王俊楼
- 作品数：14 被引量：186H指数：5
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 应用SDS-PAGE显示小分子多肽技术的探讨被引量：62
- 2001年
- 为探讨显示小分子多肽技术 ,应用SDS PAGE寻找更简单、快捷的分析小分子多肽的方法。采用 8%T ,3%C的丙烯酰胺浓缩胶和含 6mol/L脲 (或含 2 4 %的甘油 )的 16%T ,6%C的丙烯酰胺分离胶的双层不连续SDS PAGE和三羟基甘氨酸电泳缓冲液显示蛋白分子量标准 ( 2 512～16 94 9kD)和待测样品 ,并对蛋白分子量标准在这两种分离胶中进行了回归分析。结果表明在这两种条件下均能显示分子量小至 2 512kD的多肽 ;多肽样品在含脲和在含甘油的 2L T SDS PAGE中均有较好的显带 ;蛋白分子量标准的直线回归系数分别为r =- 0 966和r =- 0 964。它们是显示小分子多肽和估测其相对分子质量及对多肽分子进行进一步分析的更为简便易行的方法。
- 石继红赵永同张英起颜真韩苇王俊楼
- 关键词：SDS-PAGE蛋白质分析方法
- SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析小分子多肽被引量：111
- 2000年
- 目的 研究 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)显示小分子多肽的方法 .方法 观察不同方法处理的样品 ,上样量对电泳结果的影响及对分子量标准 (Mr 2 5 12～ 16 949)进行直线回归分析 .结果 样品的不同处理条件未见有差异 ;在该实验系统条件下上样样品为每孔 5～ 10μg较佳 ;分子量标准直线回归系数 r=- 0 .96 2 .结论 样品处理方便 ;上样量少 ;在 16 0 g· L- 1 T,6 0 g· kg- 1 C较低的丙烯酰胺含 6 mol· L- 1脲的分离胶中能够显示 Mr为 2 5 12的多肽 。
- 石继红赵永同王俊楼韩苇颜真张英起
- 关键词：SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳小分子多肽
- 冻干小鼠神经生长因子的研制
- 2001年
- 目的 研制小鼠神经生长因子 ( NGF) .方法 采用二次阳离子柱层析法 ,从雄性小鼠颌下腺分离提取 2 .5 S神经生长因子 ,建立了稳定的实验室与中试生产工艺 ,以及相应的质量鉴定规程 .结果 从体质量超过 2 5 g,鼠龄大于 60 d的雄性小鼠体内可获得高纯度、高产量、高活性的 2 .5 SNGF.纯度大于 95 % ,与抗 2 .5 S NGF抗体有特异结合能力 ,鸡胚背根神经节培养法测定的生物活性显示 ,其比活性达到 5× 10 8BU· g- 1 ( BU:生物活性单位 )以上 ,各项指标均符合质量鉴定标准 . 2 0 g· L- 1 人血白蛋白做冻干赋形剂 ,能有效保护 NGF的生物活性 .结论 研制了高质量的冻干小鼠神经生长因子 ,为 NGF的临床前和临床研究奠定了基础 .
- 颜真王俊楼王慧韩苇李波赵宁张英起
- 关键词：神经生长因子小鼠纯化生物活性
- EPO模拟肽基因4串联体的构建和表达被引量：13
- 2001年
- 目的 克隆和表达 EPO模拟肽基因 4串联体 .方法 设计了特殊的基因串联方案 ,在人工合成 EPO模拟肽全基因的基础上 ,将 EPO模拟肽基因由单体逐步地连接成 4串联体 .继而将获得的正确 EPO模拟肽 4串联体插入 p BV2 2 0表达载体诱导表达 .结果 构建的 EPO模拟肽基因 4串联体经酶切和 DNA测序分析 ,结果表明该基因串联体的序列与设计的序列完全相同 .EPO模拟肽 4串联体插入 p BV2 2 0载体后 ,重组菌经 42℃诱导 4h,SDS- PAGE分析结果显示 ,该串联体得到较高水平的表达 .凝胶扫描结果表明 ,其表达量约占菌体蛋白总量的 2 0 % .结论 EPO模拟肽基因
- 韩苇颜真王俊楼赵永同石继红张英起
- 关键词：模拟肽大肠杆菌质粒构建
- 血管生长抑制因子基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达被引量：2
- 1999年
