杨晓亚
- 作品数：15 被引量：32H指数：3
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金海外青年学者合作研究基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组VIP腺病毒载体的构建及其在293细胞的表达
- 2007年
- 目的构建血管活性肠肽重组腺病毒载体,以期用于体内实验研究。方法利用RT-PCR扩增小鼠大脑VIPmRNA,亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在pAdeasy内同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染293细胞进行包装、扩增,利用报告基因EGFP对病毒滴度进行监测。PCR、免疫荧光鉴定pAdeasy-VIP感染293细胞后VIP基因的表达,ELISA检测重组病毒转染后293细胞上清中的表达。结果测序、酶切证实VIP基因重组腺病毒载体构建成功。RT-PCR,免疫荧光检测pAdeasy-VIP病毒感染的293细胞,均有VIP的表达。与对照组相比,重组病毒转染后293细胞上清中VIP多肽的表达明显增高。结论成功构建了含小鼠VIP基因的重组腺病毒载体,并成功表达VIP多肽。
- 宋敏白云段文元章波杨晓亚许雪青
- 关键词：血管活性肠肽腺病毒基因治疗
- OX40信号上调Survivin表达对CD4^+T淋巴细胞增殖存活的影响被引量：3
- 2005年
- 目的 探讨OX4 0信号抑制活化后CD4 + T细胞凋亡,维持细胞存活及促增殖作用是否与Survivin相关。方法 分离培养小鼠脾脏CD4 + T淋巴细胞,以去除T细胞的脾细胞作为抗原呈递细胞,交联CD3单克隆抗体活化T细胞。用免疫印迹法比较不同时相点,加入OX4 0抗体及转染Survivin负显性突变体基因后,CD4 + T细胞中Survivin蛋白表达差异。流式细胞仪检测AnnexinV染色后细胞凋亡数量。〔3H〕TdR掺入法测细胞增殖。结果 CD4 + T细胞活化后2～8d ,OX4 0抗体刺激可明显增强Survivin表达,并减少2 5 %细胞凋亡;Survivin突变体降低Survivin蛋白表达后使凋亡增加2 2 %。结论 OX4 0信号能够通过上调Survivin表达来抑制CD4 + T细胞凋亡,从而维持细胞存活和增殖。
- 王艳艳白云宋建勋杨晓亚
- 关键词：OX40存活素T淋巴细胞
- 人ICOSIg的真核表达及其对MLR反应的影响被引量：3
- 2005年
- 目的构建人ICOSIg基因的真核表达载体,表达并鉴定ICOSIg蛋白,初步研究其对MLR中细胞增殖以及对IL-10分泌的影响。方法从活化的人T细胞cDNA文库中以PCR方法扩增ICOS胞外区cDNA编码基因,并和人IgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中,采用脂质体转染COS-7细胞,G418筛选,用ELISA检测其表达情况,经蛋白A亲和纯化,用SDS-PAGE和Westernblotting进行鉴定。进一步通过3H-TdR掺入法和夹心ELSIA法探讨其对双向MLR反应中细胞增殖以及对IL-10分泌的影响。结果酶切和测序证实构建的ICOS膜外区和人IgG1Fc段基因序列正确、阅读框完整;ELISA、SDS-PAGE、Westernblot验证ICOSIg的正确表达;功能实验提示ICOSIg能抑制MLR中的细胞增殖和IL-10的分泌。结论成功构建并表达了ICOSIg,而获得的ICOSIg能抑制MLR。
- 许雪青白云王丰黎万玲杨晓亚王艳艳
- 关键词：共刺激分子混合淋巴细胞反应
- ICOS通过survivin维持T细胞分裂及存活
- 2007年
- 有关T细胞共刺激分子信号转导方面的研究远落后于其功能研究,为探讨T细胞活化后诱导表达的共刺激分子ICOS(induciblecostimulate)维持T细胞存活、抑制活化后T细胞凋亡的作用是否与survivin相关,利用survivin重组腺病毒感染活化但不提供共刺激信号的T淋巴细胞,或者在活化后提供ICOS信号的条件下人工给予优势抑制survivin突变基因,CCK-8及TUNEL法分别检测活化晚期上述T细胞存活及凋亡情况.结果显示,T细胞活化后2～6天,ICOS抗体刺激可以明显增强survivin表达,survivin可维持无ICOS信号的T细胞存活减少其凋亡,突变型survivin在ICOS信号存在下抑制T细胞存活使其凋亡增加.结果提示,活化后表达的共刺激分子ICOS通过survivin维持T细胞分裂和存活.
