汤世坤
- 作品数：12 被引量：22H指数：3
- 供职机构：北京农学院生物技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市属高等学校人才强教计划资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪圆环病毒2型体外感染后猪血管内皮细胞中共刺激分子和细胞因子的mRNA转录动态
- 将猪圆环病毒2型(PCV2)体外接种猪血管内皮细胞(VEC),同时设立对照,在接种后不同时间收集细胞,用实时荧光定量PCR技术检测CD80,CD86,IL-1β,IL-8,MCP-1及GM-CSF的mRNA转录动态,分析...
- 周双海汤世坤邵小雪
- 关键词：猪圆环病毒2型抗原递呈
- 番茄中WRKY2基因的克隆
- 2011年
- WRKY转录因子在植物应对生物或非生物胁迫的反应及生长和发育中起重要作用,为研究WRKY转录因子在番茄中的功能,本研究根据课题组已经克隆的番茄WRKY转录因子片段设计引物,采用RT-PCR方法,从JA诱导的番茄幼苗中,获得了608bp的cDNA片段。序列分析表明,该序列含有WRKYGQK保守结构域,与Capsicum annuum WRKY-c序列相似性是79%,与Nicotiana tabacum NtWRKY-7序列相似性是74%,表明已经成功克隆了番茄WRKY2基因片段。
- 李娜于涌鲲赵福宽汤世坤孙清鹏于同泉路苹
- 关键词：番茄WRKY转录因子克隆
- 猪圆环病毒2型实时定量PCR检测方法的建立被引量：2
- 2010年
- 用PCR技术从一临床病猪组织中扩增出猪圆环病毒2型(PCV2)417 bp片段,并克隆到pGEM-T Easy载体中,构建成含有PCV2基因片段的重组质粒。应用该重组质粒进行实时荧光定量PCR,建立了PCV2 DNA的实时PCR标准曲线及其直线回归方程。结果显示该方法重复性好,其检测灵敏度达到102拷贝/μL,检测样品时特异性强。此研究表明,所建立的PCV2 DNA实时定量PCR方法具有重复性好、敏感性高与特异性强等特点,能够用于PCV2的定量检测。
- 韩玉环汤世坤周双海刘玉洁朱荣昌吴国娟
- 关键词：PCV2实时定量PCR
- 茉莉酸等3种因素刺激番茄LeWRKY1的表达特征分析被引量：5
- 2010年
- 为了研究LeWRKY1参与植物抗逆反应的分子机理,采用实时荧光定量PCR技术研究了LeWRKY1在番茄灰霉菌(Botrytis cinerea)侵染、茉莉酸(jasmonic acid,JA)、水杨酸(salicylic acid,SA)刺激时的表达情况。结果表明:外源植物激素JA可诱导LeWRKY1的表达,而SA对其无明显诱导作用;番茄灰霉菌侵染可诱导LeWRKY1表达。LeWRKY1可能通过JA依赖而SA非依赖的信号途径参与番茄对番茄灰霉菌防御反应的应答。
- 王丽芳于涌鲲杜希华汤世坤赵福宽孙清鹏
- 关键词：番茄茉莉酸
- 猪圆环病毒2型北京株全基因组的克隆与序列分析被引量：3
- 2009年
- 为探索近年来北京地区猪圆环病毒2型(PCV2)的流行病学和变异规律,用PCR技术从北京不同猪场的临床发病猪和死亡猪病变组织中分别扩增和克隆获得4株PCV2分离株全基因组序列,并进行测定和分析。结果显示,4株PCV2基因组全长均为1 767 nt,其核苷酸同源性高达99%,与其他北京分离株的同源性也达98%以上,与国内外其他地区PCV2的核苷酸同源性也在95%以上。由此表明,各个PCV2分离株在进化方面存在地域相关性。
- 汤世坤张雪周双海王霞泰吴国娟
- 关键词：猪圆环病毒2型全基因组克隆
- 猪GM-CSF荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2009年
- 根据GenBank中猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因序列设计一对引物,用RT-PCR技术从猪外周血单个核细胞中扩增出296 bp cDNA片段,并克隆到pGEM-T Easy载体中。经测序鉴定后,构建出含猪GM-CSF cDNA部分片段的重组质粒。通过重组质粒的Real-time PCR方法,建立了猪GM-CSF cDNA的Re-al-time PCR标准曲线及其直线回归方程。该方法重复性好,敏感性高、特异性强,可用于猪GM-CSF mRNA水平的定量检测。
- 王霞泰蒋伟娇周双海汤世坤刘凤华
- 关键词：GM-CSF荧光定量PCR
- 猪圆环病毒检测技术研究进展被引量：3
- 2007年
- 猪圆环病毒(PCV)具有PCV1和PCV2两种基因型,PCV1无致病性,而PCV2可引起猪断奶后多系统消耗综合征等多种疾病。PCV2相关疾病已给世界养猪业造成了巨大经济损失。因此,建立一套快速、有效的PCV检测方法非常重要。笔者综述了当前PCV的检测技术。
- 汤世坤周双海张广学周志山吴国娟
- 关键词：猪圆环病毒
- 番茄WRKY2基因的克隆(英文)被引量：1
- 2011年
- [目的]研究WRKY转录因子在番茄中的功能。[方法]根据已克隆的番茄WRKY转录因子片段设计引物,以100μmol/LJA处理6h后的番茄总RNA为模板,采用RT-PCR方法。[结果]从JA诱导的番茄幼苗中获得了608bp的cDNA片段,序列分析表明,该序列含有WRKYGQK保守结构域,与Capsicum annuum WRKY-c序列相似性是79%,与Nicotiana tabacum NtWRKY-7序列相似性是74%。[结论]已经成功克隆了番茄WRKY2基因片段。
- 李娜于涌鲲赵福宽汤世坤孙清鹏于同泉路苹
- 关键词：番茄WRKY转录因子克隆
- 茉莉酸等3种因素刺激番茄对LeWRKY1表达的影响分析(英文)被引量：2
- 2011年
- [目的]为了研究LeWRKY1参与植物抗逆反应的分子机理。[方法]采用实时荧光定量PCR技术研究了LeWRKY1在番茄灰霉菌(Botrytis cinerea)侵染、茉莉酸(jasmonic acid,JA)、水杨酸(salicylic acid,SA)刺激时的表达情况。[结果]外源植物激素JA可诱导LeWRKY1的表达,而SA对其无明显诱导作用;番茄灰霉菌侵染可诱导LeWRKY1表达。[结论]LeWRKY1可能通过JA依赖而SA非依赖的信号途径参与番茄对番茄灰霉菌防御反应的应答。
- 王丽芳于涌鲲杜希华汤世坤赵福宽孙清鹏
- 关键词：番茄茉莉酸
- 猪IL-18 mRNA定量RT-PCR检测方法的建立
- 2008年
- 根据GenBank中猪白介素(IL)-18基因序列,设计1对引物,用RT-PCR技术从猪肺泡巨噬细胞总RNA中扩增出其411 bp cDNA片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,经转化、筛选阳性克隆、酶切与测序鉴定后,构建出含猪IL-18 cDNA部分片段的重组质粒。后用反向PCR技术构建出与扩增411 bp片段共用同1对引物,但缺失174 bp的竞争重组质粒。通过上述2种质粒的竞争PCR方法,建立了猪IL-18 mRNA的标准竞争曲线,得到其直线回归方程^y=0.583 2x-2.903 4(R2=0.9898)。
- 王霞泰汤世坤周双海刘凤华
- 关键词：IL-18
