田江天
- 作品数：13 被引量：81H指数：5
- 供职机构：吉林大学畜牧兽医学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金黑龙江省海外学人科研资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 东北民猪体细胞核移植及绿色荧光蛋白转基因猪研究
- 刘忠华李玉田王洪斌宋军尹智田江天郑重王振坤孔庆然孙爽马海鲲高力范洪刚
- 该研究针对猪体细胞核移植的特殊性，为建立稳定的体细胞核移植猪的技术体系以及基于体细胞核移植的转基因猪技术体系，主要开展了如下的研究内容：卵母细胞体外成熟培养体系建立；东北民猪、大白猪和长白猪体细胞采集培养及冷冻保存；体细...
- 关键词：
- 关键词：克隆猪核移植
- G1和M期体细胞核在核移植后形态重建模式研究
- 自从世界上第一例体细胞核移植动物“Dolly”绵羊出生后,核移植已经在多个物种取得成功,并且也得到了很多基因修饰的体细胞核移植动物。但不论那个物种,体细胞核移植的成功率都很低。有很多因素影响体细胞核移植的效率,其中受体胞...
- 田江天
- 关键词：体细胞核移植
- 文献传递
- 转基因兔与克隆兔高效胚胎移植体系的建立
- 2011年
- 目的建立高效的转基因兔和克隆兔的胚胎移植实验技术平台。方法通过外科手术移植的方法将受精胚胎、转基因胚胎和体细胞核移植胚胎分别移植到同步发情或异步发情的受体兔输卵管。结果移植受精胚胎、转基因胚胎和体细胞核移植胚胎的受体兔怀孕率分别为100％、66．67％、36.36％，产仔数分别为19、24及17只，仔兔的成活率分别为90.48％、92．31％、17．65％。出生仔兔与移植胚胎数的比率分别为43．75％、21．31％、8．54％。结论成功建立了高效的转基因兔和克隆兔的胚胎移植的实验技术平台。
- 李海滨田江天宋军赖良学顾为望
- 关键词：胚胎移植超数排卵克隆胚胎
- 体细胞核移植克隆民猪:培养液对卵母细胞成熟及胚胎发育的影响被引量：21
- 2007年
- 体外培养成熟的卵母细胞是进行克隆猪研究所需受体卵母细胞的主要来源,卵母细胞成熟质量与体细胞核移植胚胎发育能力关系密切.为提高卵母细胞体外成熟率和成熟质量,进而提高体细胞核移植猪的成功率,本实验以改进的TCM199培养液为基础液(T),分别添加10%的猪卵泡液(T+pFF)和10%的胎牛血清(T+FBS)后进行卵母细胞成熟培养,以成熟率和体细胞核移植胚胎发育率等重要指标为标准,研究了pFF和FBS对卵母细胞成熟及核移植胚胎发育能力的影响.T,T+pFF和T+FBS组在成熟培养后42h卵母细胞成熟率分别为(53.2±3.8)%,(69.7±3.8)%和(70.2±3.7)%,添加10%的pFF和FBS显著(P<0.05)提高了卵母细胞成熟率;3组不同成熟培养液获得的成熟卵母细胞在体细胞核移植后囊胚发育率差异不显著,但T+pFF组的囊胚细胞数(34.5±2.24)显著(P<0.05)高于T组的囊胚细胞数(26.6±1.25).来自T+pFF组的体细胞核移植胚胎经手术法移植入发情周期为第0天或第1天的18头受体母猪输卵管,其中有3头受体母猪妊娠发育到期,获得克隆民猪14头,其中有6头健康成活至今.实验结果表明,培养液中添加10%pFF可以有效提高卵母细胞成熟比例和成熟质量,在含有10%pFF培养液中获得的成熟卵母细胞具有支持核移植胚胎全程发育的能力.
- 刘忠华田江天郑重王振坤宋军尹智高力马海鹍孔庆然孙爽李玉田王洪斌
- 关键词：体细胞核移植体外成熟胎牛血清
- 猪骨髓间充质干细胞的分离培养及核移植后重构胚胎发育能力的研究被引量：5
- 2008年
- 不同类型的细胞核移植效率不同,原因之一可能是不同类型细胞核移植后进行重编程的潜力不同。本实验对猪骨髓间充质干细胞(porcine bone marrow mesenchymal stem cells,pMSCs)体外分离培养的方法进行了优化,对猪骨髓间充质干细胞的增殖及生长特性进行了观察分析,并以其作为供体细胞进行核移植,对此类型细胞进行重编程的潜力进行了评估。结果表明用密度梯度离心法分离猪骨髓间充质干细胞优于全骨髓贴壁法;猪骨髓间充质干细胞数目在培养第6天达到峰值,传代培养10h时,贴壁率达到78.50%;传代培养后第4天分裂指数最高,为24.00‰;以猪骨髓间充质干细胞(pMSCs)和猪胎儿成纤维细胞(PF)分别作为供核细胞构建核移植胚胎,其体外囊胚发育率分别为14.63%与15.07%(P>0.05),孤雌对照组囊胚发育率为30.91%(P<0.05);而三组囊胚细胞数分别为30.67±17.7、24.1±6.5和25.8±11.4(P>0.05)。实验表明,体外培养的猪骨髓间充质干细胞生长增殖旺盛,生物学性状稳定,并适合作为核移植供体细胞。
- 王振坤田江天李秋明武美玲孔庆然郑重于学武雷蕾刘忠华
- 关键词：核移植
