王洪宝
- 作品数：82 被引量：346H指数：11
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- 相关领域：农业科学生物学经济管理医药卫生更多>>
- 秦川牛TNFSF11基因多态性及与体尺性状的相关性
- 2012年
- 为研究秦川牛TNFSF11基因多态性及其与秦川牛体尺性状的相关性,以399头同等饲养条件下的18～24月龄健康秦川母牛为研究对象,采用PCR-RFLP技术结合DNA测序技术检测TNFSF11基因的SNPs位点,并将其与秦川牛体尺性状进行关联分析。结果表明,DNA测序发现在TNFSF11基因第3内含子即34 080bp处(C331区域)和第3内含子34 096bp处(C332区域)分别发生C→T突变和T→C突变;PCR-RFLP分析发现,秦川牛TNFSF11基因C331区域经创造酶切位点后可以被限制性内切酶HincⅡ特异切割为有GG、GH和HH 3种基因型,C332区域可以被内切酶BseLⅠ特异切割为MM、MN和NN 3种基因型;与测序结果比对显示,秦川牛TNFSF11基因C331、C332各酶切基因型与测序结果显示相一致。卡方检验显示,C331位点在所检测牛群中处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),而C332位点则处于Hardy-Weinberg极度不平衡状态(P<0.01);且C331处GH基因型为优势基因型,G等位基因为优势等位基因,处于中度多态状态;C332处基因型MM为优势基因型,M等位基因为优势基因,处于中度多态状态;关联分析表明,C331位点不同基因型个体间在腰高、腰角宽和胸围方面差异显著(P<0.05),C332位点在体斜长和腰高方面差异显著(P<0.05)。经连锁不平衡检测发现,两位点存在一定的连锁特性(r2=0.213),将两突变位点进行单倍型分析可知,HHMM基因型各性状均显著高于其他基因型组合,且多标记位点的组合效应值高于单标记位点。说明TNFSF11基因对秦川牛体尺性状有显著的影响,可以作为秦川肉牛新品系培育早期选择的候选基因,其中组合HHMM可能是影响秦川牛体尺胴体性状的最佳基因型组合,在选育中应加大其选择力度。
- 马向辉昝林森杨宁高建斌朱光星成功王洪宝郝瑞杰付常振姜碧杰詹小立
- 关键词：PCR-RFLP多态性单倍型
- 牛SREBP1基因shRNA序列的筛选及其腺病毒载体的构建与鉴定被引量：2
- 2013年
- 【目的】筛选可靶向干扰牛的SREBP1基因的有效shRNA,构建相应腺病毒载体并包装重组腺病毒,为在细胞水平上研究SREBP1基因的功能和作用机制提供基础。【方法】以秦川牛SREBP1基因为研究对象,首先靶向其编码区(coding sequence,CDS)序列设计并合成6条干扰和1条阴性对照shRNA,并构建表达载体pENTR-U6-shRNA。然后与载体psiCHECK-Ⅱ-SREBP1共转染293A细胞,筛选有效的pENTR-U6-shRNA。其次将筛选的pENTR-U6-shRNA和阴性对照pENTR-U6-NC分别与腺病毒骨架载体pAd/PL-DEST体外重组,得到腺病毒重组载体,并在293A细胞包装扩繁得到高滴度腺病毒,GFP标记法测定病毒滴度。最后将病毒侵染牛前体脂肪细胞,实时荧光定量法(qRT-PCR)检测干扰效率。【结果】筛选出靶向牛SREBP1基因干扰效率为87.4%的shRNA-1053。构建了pAd-1053和阴性对照pAd-NC重组腺病毒载体并包装得到Ad-1053和Ad-NC高滴度病毒,测定得到的病毒滴度分别为7×108 GFU·mL-1和9×108 GFU·mL-1。Ad-1053和Ad-NC分别侵染牛前体脂肪细胞,qRT-PCR检测结果显示Ad-1053可显著降低SREBP1基因的mRNA水平(干扰率>85%),而Ad-NC对SREBP1基因表达无明显影响。【结论】成功筛选得到靶向干扰牛SREBP1基因的有效shRNA,并包装扩繁获得相应的高滴度重组病毒。
