王春平
- 作品数：10 被引量：41H指数：3
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- 鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌双型融合菌株的构建被引量：2
- 2010年
- 以耐药标记的鸭疫里默氏杆菌TXRA1(Chlr,Erys)和大肠杆菌ZBO78(Eryr,Chls)作为亲本菌株,在DnaseⅠ始终存在的条件下,采用Lysozyme-EDTA法制备2菌株的原生质体,原生质体制备率分别达到了92.00%和91.94%,再生率分别达到了38.77%和37.29%。通过PEG法进行2菌株原生质体融合,成功获得31株具有双亲本耐药性(Chlr,Eryr)的融合菌株,并应用双重PCR方法对融合株的部分外膜蛋白A(ompA)基因进行扩增,其中有11株融合菌株能够表达2亲本的ompA基因,有20株仅表达亲本大肠杆菌的ompA基因。融合菌株的形态、染色特性和生化特性等介于2亲本菌株之间,连续传15代后融合菌株的上述性状仍能够稳定遗传。
- 王春平韦强鲍国连崔言顺刘燕邵泽香季权安肖琛闻李建亮
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌大肠杆菌原生质体融合
- 大肠杆菌O78原生质体制备与再生的研究被引量：2
- 2009年
- 以耐药标记的鸭大肠杆菌ZBO78(Eryr,Chls)为亲本菌株,在DNaseⅠ始终存在的条件下,采用溶菌酶-EDTA法制备原生质体,然后在高渗琼脂平板上再生。通过优化溶菌酶-EDTA的工作浓度与作用时间、原生质体不同的处理方式和再生培养基中蔗糖浓度等条件,摸索出ZBO78以0.2g/L溶菌酶作用20min后补加EDTA至终浓度为0.01mmol/L继续作用16min为最佳试验条件,并成功获得了91.94%的原生质体制备率和37.29%的再生率,为下一步进行融合试验提供了依据。
- 王春平韦强鲍国连崔言顺刘燕邵泽香季权安肖琛闻李建亮
- 关键词：大肠杆菌原生质体
- 鸭三大传染病病原特性及防治新技术研究与应用
- 鲍国连韦强刘燕兰新财季权安肖琛闻缪雪荣张先福章红兵郑育良蔡翼虎王春平邵泽香
- 浙江是养鸭大省，鸭产业是该省农民增收的重要产业。但鸭传染性浆膜炎、大肠杆菌(E.coli)病和鸭病毒性肝炎已成为危害养鸭业尤其是小鸭阶段最为严重的三大传染病，占总发病率的85％以上，经济损失严重，为此通过8个项目系统研究...
- 关键词：
- 关键词：养鸭传染病防治兽药制剂
- 鸭肝炎病毒浙江分离株全基因组测序及其VP1基因的序列分析被引量：6
- 2010年
- 利用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术及RACE方法扩增得到鸭肝炎病毒（DHV）浙江分离株Z10的全基因（5′,3′末端序列用RACE法扩增）及4株DHV分离株的VP1基因。结果表明,分离株Z10的全基因片段长7 689 bp,有1个大的开放读码框（ORF）,ORF位于626~7 326位核苷酸,编码2 249个氨基酸。Z10分离株全基因序列与GenBank登录的6株具有代表性的DHV核苷酸序列比对,同源性94.5%~98.4%;所测得的DHV分离株的VP1基因的序列与目前GenBank上发表的具有代表性的DHV-ⅠVP1基因进行比对分析,结果4株Ⅰ型DHV的VP1基因cDNA长度均为714 bp,编码238个氨基酸。4株DHV-Ⅰ之间VP1基因的核苷酸序列同源性为93%~99.7%,氨基酸序列同源性为95.0%~100%;与参考毒株VP1基因的核苷酸序列同源性为92.2%~100%,氨基酸序列同源性为95.0%~100%;表明各分离毒株的亲缘关系较近,属于同一基因群。
- 邵泽香韦强鲍国连崔言顺刘燕王春平季权安李建亮
- 关键词：VP1基因RT-PCR
- 鸭疫里默杆菌原生质体制备与再生条件的研究
- 原生质体融合技术是一种起源于20世纪60年代的微生物育种新技术,至今已经成为菌株改良的重要手段之一,并取得了许多开创性的研究成果。为了探索细菌制苗的新方法、新途径,本研究选用了鸭疫里默杆菌TXRA进行试验,探索其原生质体...
