的测定。方法从分离培养的新生大鼠心肌细胞中克隆CT-1基因,构建其表达载体,与白蛋白微泡混合后,在超声作用下介导CT-1基因转染大鼠MSC,荧光显微镜及流式细胞术检测报告基因EGFP的表达,Western blot检测MSC中CT-1表达。结果可获大鼠CT-1编码基因,并成功构建表达载体pIRES2-CT-1。体外实验结果示,以脉冲0.75 W/cm2作用30 s转染2次,可以有效地将CT-1基因转染MSC,经转染的MSC可以表达分泌CT-1及报告基因EGFP。结论超声介导白蛋白微泡破裂可以有效促进CT-1基因转染MSC,该技术可能为临床应用基因联合干细胞移植治疗急性心肌梗死提供新的方法。; 王如兴李肖蓉吕海军吴小庆张燕张滨杨丽华张学光; 关键词：心肌营养素1 骨髓间充质干细胞超声

血红素加氧酶1分子克隆及表达载体的构建: 2009年; 背景:近年来许多研究发现血红素加氧酶1具有抗炎、抗氧化及抗凋亡等作用,并且在心肌缺血-再灌注损伤等应激反应中有重要的保护作用,从而成为研究热点。目的:克隆大鼠血红素加氧酶1全长基因,并将其于真核表达载体PIRES2-EGFP相连接,构建血红素加氧酶1的真核表达载体。设计、时间及地点:实验于2008-03/06在苏州大学生物技术研究所完成。材料:成年雄性SD大鼠,由苏州大学动物实验中心提供,用于脾脏细胞总RNA的提取;克隆载体PMD18-T购自Takara公司;表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学生物技术研究所保存。方法:分离大鼠脾脏获取脾脏细胞,Trizol法提取脾脏细胞的总RNA,经反转录-聚合酶链反应扩增获得血红素加氧酶1基因,将扩增出来的产物与克隆载体PMD18-T连接,转化TOP10感受态细菌,挑取阳性克隆经PCR及酶切鉴定后测序确证。测序正确后抽提质粒作为模板进行PCR,Sal-Ⅰ和BamH-Ⅰ同时双酶切PCR产物和载体PIRES2-EGFP,再在T4DNA连接酶的作用下进行连接,构建其真核表达载体。主要观察指标:血红素加氧酶1基因的克隆和DNA测序结果证实序列是否正确;PIRES2-EGFP/血红素加氧酶1真核表达载体的构建以及测序证实目的基因成功插入载体。结果:①实验完成了大鼠血红素加氧酶1基因的克隆,所获得的序列与GeneBank中收录的大鼠血红素加氧酶1序列完全一致。②构建真核表达载体PIRES2-EGFP/血红素加氧酶1,测序正确说明血红素加氧酶1基因成功插入表达载体PIRES2-EGFP中。结论:实验成功克隆了大鼠血红素加氧酶1基因全长,并构建了其真核表达载体。; 张燕王如兴李肖蓉陈永井杨丽华党时鹏王明元张学光; 关键词：血红素加氧酶1 克隆

肿瘤标志蛋白抑制剂及其在抑制肿瘤标志蛋白中的应用: 本发明提供一种肿瘤标志蛋白抑制剂及其在抑制肿瘤标志蛋白中的应用，具体地本发明人在研究过程中意外地发现砷化物可显著抑制14‑3‑3η蛋白活性，能够作为14‑3‑3η蛋白抑制剂从而用于体外抑制14‑3‑3η蛋白活性，或用于治...; 李远金铭仇咏欣杨叶戴易黄光明杨丽华张建平; 文献传递

超声介导白蛋白微泡破裂促进成纤维细胞生长因子-2转移骨髓间充质干细胞的实验研究: 目的：骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchyme stem cell，BMSCs)来源于中胚层，具有自我更新和多向分化潜能，可以体外分离培养，经一定条件诱导，可以向心肌细胞方向分化。5-氮胞苷(5-a...; 杨丽华; 关键词：骨髓间充质干细胞 BMSCS 成纤维细胞生长因子-2 FGF-2 超声介导; 文献传递

大鼠成纤维细胞生长因子2分子克隆及其真核表达载体的构建被引量：1: 2008年; 目的:实验旨在克隆大鼠成纤维细胞生长因子2CDS区基因全长,并将其于真核表达载体PIRES2-EGFP相连接,构建成纤维细胞生长因子2的真核表达载体。方法:实验于2007-03/06在苏州大学生物技术研究所完成。①实验材料:克隆载体PMD18-T-vector(takara);真核表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学第一附属医院消化科叶建新博士惠赠;大肠杆菌TOP10购自英俊公司;清洁级新生一两天SD大鼠2只。②实验过程及评估:体外分离培养新生SD大鼠心室肌细胞。Trizol法抽提心室肌细胞总mRNA,采用反转录-聚合酶链反应的方法反转录获得总的cDNA,聚合酶链反应的方法扩增成纤维细胞生长因子2基因的CDS区片断全长。将扩增出来的基因片断和克隆载体PMD18-T-vector连接,转化TOP10感受态细菌,阳性克隆经电泳,质粒聚合酶链反应和酶切等鉴定正确后送去测序确认。测序正确后抽重组质粒,bglⅡ和pstⅠ同时双酶切PMD18-T-FGF-2和PIRES2-EGFP,将切下的目的基因片段和线性PIRES2-EGFP空质粒载体在T4DNA连接酶作用下进行连接,构建其真核表达载体。结果:①成功培养出了形态典型的SD大鼠的心室肌细胞。②所获的大鼠成纤维细胞生长因子2DNA序列与GeneBank中收录的大鼠成纤维细胞生长因子2序列完全一致。③PIRES2-EGFP-bFGF真核表达载体的构建测序表明,成纤维生长因子2成功插入真核表达载体PIRES2-EGFP之中。结论:实验成功克隆了大鼠成纤维细胞生长因子2基因全长,并构建了其真核表达载体。为转基因细胞制备和移植治疗心肌梗死奠定基础。; 杨丽华张学光王如兴陈永井吕海军张燕李肖蓉; 关键词：成纤维细胞生长因子2

镍钛记忆合金网状消化道支架的研制、应用及其并发症的机制研究: 范志宁李兆申季国忠宛新建张发明缪林文卫王翔黄光明杨丽华王世栋; 利用了镍钛记忆合金形态记忆、超弹性和良好的生物相容性等特点，在0～10℃的低温环境中，具有马氏体状态，易于改变形状，装入输送器，因为支架表面光滑，柔韧性好，易于植入，在37℃的人体环境中，马氏体转变为母相奥氏体，一旦解除...; 关键词：; 关键词：生物相容性镍钛记忆合金

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杨丽华

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