- 付常振昝林森王虹成功王洪宝李耀坤姜碧杰高建斌杨宁
- 关键词：SHRNA重组腺病毒
- 秦川牛A-FABP基因的生物信息学分析被引量：17
- 2010年
- 【目的】克隆秦川牛脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因,并对其进行生物信息学分析,为深入研究A-FABP基因与秦川牛肉质性状的关系奠定基础。【方法】以秦川牛脂肪组织为材料,采用RT-PCR方法对牛A-FABP基因进行克隆。使用DNAMAN、NCBI等一系列在线软件及工具,对所得到的序列及其编码蛋白质的结构和特性等进行生物信息学分析。【结果】秦川牛A-FABP基因含有15个酶切位点,编码的蛋白分子质量为14.7 ku,二级结构主要以α-螺旋、不规则盘绕和延伸链为结构元件,含132个氨基酸,其中强碱性氨基酸18个,强酸性氨基酸19个,疏水氨基酸45个,不带电荷的极性氨基酸32个;含有6个蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,3个肉豆蔻酰基化位点,1个FABP结合域;含有4个Ser、6个Thr和1个Tyres,这11个氨基酸均可能成为蛋白激酶磷酸化位点。【结论】秦川牛A-FABP基因编码的氨基酸序列与人、鸡、小鼠、大鼠、野猪的氨基酸序列同源性分别为84.09%,85.61%,71.97%,88.33%,81.82%,表明在进化关系上,A-FABP氨基酸序列有较好的保守性;此蛋白序列具有脂钙蛋白结合域,没有信号肽;无明显跨膜区,不含有二硫键。
- 季舒涵昝林森王洪宝刘艳妍
- 关键词：A-FABP基因生物信息学
- 秦川牛肉用性状功能基因确定及核心群分子育种遗传进展分析被引量：1
- 2010年
- [目的]为加快秦川肉牛肉用新品种的选育进程。[方法]根据秦川牛育种目标性状,采用PCR-SSCP技术分析了21个基因的多态性,找到了4个与秦川肉牛肉用性状紧密连锁的分子标记,初步确定了影响秦川肉牛肉用性状的主要功能基因,并进一步将分子育种技术和常规育种技术紧密结合,应用于秦川肉牛早期选种。[结果]通过育种核心群多育种目标性状相比,生长发育性状的遗传进展最快,其次为繁殖性状和胴体性状,[结论]明显提高了育种工作的效率和准确性。
- 任建存昝林森王洪宝
- 关键词：分子育种
- 秦川牛FABP4基因重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：5
- 2013年
- 【目的】旨在通过构建秦川牛FABP4基因的重组腺病毒载体,为在细胞水平研究FABP4基因的功能和作用机制做准备。【方法】根据GenBank收录的牛FABP4基因mRNA序列设计引物,PCR扩增并克隆测序。将目的基因连接到穿梭载体pAdTrack-CMV上并用PmeⅠ线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的E.coli BJ5183感受态细胞进行同源重组,得到重组质粒pAd-FABP4,并用PacⅠ酶切鉴定。将经过PacⅠ线性化的pAd-FABP4转染HEK 293A细胞进行病毒包装和扩增,TCID50法测定病毒滴度。【结果】经测序鉴定本次克隆的FABP4序列与GenBank收录的一致。酶切鉴定、绿色荧光观察、PCR及测序检测均证明,重组腺病毒载体构建成功并获得重组腺病毒AD-FABP4,病毒滴度为1.58×109PFU.mL-1。【结论】成功构建了秦川牛FABP4基因重组腺病毒载体并获得高滴度的重组腺病毒。