- 杨晓亚白云王艳艳许雪青陈雪丹
- 关键词：ICOSSURVIVINT淋巴细胞
- 小胶质细胞人补体攻膜复合物亚溶破模型制作及功能鉴定被引量：3
- 2006年
- 目的：体外建立小鼠小胶质细胞补体攻膜复合物亚溶破模型，并进行功能鉴定，探讨补体攻膜复合物（sublytic membrane attack complex，sMAC）对中枢神经系统小胶质细胞的亚溶破刺激效应，方法：分离培养新生小鼠大脑皮层小胶质细胞，用酵母多糖激活急性期患者血清制备补体优球蛋白C56，以新鲜正常人血清（NHS）作为C7-C9来源，体外组装小鼠小胶质细胞sMAC亚溶破模型，CCK-8比色实验确定sMAC亚溶破剂量，激光共聚焦显微镜（LSCM）鉴定sMAC沉积，脱落细胞计数及台盼蓝拒染法分别判定细胞黏附力变化及脱落细胞活力．ELISA法测定sMAC对小胶质细胞NO和TNF—α分泌量的影响．结果：确定C561：480，NHS1：20为小胶质细胞亚溶破补体量；LSCM显示sMAC沉积于小胶质细胞表面；sMAC刺激小胶质细胞后与对照组相比细胞脱落增加（P〈0．05），而活力正常．刺激后12hNO及TNF-α分泌量比对照组显著增加（P〈0．05），不同时相观察sMAC刺激后小胶质细胞TNF—α分泌量均显著高于失活sMAC（P〈0．05）．结论：sMAC刺激小胶质细胞后分泌NO及TNF—α增多，并且可降低小胶质细胞黏附力而不影响细胞活力，推测sMAC对小胶质细胞具有炎性刺激效应．
- 罗娜白云周静然宋敏王艳艳杨晓亚许雪青段文元熊加祥
- 关键词：小神经胶质细胞细胞活力肿瘤坏死因子
- 炎性介质脂多糖、γ干扰素活化星形胶质细胞效应被引量：3
- 2008年
- 目的研究炎性介质脂多糖(LPS)、γ干扰素(IFN-γ)刺激离体星形胶质细胞的效应。方法LPS、IFN-γ刺激离体培养纯化的小鼠星形胶质细胞,ELISA检测细胞分泌TNF-α,Griess法测定NO浓度,激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)检测细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)。结果LPS(500ng/ml)、IFN-γ(100U/ml)刺激星形胶质细胞24h后,NO和TNF-α的分泌显著升高,联合应用有协同作用;延长IFN-γ作用时间,分泌量升高。CLSM检测LPS、IFN-γ刺激24h后的星形胶质细胞[Ca2+]i的荧光值,显示荧光相对值比正常细胞明显升高;LPS、IFN-γ急性刺激正常培养细胞发现[Ca2+]i振荡上升;而作用于IFN-γ刺激24h后的细胞,[Ca2+]i上升明显减缓。结论LPS、IFN-γ可以活化星形胶质细胞,表现为[Ca2+]i升高,TNF-α和NO分泌上调。
- 熊加祥白云宋敏许雪青王艳艳杨晓亚
- 关键词：脂多糖Γ干扰素星形胶质细胞活化
- 野生型及突变型survivin基因重组逆转录病毒的构建及表达研究被引量：2
- 2005年
- 目的 构建含绿色荧光蛋白和野生型及第3 4位氨基酸突变型survivin基因的双顺反子逆转录病毒载体,并进行真核细胞表达。方法 用PCR的方法由含survivin基因的真核表达载体扩增所需目的片段,然后将该片段插入逆转录病毒载体pMIG。酶切鉴定重组子,脂质体介导下转染包装细胞PhoenixE ,病毒上清感染NIH3T3细胞,RT PCR检测外源基因mRNA的表达、流式细胞仪检测GFP的表达从而确认外源基因的转录。结果 经琼脂糖凝胶电泳鉴定,目的片段成功的连接到pMIG载体上。载体转染NIH3T3细胞,RT PCR显示目的片段mRNA能够表达,流式细胞仪检测GFP获良好的表达。结论 成功构建了人survivin基因野生型及突变型逆转录病毒,并在NIH3T3细胞进行了表达,为下一步的研究工作提供了有效的分子工具,并且为将来能在体内应用抑制survivin基因表达的肿瘤治疗奠定基础。
- 杨晓亚宋建勋白云
- 关键词：SURVIVIN基因野生型突变型逆转录病毒载体
- 食管鳞状细胞癌survivin表达与其CpG岛甲基化的研究被引量：17
- 2010年
- 目的探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)肿瘤组织survivin基因的表达与其CpG岛甲基化状态的关系。方法采用RT-PCR的方法检测ESCC细胞株、ESCC肿瘤组织及对应的远癌组织中的sur-vivin基因mRNA的表达;采用亚硫酸氢钠修饰后测序法(BSP)检测survivin基因CpG岛甲基化状态。结果ESCC肿瘤组织survivin mRNA表达阳性率为65.5%,而绝大部分远癌组织表达阴性;20例survivin表达阳性的肿瘤组织、survivin表达阴性的远癌组织及5株ESCC细胞所扩增片段中的CpG位点均呈非甲基化状态。结论ESCC组织中survivin的表达与否与其CpG岛的甲基化状态无关,提示该区域的甲基化修饰未参与调控survivin基因的转录。
- 胡华梅杨晓亚熊刚王凯陈雪丹白云
- 关键词：食管鳞状细胞癌甲基化
- 星形胶质细胞调节T细胞因子的分泌
- 星形胶质细胞的免疫调控功能已受到广泛关注.不同状态(静息/活化)的星形胶质细胞可调节T细胞增殖和凋亡,并影响T细胞因子的分泌.Th1和Th2型细胞因子在CNS炎性疾病的发生发展过程中发挥不同角色,本研究利用IFN-γ刺激...
- 熊加祥宋敏许雪青王艳艳杨晓亚白云
- 关键词：星形胶质细胞T细胞细胞因子
- ICOS、4-1BB通过Survivin维持T细胞分裂及存活的研究
- T 细胞发挥功能时间的长短在一定程度上显示了机体免疫力及保护性的强度。T细胞活化至少需要两种信号,第一信号主要来自T 细胞受体/(TCR/)与MHC 分子-抗原肽复合物的特异性结合,此信号诱导细胞表面高亲和力IL-2R ...
- 杨晓亚
- 关键词：ICOSOX404-1BB共刺激SURVIVIN
- 文献传递
