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柞蚕微孢子虫3种孢壁蛋白的提取与鉴定被引量：5: 2011年; 在微孢子虫侵染宿主的过程中,孢壁蛋白扮演着重要的角色。分别采用沸水浴法、SDS法从柞蚕微孢子虫(Nosema per-nyi,Np)孢子中提取孢壁蛋白以及利用发芽后的孢子壳提取孢壁蛋白,对提取的孢壁蛋白进行SDS-PAGE分析和质谱鉴定。结果显示,将发芽后的孢子壳以沸水浴法提取孢壁蛋白最为有效,但操作复杂,部分孢壁蛋白损失严重。初步鉴定从发芽后的孢子壳中提取的编号为P35、P32和P29的3种蛋白属于柞蚕微孢子虫孢壁蛋白,蛋白分子质量分别为35、32、29 kD,其中孢壁蛋白P32的含量最丰富,P35和P29的含量相对较低。根据相应肽指纹图谱预测孢壁蛋白P32的一级结构类似核孔蛋白,可能与孢壁的选择透过性有关,而P35与VASA2n蛋白的一级结构类似,因此有可能与柞蚕微孢子虫的繁殖有关。; 王伯阳姜义仁杨瑞生李艳卓王勇秦利; 关键词：柞蚕微孢子虫孢壁蛋白

柞蚕微孢子虫孢子分离纯化方法被引量：24: 2011年; 柞蚕微粒子病是柞蚕Antheraea pernyi(Guérin-Méneville)的主要胚胎传染性病害,病原为柞蚕微孢子虫Nosema pernyi(Wenet Ding),其病原分离提纯技术研究对于柞蚕微粒子病的防治具有重要意义。本文利用差速离心和Percoll密度梯度离心法研究了柞蚕微孢子虫孢子的分离纯化方法,结果表明,采用不连续密度梯度分离纯化柞蚕微孢子虫孢子的效果比单一浓度的效果好,以浓度为25%、50%、75%、100%不连续梯度,15000r/min离心30min分离纯化得到的柞蚕微孢子虫孢子纯净度高。; 姜义仁邓真华王伯阳段玉玺秦利; 关键词：柞蚕柞蚕微孢子虫分离纯化

柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法被引量：11: 2012年; 利用柞蚕微孢子虫孢子液直接免疫家兔获得柞蚕微孢子虫多克隆抗体后,分别采用双抗夹心法和竞争法制作胶体金免疫层析试纸条,建立能简便、快捷、准确诊断柞蚕微粒子病的柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析检测法。双抗夹心法和竞争法分别是将柞蚕微孢子虫多克隆抗体与25 nm和17 nm的胶体金颗粒结合并固定在金标垫上,然后均将羊抗兔二抗包被在硝酸纤维素膜上作为质控点(C),但是2种方法制作的胶体金免疫层析试纸条的反应模式不同:前者是以柞蚕微孢子虫多克隆抗体作为检测点(T),而后者以柞蚕微孢子虫孢壁蛋白作为检测点(T)。2种方法制作的胶体金免疫层析试纸条的检测时间均为10 min,检测灵敏度为0.8×107个/mL,与柞蚕血淋巴无交叉反应,特异性强,操作简单,其中,以双抗夹心法制作的试纸条显色更清晰,结果更可靠,更具实用价值。; 王伯阳姜义仁臧敏石生林杨瑞生包臣秦利; 关键词：柞蚕微孢子虫胶体金免疫层析双抗夹心法竞争法