- 目的：获得具有高活性的Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ表达，为进一步研究及应用奠定物质基础．方法：用ＰＣＲ法从人纤维蛋白酶原ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ基因中，获得Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ（ｋｒｉｎｇｌｅ１－４）基因，测序验证后，将正确的Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ（Ｋ１－４）序列，插入Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ杆状病毒表达系统，转染昆虫细胞ｓｆ９，表达Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ．结果：获得了正确序列ＡｎｇｉｏｓｔａｔｉｎｃＤＮＡ，并在Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ杆状病毒系统表达．结论：获得有抑制活性的Ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ表达．
- 张菊韩苇颜真赵永同王俊楼张英起苏成芝
- 关键词：血管生长昆虫细胞
- 人血管形成素cDNA克隆和序列分析
- 1999年
- 杨辉颜真韩苇王俊楼赵宁张英起苏成芝
- 关键词：血管形成素聚合酶链反应克隆CDNA
- 热休克蛋白CpkB对nrhTNF体外复性的促进作用被引量：1
- 1999年
- 目的：探讨嗜热菌热休克蛋白CpkB在体外与新型重组人肿瘤坏死因子（nrhTNF）蛋白质复性的关系．方法：在原核细胞中表达并纯化CpkB蛋白;将nrhTNF在8mol／I-W中变性，然后在不同浓度的CpkB存在下进行体外复性，以复性后nrhTNF活性检测指标进行分析结果：在一定浓度下CpkB对nrhTNF的复性有明显的促进作用，最高复性率达到75％，而不使用CpkB的nrhTNF复性率最高仅引％结论：CpkB具有分子伴侣作用，可促进变性蛋白恢复正常结构与功能。
- 颜真张英起王俊楼赵宁朱宝娥苏成芝
- 关键词：肿瘤坏死因子复性
- 嗜热菌热休克蛋白基因的克隆与表达被引量：1
- 1999年
- 目的：克隆和在原核表达系统中表达超嗜热古球菌 Ｋ Ｏ Ｄ１（ｈｙｐｅｒｔｈｅｒｍ ｏｐｈｉｌｉｃ Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓｓｐ． Ｋ Ｏ Ｄ１， Ｈ Ｐ Ｋ）之热休克蛋白基因β亚基（ｃｐｋ Ｂ）． 方法：用 Ｐ Ｃ Ｒ技术从 Ｈ Ｐ Ｋ 基因组 Ｄ Ｎ Ａ 中扩增ｃｐｋ Ｂ基因片段，经克隆和核苷酸序列分析后再克隆至原核表达载体ｐ Ｂ Ｖ２２０，升温诱导ｃｐｋ Ｂ基因表达，利用 Ｃｐｋ Ｂ蛋白的耐高温特性纯化该蛋白． 结果：扩增和克隆了１６ ｋｂ 的ｃｐｋ Ｂ基因，并经 Ｄ Ｎ Ａ 测序证实，实现了ｃｐｋ Ｂ基因在原核系统 Ｐ Ｌ Ｐ Ｒ 启动子控制下的表达，建立了纯化 Ｃｐｋ Ｂ蛋白的方法． 结论：该研究为进一步探讨 Ｃｐｋ Ｂ蛋白的结构与功能奠定了基础．
- 颜真王俊楼韩苇赵永同张英起苏成芝
- 关键词：嗜热菌热休克蛋白基因克隆基因表达纯化
- 胸腺素α_1-硫氧还蛋白融合蛋白基因的表达及其生物学功能的初步研究被引量：9
- 2001年
- 胸腺素α1(thymosinalpha 1,Tα1)作为一种免疫增强剂 ,临床用途广泛。为了大量制备Tα1,按大肠杆菌惯用密码子用人工方法合成Tα1基因 ,克隆于 pUC19的EcoRI和PstI位点 ,经测序证明序列正确后 ,串联为 4串体 (Tα1④ ) ,经再次测序确认后克隆入 pThioHisA的EcoRI和PstI位点 ,转化大肠杆菌TOP10菌种 ,酶切鉴定证明正确后 ,经 1mmol/LIPTG诱导 4h ,获得硫氧还蛋白与Tα1④的融合表达 ,并经Westernblot分析证实。用离子交换柱层析可纯化出硫氧还蛋白与Tα1④的融合蛋白 ,利用3H -TdR掺入法证实 ,该融合蛋白具有刺激小鼠脾淋巴细胞的活性。
- 赵永同石继红赵宁王俊楼颜真韩苇张英起
- 关键词：胸腺素Α1硫氧还蛋白基因克隆纯化
- Angiostatin基因的克隆及在原核细胞中的表达被引量：1
- 1999年
- 目的：获得具有活性ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ 的表达，为进一步开发应用奠定基础． 方法：用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法从人纤维蛋白酶原基因中，获得ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ（ Ｋ１３）的基因，用原核表达载体 ｐ Ｂ Ｖ２２０，表达非融合ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ（ Ｋ１３）． 结果：得到有抑制活性ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ（ Ｋ１３）的表达，但表达量较低． 结论：ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ（ Ｋ１３）可在原核非融合蛋白表达载体中得到表达．
- 张菊颜真韩苇王俊楼赵永同赵宁张英起苏成芝
- 关键词：血管生成因子拮抗剂基因表达内皮生长因子