- 魏胜娟昝林森王洪宝成功季舒涵王虹付常振姜碧杰
- 关键词：腺病毒
- 牛Rybp基因的表达特性分析被引量：2
- 2018年
- 【目的】研究牛Rybp基因时空表达图谱,为Rybp基因的功能研究奠定基础。【方法】利用实时定量PCR方法,检测Rybp基因在秦川牛16种组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、睾丸、腹膜脂肪、心包脂肪、背最长肌、里脊、大肠、小肠、瘤胃、网胃、皱胃和瓣胃)、5个不同发育阶段(6,12,18,24和60月龄)肌肉、脂肪组织以及不同分化阶段(第0,2,4,6,8和10天)牛成肌细胞中的表达特性。【结果】Rybp基因在成年秦川牛睾丸组织中的表达量远远高于其他组织,是背最长肌的365倍,而在背最长肌、里脊、心脏等组织中的表达量相对较低。Rybp基因在60月龄肌肉组织中表达量是6月龄的7倍,在6,12,18,24月龄表达量呈微弱上升趋势,但差异不显著;Rybp基因在6,12,18,24月龄脂肪组织中的表达量分别是60月龄的8.5,6.5,5.6和2.1倍,差异达显著水平;Rybp基因在成肌细胞分化第2,4,6,8,10天的表达量分别是第0天的3.6,5.0,9.9,7.0和4.3倍。【结论】随着秦川牛年龄的增加,Rybp基因在肌肉组织中的表达水平逐渐升高,在脂肪组织中的表达水平显著下降;在不同分化阶段成肌细胞中,随着成肌细胞分化进程的推进,Rybp基因表达水平逐渐升高,而当分化减速后,Rybp基因表达水平逐渐降低。牛Rybp基因可能对牛肌细胞分化起抑制作用。
- 赵艳芳张乐王亚宁宁越王洪宝昝林森
- 关键词：实时荧光定量PCR肌肉脂肪成肌细胞
- 成肌细胞融合相关机制的研究进展被引量：2
- 2017年
- 成肌细胞融合对于机体生长发育肌肉的生成和受伤后肌管的再生至关重要。它是一个十分复杂的过程,有一个精确的调控网络控制这一过程的进行与终止。早期研究认为成肌细胞融合需要细胞外钙离子参与、细胞膜形态改变和细胞支架的构建。随着进一步的研究,了解到各种相关信号通路的相互交流,一系列分子的严密调控都在成肌细胞融合过程中扮演重要的角色。论文主要就近年来发现的成肌细胞融合过程中的一些信号通路及调控该过程的影响因子进行综述,以期为改善牛肉品质奠定理论基础。
- 昝林森董梦宇王洪宝张乐
- 关键词：信号通路调控分子
- 一种用A-FABP基因预示秦川牛肉质的分子标记方法
- 本发明公开了一种用A-FABP基因预示秦川牛肉质性状的分子标记方法，根据牛A-FABP基因序列设计一对引物；利用该引物对牛的基因组DNA进行PCR扩增，然后使用聚丙烯酰胺凝胶对PCR产物进行电泳分离，检测出牛A-FABP...
- 昝林森刘艳妍刘永峰郝瑞杰王洪宝
- 世界牛种业科技发展现状及其对我们的启示被引量：3
- 2015年
- 当前世界牛种业科技发展呈现出肉牛种质产品贸易活跃、种业科技创新迅猛发展、传统育种转向精确育种、种质资源和育种技术产权保护意识加强等特点。本文通过全面分析世界牛种业发展现状,针对我国牛种业存在的问题,探讨了世界牛种业科技发展现状对我们的启示,提出加强政策扶持和投入、重视种业高端人才培育、扶持牛种业龙头企业发展和提高种业科技创新能力是我国牛种业实现健康可持续发展亟待思考和解决的问题。
- 昝林森王洪宝成功张莺莺李安宁
- 关键词：种业科技
- 陕甘宁毗邻地区肉牛产业发展现状、问题及对策
- 陕西、甘肃、宁夏三省、区是西北农区畜牧业主产区,其毗邻地区面积18.81万km,辖3省区、12地市、103县区,人口约3187万,肉牛养殖以主产于陕西八百里秦川的秦川牛为主,历史悠久,产业基础良好,是秦川牛的传统产区。经...
- 昝林森辛亚平王洪宝胡建宏权松安成功
- 文献传递