- 王春平韦强鲍国连崔言顺刘燕邵泽香季权安肖琛闻李建亮
- 文献传递
- 鸭疫里默氏杆菌原生质体制备与再生的研究被引量：2
- 2009年
- 以耐药标记的鸭疫里默氏杆菌TXRA1(Chlr,Erys)为亲本菌株,在DNase I始终存在的条件下,采用Lysozyme-EDTA法制备原生质体,然后在高渗琼脂平板上再生。系统地优化了影响原生质体制备及再生的各种条件,摸索出鸭疫里默氏杆菌TXRA1以Lysozyme 0.1 g/L作用20 min后补加EDTA至终浓度为0.01 mol/L继续作用45 min为最佳试验条件,并成功获得了92%的原生质体制备率和38.77%的再生率。
- 王春平韦强崔言顺鲍国连刘燕邵泽香
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌原生质体
- 鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌融合菌株的构建及其双重PCR检测方法的建立
- 本研究从浙江省主要养鸭地区分离到13株鸭疫里默氏杆菌和19株大肠杆菌,药敏试验结果表明浙江省各地区鸭疫里默氏杆菌和大肠杆菌耐药情况非常严重,其中鸭疫里默氏杆菌总体上对多粘菌素、卡那霉素、丁胺卡那、庆大霉素、复方新诺明等药...
- 王春平
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌大肠杆菌原生质体原生质体融合
- 文献传递
- 鸭疫里默氏菌病和大肠杆菌病多重PCR诊断方法的建立被引量：14
- 2010年
- 参考GenBank中鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的外膜蛋白A(OmpA)基因序列,应用PrimerPremier5.0软件在二者高度保守区设计了2对引物,建立了适合鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的快速检测的多重PCR检测方法。以该方法对已分离并保存的鸭疫里默氏菌和大肠杆菌进行PCR扩增,分别扩增出与试验设计相符的670、408bp的特异性DNA片段。将扩增所得的DNA片段进行克隆测序,测序结果表明分别为鸭疫里默氏菌和大肠杆菌OmpA基因序列。该方法对鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的检测下限分别为4×104CFU/mL和3×104CFU/mL。表明所建立的PCR方法具有特异、快速和敏感的特点,可用于诊断鸭疫里默氏菌、大肠杆菌以及两者的混合感染。
- 王春平韦强鲍国连崔言顺刘燕邵泽香季权安肖琛闻李建亮
- 关键词：鸭疫里默氏菌大肠杆菌多重PCR
- 鸭疫里默氏杆菌病和大肠杆菌病多重PCR检测用引物和试剂盒及其检测方法
- 本发明涉及家禽细菌病的诊断技术领域，尤其涉及用于鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌多重PCR检测用引物组试剂盒及其检测方法。该试剂盒包含7个冻存管，其中2个冻存管分别装有2×PCR核心试剂预混物，其它5个冻存管分别装有鸭疫里默氏杆...
- 鲍国连刘燕王春平韦强季权安肖琛闻邵泽香
- 文献传递
- 微生物原生质体融合技术研究进展被引量：17
- 2008年
- 原生质体融合技术在遗传学、动植物远缘杂交育种、生物学、免疫学、兽医学以及医药、食品、农业等方面都有广泛的应用价值,文章就原生质体制备、再生及其融合过程中的影响因素做了综述,另外还对原生质体融合方法和融合子的筛选方法进行了比较,为选择适宜有效的诱导融合方法和筛选方法提供依据。
- 王春平韦强鲍国连刘燕邵泽香季权安
- 关键词：原生质体融合影响因素
