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猪博卡病毒双重PCR检测方法的建立及其应用被引量：14: 2013年; 为了建立快速检测猪博卡病毒(PBoV)所有基因型的诊断方法,根据GenBank中公布的PBoV的不同基因型序列,对其进行同源性分析,分别设计出扩增PBoV1/PBoV2及PBoV3/PBoV4/PBoV5的引物,在分别建立单一PCR检测方法的基础上,通过对两组引物的比例、退火温度等条件的优化,首次建立了同时检测PBoV1/PBoV2和PBoV3/PBoV4/PBoV5的双重PCR方法。使用该方法对来自四川省部分猪场的18份腹泻仔猪病料进行检测。结果显示,建立的双重PCR特异性强,敏感性高,重复性好;四川省存在猪博卡病毒感染,样品中有10份为猪博卡病毒阳性,其中7份为猪博卡病毒3/4/5型,2份为猪博卡病毒1/2型,1份为猪博卡病毒1/2型及3/4/5型共感染。结果表明,建立的双重PCR能成功检测出猪博卡病毒所有基因型,并能区分PBoV1/PBoV2和PBoV3/PBoV4/PBoV5,为猪博卡病毒的诊断和预防提供了技术支持。; 蔡雨函朱玲周远成杨文宇徐志文

四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查被引量：6: 2015年; 为了解2012-2013年四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行毒株的遗传变异背景和分子流行病学情况,对PRRSV阳性病料中的Nsp2、ORF5基因进行RT-PCR扩增和序列测定,所获得的序列分别与美洲型代表株(VR2332)、欧洲型代表株(LV)、标准毒株和变异毒株进行相似性分析。结果本研究成功获得8条Nsp2基因序列和17条ORF5基因序列,序列分析表明所有PRRSV流行毒株均属于美洲型,其中8株Nsp2基因序列与标准毒株和变异毒株的核苷酸相似性分别为75.2%~88.6%和94.8%~97.1%,推导的氨基酸相似性分别为58.7%~79.2%和92.8%~94.8%;17株ORF5基因序列与标准毒株和变异毒株的核苷酸相似性分别为90.1%~96.6%和95.6%~99.4%,推导的氨基酸相似性为77.2%~93.0%和88.0%~96.8%;与标准毒株相比,8株Nsp2基因有30个不连续氨基酸缺失,17株ORF5基因序列有点突变。从遗传进化分析看,所有流行毒株均属于PRRSV亚群Ⅲ。; 蔡雨函杨雪徐志文郭万柱周远成吴云飞杨文宇朱玲; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因 ORF5基因

猪轮状病毒四川株的分离鉴定及增殖规律被引量：8: 2014年; 为了解猪轮状病毒（PoRV）在MARC-145细胞系上的培养特性及增殖规律，本试验利用MARC-145细胞，从四川仔猪腹泻样品中分离到1株PoRV，并通过PCR检测、病毒理化实验与微量中和实验证实，命名为SC-R株。用含不同浓度胰酶营养液培养SC-R株48h后，分别收集病毒液进行定量分析；同时，以SC-R分离株感染MARC-145细胞，在感染后不同时间分别收集感染病毒液，利用PoRV荧光定量检测方法对不同样品中病毒RNA进行定量分析，绘制PoRV生长曲线。结果表明，用含3％胰酶营养液培养的细胞液中PoRV的RNA含量明显高于其他组；-步生长曲线显示细胞外病毒RNA含量呈“s型”曲线增长，感染后0～8h为潜伏期，病毒RNA含量维持在较低水平；8～36h为突破期，病毒RNA含量呈对数增长；感染48h增长速度减缓，维持在较高水平，逐步进入稳定期。胰酶可增加PoRV对细胞的感染性，3％是本试验最为适用的胰酶浓度；PoRV感染MARC-145后在细胞内增殖并逐步释到细胞外。; 杨文宇朱玲周远成郭万柱徐志文; 关键词：TCID50 胰酶

