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诺卡氏菌腈水合酶基因在重组毕赤酵母中的表达被引量：1: 2005年; 为从基因水平上改造腈水合酶,进行了诺卡氏菌腈水合酶基因的外源表达研究。在重组大肠杆菌表达系统内,腈水合酶的α亚基几乎不能正常表达,在重组E.coliBL21(DE3)(pET32aNHBAX)中,腈水合酶活性仅为0.04Umg。构建重组毕赤酵母表达质粒pPIC3.5kNHBAX,采用电穿孔转化法将其转入宿主菌P.pastorisGS115中,经过菌株培养和腈水合酶的诱导表达,筛选获得了优选菌株P.pastorisNH4。对P.pastorisNH4的细胞培养和腈水合酶的诱导表达条件进行优化,结果表明,重组腈水合酶在毕赤酵母中的表达水平可以达到0.52Umg,但不能稳定积累。; 于慧敏史悦田卓玲温斐沈忠耀; 关键词：诺卡氏菌腈水合酶大肠杆菌毕赤酵母

腈水合酶基因克隆与调控表达的研究进展被引量：4: 2004年; 微生物腈水合酶作为新型生物催化剂得到日益广泛的应用 ,但野生菌株本身存在的酶稳定性差等问题制约了这一绿色工艺的发展 ,基因工程菌为解决这个难题开辟了新的思路。总结了各种菌株中腈水合酶的序列研究进展 ,虽然基因序列和蛋白序列同源性不高 ,但它们都以基因簇的形式存在 ,并具有相同的活性中心序列。归纳了克隆并表达腈水合酶基因的基本步骤和方式 ,并提出几种有效增强重组腈水合酶活性表达的方法。; 史悦于慧敏孙旭东田卓玲沈忠耀; 关键词：丙烯酰胺腈水合酶克隆化工原料基因工程菌

诺卡氏菌腈水合酶的催化反应机理探索: ＜正＞微生物腈代谢酶系中腈水合酶作为新型生物催化剂得到日益广泛的应用。确切地了解腈水合酶催化反应机理对于基因工程改造腈水合酶产生菌具有很强的指导意义。一株工业上应用于生物转化丙烯腈生产丙烯酰胺的诺卡氏菌株（Nocard...; 田卓玲史悦于慧敏沈忠耀; 关键词：腈水合酶蛋白质结构; 文献传递

用于微生物培养基有机氮源的废酵母自溶液研究被引量：8: 2003年; 为进一步降低聚 β 羟基丁酸酯 (PHB)的生产成本 ,考察并优化了酵母自溶的影响因素与条件 ,探索采用廉价的废酵母自溶液作为有机氮源替代酵母浸粉的可行性。结果表明 ,自溶反应的最佳初始 pH为 7 0 ;加水比不仅影响酵母细胞的自溶速度和自溶效率 ,而且影响自溶产品的氨基氮终浓度 ,因此最佳加水比的确定取决于最终的经济核算。乙酸乙酯可以成功替代甲苯作为自溶促进剂 ,其优化用量为 3 %～ 4%。进一步以自制的酵母自溶液对重组大肠杆菌VG1( pTU 14 )进行摇瓶培养 ,结果表明 ,当以酵母自溶液为有机氮源替代酵母浸粉时 ,PHB浓度可以提高 2 2 7%以上。因此 ,废啤酒酵母自溶液在PHB的大规模生产中具有广泛的应用前景。; 田卓玲于慧敏沈忠耀; 关键词：啤酒废酵母有机氮源

诺卡氏菌腈水合酶突变基因在重组大肠杆菌中的高活性表达被引量：2: 2007年; 为了提高腈水合酶基因的重组表达水平,提出了3种基因策略:在重组大肠杆菌中共表达激活子序列、在重组毕赤酵母中表达以及对α亚基的起始密码子进行定点突变。结果表明:对α亚基的起始密码子进行定点突变的基因策略为最佳方案,突变后的腈水合酶基因在重组E.coli XL1-Blue(pUC18-NHBAM)中表达时,腈水合酶的比酶活(以干菌质量计)提高到51 U/mg。进一步以pET28a为载体,插入突变后的腈水合酶基因,构建重组菌株E.coli BL21(DE3)/pETNHM。对优选菌株进行培养条件和诱导条件的优化,腈水合酶的最高比酶活达到450 U/mg。; 史悦于慧敏罗晖田卓玲沈忠耀; 关键词：腈水合酶重组大肠杆菌重组毕赤酵母定点突变

诺卡氏菌腈水合酶基因在重组大肠杆菌中的高活性表达: 本研究在对腈水合酶基因进行系统的生物信息学分析的基础上，根据已知的玫瑰色红球菌的序列信息设计引物，利用聚合酶链式反应(PCR)从上述工业菌株的基因组DNA 中调取了一条腈水合酶基因。进一步通过定点突变方法，改变α亚基的稀...; 史悦于慧敏赵晖田卓玲沈忠耀; 关键词：腈水合酶重组大肠杆菌定点突变生物合成生物信息学聚合酶链式反应; 文献传递

重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-NH<'M>和野生诺卡氏菌腈水合酶的催化稳定性研究: 比较并讨论了重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-NHM 和野生诺卡氏菌腈水合酶的产物耐受性和热稳定性，提出了这两种菌株在研究腈水合酶过程中的应用。通过实验测定一定条件下腈水合酶的失活曲线，考察了腈水合酶在无水合反应条...; 朱燕勤田卓玲于慧敏沈忠耀; 关键词：重组大肠杆菌诺卡氏菌腈水合酶; 文献传递

诺卡氏菌腈水合酶基因在重组大肠杆菌中的活性表达: ＜正＞腈水合酶（NHase）以其温和的反应条件、高选择性和高效性,在酰胺、羧酸及其衍生物的合成中具有重要的应用价值。一株工业上应用于生物转化丙烯腈生产丙烯酰胺的诺卡氏菌株（Nocardia sp.）显示出了高水平的酶活...; 史悦于慧敏赵晖田卓玲沈忠耀; 文献传递

产腈水合酶重组大肠杆菌的质粒稳定性研究被引量：16: 2005年; 成功构建了腈水合酶(nitrile hydratase,NHase)高表达的重组大肠杆菌E.coliBL21(DE3)/pETNHM(Kanr),研究了重组质粒pETNHM在重组菌株中的质粒稳定性。结果表明,pETNHM具有较好的结构稳定性,连续传代60代后质粒的基因序列没有明显缺失,且能够正常表达腈水合酶。pETNHM具有分离不稳定性,在无抗生素选择压力下,连续传代48代后质粒丢失的无质粒细胞开始出现。琼脂糖凝胶电泳定量分析表明,2/3的质粒pETNHM以二聚体形式存在,导致质粒拷贝数的下降。进一步研究表明,重组细胞的连续高速分裂及腈水合酶的高表达也会造成质粒拷贝数的下降,从而降低其分离稳定性。反之,重组菌株相对于宿主菌株的较高比生长速率有利于保持含质粒细胞的生长优势,卡那霉素的选择压力则能够保证质粒的稳定遗传。; 史悦于慧敏田卓玲沈忠耀; 关键词：腈水合酶质粒稳定性质粒拷贝数重组大肠杆菌琼脂糖凝胶电泳重组菌株

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田卓玲