- 全细胞胞质内注射法生产猪重构胚的研究(简报)被引量：4
- 2008年
- 自从1997年克隆羊“Dolly”出生以来。体细胞核移植技术得到广泛应用,已经有十余种克隆哺乳动物出生，但克隆效率仍然很低。核移植方法的不够完善是其重要原因之一。传统的核移植方法——电融合法和胞质内注射法虽然都取得了成功。但还存在操作复杂及需要辅助设备等问题。为了能够找出一种既容易操作，又不需要特殊设备的核移植方法，本研究对胞质内注射技术进行了改进,尝试了一种新的核移植方法——非Piezo辅助的全细胞胞质内注射法，即不通过Piezo辅助。不破坏供体细胞膜直接将供体细胞注入卵母细胞内，并且比较了这种方法与电融合法对猪体细胞核移植效率的影响。探讨了非Piezo辅助的全细胞胞质内注射法在猪体细胞核移植上的可行性。
- 孔庆然罗一博田江天王振坤张力刘忠华
- 关键词：体细胞核移植
- 猪卵母细胞c-mos基因表达以及RNA干扰被引量：3
- 2007年
- c-mos基因在动物卵母细胞减数分裂调控中起作用,但其作用机制目前仍不清楚。本实验通过RT-PCR、免疫荧光激光共聚焦检测方法检测了猪卵母细胞在体外成熟培养过程中c-mos基因在转录水平、翻译水平上的表达以及蛋白的分布,并应用注射小干扰RNA(siRNA)方法对其进行了RNA干扰(RNAi)研究。结果显示,猪卵母细胞在体外成熟培养过程中c-mos基因mRNA量逐渐增高,电激活后6h接近完全降解;MOS(c-mos基因蛋白产物)在GV卵母细胞生发泡中有一定量的表达,生发泡破裂(GVBD)前表达量增加且开始向卵母细胞胞质弥散,成熟培养44h未成熟卵母细胞中的MOS表达量要高于成熟卵母细胞,激活后6h核区MOS明显减少,但仍然有少量MOS分布于胞质中;成熟培养前干扰c-mos基因,所用三个siRNA都能成功敲低mRNA量,分别是同时期对照组mRNA量的0.08±0.03,0.11±0.06和0.20±0.06倍,干扰后虽然没有完全剔除MOS,但MOS量比同期卵母细胞有明显下降,仍可以引发成熟卵母细胞染色体解凝集。研究结果揭示了猪卵母细胞体外成熟及发育进程中c-mos基因在转录和翻译水平上的动态表达规律,建立了猪卵母细胞c-mos基因RNAi体系,为MOS在猪卵母细胞发育过程中的功能研究建立了重要的基础。
- 刘丽清田江天格日乐其木格孙爽赵祥杰宋军张永富李玉田刘娣刘忠华
- 关键词：卵母细胞RNAI
- 转基因兔制备技术及影响因素研究
- 遗传修饰的实验动物是研究基因功能的有力工具,通过它们我们可以直接检测病理学过程中,结构与功能以及病因与症状之间的关系。目前,转基因小鼠已经成为研究部门广泛采用的研究工具。但是,为了能让动物上的研究成果更好的服务于人类,还...
- 田江天
- 关键词：体细胞核移植病毒侵染转基因
- 文献传递
- 利用体细胞核移植技术生产表达绿色荧光蛋白转基因猪胚胎的研究被引量：12
- 2008年
- 试验对脂质体转染猪胎儿成纤维细胞的技术程序进行了筛选,以绿色荧光蛋白基因转染后的阳性细胞作为体细胞核移植的核供体,以体外成熟卵母细胞为核受体构建了绿色荧光蛋白转基因克隆猪胚胎,并对重构胚在体外发育情况以及绿色荧光蛋白表达情况进行了跟踪研究。结果显示,采用4.0μg.mL-1脂质体转染试剂,1.6μg.mL-1质粒DNA,转染6 h可以获得最佳转染效果,转染效率达4.48%;GFP转基因体细胞重构胚体外囊胚发育率为10%,GFP阳性胚胎率为48%。结果表明,脂质体转染试剂可以高效转染猪胎儿成纤维细胞,获得的阳性细胞具有支持猪全程发育的潜能。
- 宋军王振坤孔庆然赵祥杰刘丽清田江天郑重孙爽尹智刘忠华
- 关键词：转基因绿色荧光蛋白核移植脂质体
- 猪精液颗粒冷冻技术的研究被引量：10
- 2008年
- 为提高猪冻精质量,加速猪冻精在生产上的应用,本试验以解冻后的精子活率、顶体完整率和体外受精(IVF)结果作为判定指标,探讨了冷源和Equex.STM对猪精液颗粒冷冻效果的影响。手握法采集成年、健康种公猪精液,分别采用含有Equex.STM的稀释液和普通稀释液进行两步法稀释,然后以干冰或液氮为冷源进行精液冷冻。结果表明,以干冰为冷源滴冻精液冻后活率为0.487833±0.046761,顶体完整率为0.782±0.039704,而以液氮为冷源的方法冻后活率为0.3334±0.055734、顶体完整率为0.5578±0.068482,前者在这两项指标上均显著优于后者(P<0.05)。另外,在稀释液中添加Equex.STM,以干冰为冷源进行滴冻,可使冻精顶体完整率极显著提高(P<0.01)。以含有Equex.STM的稀释液采用干冰滴冻的冻精进行IVF,胚胎卵裂率、囊胚率分别为0.5316±0.125582和0.216±0.053198。结果表明,采用Equex.STM作为冷冻保护剂并以干冰作为冷源可以获得高质量的猪冷冻精子。
- 赵祥杰李玉田孙爽宋军刘丽清尹智田江天郑重刘娣刘忠华
- 关键词：干冰冷冻精子