猪A群轮状病毒和C群轮状病毒以及猪星状病毒多重RT-PCR同时检测方法的建立及应用被引量：10: 2014年; 为建立同时快速检测猪A群轮状病毒(GARV)、猪C群轮状病毒(GCRV)和猪星状病毒(AstV)的三重RT-PCR检测方法,根据GenBank中公布的序列进行病毒基因区同源性分析,然后使用Primer Premier 5.0软件分别设计了GARV、GCRV的VP6基因和AstV的ORF2基因特异性引物,预期扩增片段的大小分别为229、166和410bp。在这3种病毒单项RT-PCR技术的基础上,建立了GARV、GCRV和AstV的多重RT-PCR检测方法,并用该方法检测30份四川省仔猪腹泻粪样。结果显示,GARV、GCRV、AstV的阳性检出率分别为26.7%、13.3%、16.7%,本方法与这3种病毒的单项RT-PCR检测结果的符合率分别为100%、100%、83%,整体符合率达94.3%,特异性为100%。结果表明,本试验建立的多重RTPCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可用于GARV、GCRV和AstV的同时检测。; 杨文宇周远成韩燕陈蕾廖春燕付梦瑾季洪伟蔡雨涵朱玲徐志文郭万柱; 关键词：多重RT-PCR

抗流行性乙型脑炎病毒药物的研究进展被引量：13: 2015年; 流行性乙型脑炎(Japanese Encephalitis,JE)是由黄病毒科(Flaviridae)黄病毒属(Flavivirus)流行性乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)引起的,在自然界中主要以猪为宿主,经蚊传播的一种蚊媒性人兽共患传染病。该病主要流行于亚洲及西太平洋地区,严重威胁着人类健康,已成为人类脑炎疾病最主要的病因之一,并影响养猪业的发展,引起了世界性的广泛关注,因此,流行性乙型脑炎的防治研究有着重要的实际应用意义。到目前为止,尚无治疗流行性乙型脑炎特效药面市,但对抗流行性乙型脑炎病毒药物的研究已有一定的进展,而我国在这方面的系统介绍较少,本文就近10年来抗流行性乙型脑炎药物及其作用机制的研究进展做一综述,旨在为流行性乙型脑炎的预防和治疗提供参考。; 蔡雨函朱玲周远成杨文宇徐志文; 关键词：流行性乙型脑炎抗病毒药物

猪核转录因子C-Rel亚基的克隆及PRV体外感染PK-15细胞对C-Rel转录时相的影响被引量：3: 2014年; 核转录因子κB是普遍存在于真核细胞中的转录调节因子,其信号通路在细菌、病毒感染宿主致病过程中起关键作用,直接调控宿主先天性免疫反应及细胞增殖、分化和凋亡,它的异常活化可能是PRV感染导致免疫抑制的重要原因。为进一步了解NF-κB C-Rel亚基序列特征及PRV对C-Rel mRNA转录时相的影响,本试验采用RT-PCR从猪外周血淋巴细胞中扩增NF-κB C-Rel ORF,获得阳性质粒后测序,进行相关生物信息学分析;运用实时荧光定量PCR技术对PRV感染PK-15细胞后不同时期C-Rel mRNA的转录水平进行定量分析。序列分析结果表明:所扩增猪C-Rel亚基ORF长1 773bp,编码590aa;猪C-Rel核苷酸序列与不同动物的C-Rel核苷酸序列相似性较高;大部分位于细胞核内(76.0%),无信号肽及跨膜区。荧光定量结果表明:与对照组相比,感染后0~4h,C-Rel转录水平下调,2和4h差异显著(P<0.05);4~12h,快速上调,12h达到转录高峰(P<0.01);12h后逐渐下降,24~120h,维持在较低水平,其中36h差异极显著(P<0.01),48、72和120h差异显著(P<0.05)。本研究推断PRV感染早期较弱的先天性免疫应答可能与C-Rel活化水平低下有关。; 付梦瑾朱玲周远成杨文宇李新琼徐志文; 关键词：C-REL 转录时相

猪A群轮状病毒、猪C群轮状病毒和猪星状病毒多重RT-PCR检测方法的建立与初步应用: 2011年至今全国范围内爆发的由病毒感染而导致的仔猪腹泻，给养猪业造成了巨大的经济损失，其中包括猪A群轮状病毒（group A porcine rotavirus，GARV）、猪C群轮状病毒(group C porcin...; 杨文宇; 关键词：多重RT-PCR检测; 文献传递

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杨文宇