熊伍平
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：广西科学院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区自然科学基金广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 菊粉酶基因的克隆表达、酶学性质研究和分子改造
- 大力发展非粮生物质能源已成为我国能源战略的一个重要组成部分，而果糖基的非粮生物质资源如菊粉等开发利用较少;另外，利用外切菊粉酶通过一步法生产高果糖浆也具有很大的市场竞争潜力。
本研究从马克斯克鲁维酵母(Kluyve...
- 熊伍平
- 关键词：马克斯克鲁维酵母酶学性质分子进化
- 文献传递
- 耐酸耐温α-淀粉酶基因在大肠杆菌中的功能表达
- 2012年
- 兼顾大肠杆菌与枯草芽孢杆菌密码子偏好性,优化获得了1个耐酸耐温淀粉酶的基因amyCN1,并将其在大肠杆菌中实现了功能表达。纯化后的重组α-淀粉酶(AMY1)表征结果表明:在最适pH 5.5和最适温度75℃条件下表观米氏常数(Km)值和催化效率(kcat/Km)值分别为20.93 g/L和98.20 L/(g.s);低浓度的Co2+(1 mmol/L)可以提高30%的淀粉酶活力,Mn2+抑制了大部分活力,包括Ca2+在内的其他金属离子影响不显著;高浓度的EDTA(≥50 mmol/L)抑制其活力;生物信息学分析表明,AMY1具有α-淀粉酶家族典型的3-结构域分布,具有1个Ca2+结合位点和5个Zn2+结合位点,活性中心催化氨基酸残基D198和E222位于(β/α)8桶中β折叠片C端一侧。AMY1优良的低pH耐受性和耐温性,有助于木薯淀粉生产燃料乙醇工业液化与糖化同步发酵工艺的实现。
- 王成华王青艳熊伍平廖思明何冰芳黄日波
- 关键词：淀粉酶耐酸耐温
- 一个外切菊粉酶基因的克隆表达及酶学性质被引量：5
- 2013年
- 从马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)DSM 5418中克隆出外切菊粉酶(INU)的成熟肽编码区域,在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中实现了高效分泌表达,体积酶活力达到15.27 U/mL,进一步对重组酶进行了纯化与表征。经过(NH4)2SO4沉淀、透析和分子筛过滤后,得到了纯度大于95%的纯化重组酶,SDS-PAGE分析发现INU的表观相对分子质量为9.0×104,大于理论预测值6.0×104。纯化酶液的表征结果表明,INU的最适温度和最适pH分别为55℃和5.0,在此条件下INU对菊粉的Km值和比酶活分别为1.90 mmol/L和433.86 U/mg,对蔗糖的Km值和比酶活分别为27.81 mmol/L和1 249.49 U/mg,I/S值为0.34;HPLC分析表明,INU酶解菊粉的产物由果糖和葡萄糖组成;金属离子Mn2+、Fe3+、K+和Co2+对酶有促进作用,而Zn2+、Cu2+、Ni2+、SDS和EDTA对酶活力有不同程度的抑制作用。
- 熊伍平王成华陆雁王青艳申乃坤黄日波
- 关键词：菊粉酶马克斯克鲁维酵母毕赤酵母