柞蚕胚胎发育期蛋白质的2D-PAGE图谱分析被引量：3: 2011年; 采用SDS-PAGE和2D-PAGE技术分析柞蚕胚胎期不同发育阶段的蛋白质组成和含量变化,为从蛋白质水平探讨柞蚕胚胎发育过程中的基因顺序表达模式积累基础信息。SDS-PAGE电泳结果显示:在柞蚕胚胎的发育过程中共分离到相对明显的32条蛋白带,包括分子质量约70、60、30 kD的高丰度蛋白条带,随着胚胎的发育,这些蛋白质含量逐渐减少,而40、15 kD左右的蛋白质含量逐渐增加,到孵化成蚁蚕(324 h)时,分子质量约70、60 kD的蛋白条带基本消失。进一步分析柞蚕胚胎发育不同时期蛋白质的2D-PAGE图谱:蛋白点数量随胚胎发育逐渐增多,胚胎发育12 h检测到370个蛋白点,胚胎发育300 h的蛋白点达到422个;胚胎发育132 h及276 h的蛋白点与胚胎发育早期36 h蛋白点的匹配率分别为52.4%和28.4%。此外,孵化蚁蚕总蛋白2D-PAGE图谱与胚胎期相比存在较大差异。研究结果提示,柞蚕胚胎发育前期,从胚胎形成期到附肢发生期(12～60 h),蛋白质种类相对较少,且变化不大;胚胎发育的气管形成期(228～276 h)开始,蛋白质种类变化剧烈,偏酸性蛋白质增加,蛋白点的匹配率下降。; 王勇李彦卓王伯阳姜义仁杨瑞生樊虹秦利; 关键词：柞蚕蛋白质 SDS-PAGE 双向电泳

柞蚕滞育蛹与非滞育蛹蛋白质表达差异初步分析: 2011年; 柞蚕是以蛹滞育越冬的昆虫之一,研究滞育蛹及非滞育蛹的蛋白质种类及含量的变化规律,有利于其滞育机理的解明。通过SDS-PAGE获得滞育与非滞育雄性柞蚕蛹的蛋白质图谱在分子质量16～105 kD范围内均出现清晰的25条带,其中大小为79、54、48、29 kD的蛋白质表达量较高,79 kD的蛋白质为高丰度表达的大分子质量蛋白质;采用2D-PAGE技术分析,在滞育蛹蛋白质样品中检测到的总蛋白质斑点数为400个,非滞育蛹蛋白质样品中检测到的总蛋白质斑点数为619个,非滞育蛹蛋白质斑点明显增多,二者蛋白点匹配率仅为37%,蛋白质的等电点变化剧烈,差异性较大,匹配率较低。研究结果提示柞蚕蛹滞育过程中蛋白质的数量和种类发生了明显变化。; 李彦卓王勇王伯阳姜义仁任淑文秦利; 关键词：柞蚕滞育蛹蛋白质双向电泳差异蛋白

间接竞争ELISA法对柞蚕微孢子虫的检测被引量：5: 2013年; 柞蚕微孢子虫病是柞蚕唯一的检疫性病害,其致病病原物为柞蚕微孢子虫(Nosema pernyi Ding,Su&Wen),因此,柞蚕微孢子虫的检测对于该病的防治具有重要意义。本文通过制备柞蚕微孢子虫多克隆抗体,建立柞蚕微孢子虫间接竞争ELISA检测法。结果表明,柞蚕微孢子虫多克隆抗体效价为1∶104、浓度为3 mg·mL-1,主要由2条大小约50 ku和25 ku蛋白条带组成,可作为后续试验多克隆抗体材料。间接竞争ELISA法最佳抗原工作浓度为2.0μg·mL-1微孢子虫孢壁蛋白溶液,最佳抗体工作浓度为兔抗血清按1∶102倍浓度稀释,酶标二抗最佳工作浓度为1∶5×104倍稀释,柞蚕微孢子虫间接竞争ELISA检测法的灵敏度为1.6×105spores·mL-1。间接竞争ELISA法在柞蚕微孢子虫的检测方面具有一定的应用价值。; 姜义仁王伯阳孙影王勇石生林杨瑞生段玉玺秦利; 关键词：柞蚕微孢子虫酶联免疫吸附测定多克隆抗体

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王伯阳