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SARS患者脾树突状细胞和巨噬细胞的免疫组织化学观察被引量：1: 2007年; 目的对严重急性呼吸综合征(SARS)患者脾树突状细胞、巨噬细胞数量和巨噬细胞大小进行定量分析,为SARS的病理变化和发病机制的探讨提供证据。方法通过免疫组织化学技术对6例SARS死亡患者脾和6例意外死亡者正常脾S-100+、CD68+、HLA-DR+、CD83+细胞的分布进行观察,并采用图像分析系统对阳性细胞数量或体积进行分析。结果SARS死亡患者脾内白髓中S-100+树突状细胞数较正常平均减少80.49%,有的甚至完全消失;脾红髓中CD68+巨噬细胞数量较正常平均减少39.48%,体积是正常平均值的2.21倍。脾白髓中HLA-DR+抗原呈递细胞明显减少。SARS死亡患者脾与正常脾中均无CD83+成熟树突状细胞。结论SARS患者免疫系统中抗原呈递系统遭到严重破坏,支持SARS是一种病毒性免疫缺陷病。SARS病毒不能引发树突状细胞成熟。巨噬细胞的体积增大处于激活状态,提示巨噬细胞在SARS发病机制中起一定作用。; 战军唐军民唐岩李枫梅芳王国涛顾江; 关键词：树突状细胞巨噬细胞

树突状细胞电转染的优化条件及影响因素被引量：7: 2007年; 目的探讨树突状细胞(DC)电转染的方法、优化条件以及影响DC电转染率和存活率的主要因素。方法提取人肝癌细胞(Bel 7402)RNA,利用淋巴细胞分离液密度梯度法分离人外周血单个核细胞(PBMC),并通过贴壁法获取单核细胞作为树突状细胞前体(pDC)。将pDC置含rhGM-CSF和rIL-4的RPMI-1640培养液内联合培养诱导7d,使之充分分化为未成熟的DC(imDC)。应用电穿孔仪(electroporation apparatus)分别将人肝癌细胞总RNA和绿色荧光蛋白(GFP)电转染至imDC,并设定不同的电压、脉冲时间、细胞浓度、温度和电转染缓冲液等条件。荧光镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数。电转染1d后,用0.4%锥虫蓝染色分别计算其电转染率和存活率。结果当imDC浓度为5×106/ml与40μg的人肝癌细胞总RNA混合,设定电转染仪电压为300V、脉冲时间为500μs时,其电转染率达到最高值,imDC存活率约49.07%。结论电转染提供了一种使人肝癌细胞RNA电转染至imDC的可行技术。影响imDC电转染率的最主要因素是受体细胞imDC的生长状况、电转染的电压及脉冲时间。; 唐岩唐军民战军刘影常昕莹王国涛单铁英苏安英; 关键词：电转染树突状细胞

SARS患者脾淋巴细胞免疫组织化学的定量分析被引量：4: 2005年; 目的对严重急性呼吸综合征(SARS)患者脾淋巴细胞进行定量分析,为SARS的病理变化和发病机制的探讨提供证据。方法通过免疫组织化学技术对6例SARS死亡患者脾和6例意外死亡者正常脾CD3+、CD4+、CD8+T细胞及CD20+B细胞的分布进行观察,并进行图像分析。结果SARS患者脾内的脾小体及动脉周围淋巴鞘(白髓)均遭到严重损害。动脉周围淋巴鞘的数量减少90·39%;脾小体减少80%左右,有的甚至完全消失;脾红髓广泛出血坏死。红髓内的CD3+T细胞平均数较正常减少71·76%,有的甚至完全消失,CD4+T细胞和CD8+T细胞分别平均减少86%和84%。CD20+B细胞减少80%以上。结论定量分析显示,SARS死亡患者脾中T细胞和B细胞普遍严重减少,提示SARS患者免疫系统遭到严重破坏,并可能是疾病的原发性损伤。; 战军唐军民唐岩梅芳王国涛顾江; 关键词：严重急性呼吸综合征 T细胞 B细胞

肿瘤来源的抑制性细胞因子影响树突状细胞的微观流变特性并导致免疫应答恶化被引量：5: 2006年; 现已证明,在肿瘤发生过程中,司职抗原呈递的树突状细胞的功能存在缺陷和紊乱,从而导致了免疫系统的显著受抑和肿瘤的免疫逃逸.为了探索肿瘤的免疫逃逸机制,利用生物物理学和微观流变学的方法研究了肿瘤来源因素对树突状细胞(dendriticcells,DCs)分化过程的影响.发现来源于肿瘤微环境的细胞因子等成分,导致DCs的渗透脆性增加、细胞膜脂流动性显著下降,而且细胞的转录水平和能量状态也明显改变,导致DCs的抗原摄取能力和活化幼稚T细胞的能力显著下降.所以,DCs的微观流变特性的改变也许是肿瘤免疫逃逸机制的一个方面.; 曾柱王国涛许晓风龙金华邢俊杰张颖娱肖俊段学燕唐岩唐军民孙大公; 关键词：树突状细胞免疫逃逸机制渗透脆性膜流动性免疫应答

人单核细胞来源的树突状细胞微观流变学研究: 2005年; 目的探讨不同发育阶段树突状细胞(DC)的微观流变学特性及其差异。方法应用密度梯度离心法从正常人外周血分离获得单个核细胞,经贴壁培养和免疫磁珠阴性选择获取纯化的单核细胞,以此作为DC前体(pDC)在体外培养诱导获得未成熟DC(imDC)和成熟DC(mDC)。并用免疫细胞化学、免疫荧光、酶细胞化学、流式细胞仪等技术对不同发育阶段的DC进行鉴定;应用微观流变学研究方法对以上细胞的电泳率、渗透脆性、膜流动性和傅立叶红外光谱(FT-IR)进行测量和分析。结果改进的分选法所获得的CDl4+pDC>97%。体外加入rhGM-CSF和IL-4培养6d后,S-100+imDC占细胞总数的96.9%;再加入rhGM-GSFI、L-4和TNF-α培养48 h后,CD86+mDC占细胞总数的87%。其微观流变学特性为:mDC电泳率明显高于pDC和imDC(P<0.05);3种细胞均具有较强的抗低渗能力,但imDC最强(细胞未破碎率为27%);mDC的膜流动性最大,其荧光偏整度P值为0.062±0.001(P<0.01);FT-IR显示mDC中的蛋白质二级结构发生了较大变化。结论DC的微观流变学特性随其不同的发育阶段而发生了明显变化。; 王国涛唐军民唐岩战军曾柱文宗耀; 关键词：树突状细胞电泳率渗透脆性膜流动性

人单核细胞来源的树突状细胞微观流变学研究: 目的树突状细胞(Dendritic Cell,DC)并非一类均一的细胞,而是由处于不同发育阶段,具有多种形态、表型和功能不完全相同的DC组成的一个细胞体系,它在发育成熟过程中经历了DC前体(precursorDC,pD...; 王国涛; 关键词：树突状细胞细胞膜流动性

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王国涛