石永乾
- 作品数：11 被引量：10H指数：2
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：转基因生物新品种培育专项黑龙江省杰出青年科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一种提高猪体细胞核移植效率的方法
- 本发明公开了一种提高猪体细胞核移植效率的方法，属于繁殖或授精方法领域。通过用小分子药物Calyculin A处理供体细胞，诱使供体核染色质凝聚、甲基化升高和乙酰化降低，体细胞核表观遗传修饰的“归零”，然后进行核移植，构建...
- 孔庆然刘忠华石永乾朱江王娟
- 文献传递
- 慢病毒载体介导的绿色荧光蛋白转基因标记与猪嵌合体的制作
- 嵌合体是指将两种或多种具有不同遗传性状的胚胎或多能性细胞和早期胚胎聚合或经显微注射后所发育产生的一个个体。嵌合体是发育生物学研究非常重要的技术手段,同时嵌合体发育,尤其是生殖系嵌合已经成为多能性干细胞发育潜能的重要鉴定标...
- 石永乾何文腾周洋孔庆然刘忠华
- 关键词：慢病毒载体绿色荧光蛋白聚合法诱导性多能干细胞
- 文献传递
- 慢病毒载体介导的绿色荧光蛋白转基因标记与猪嵌合体的制作
- 石永乾何文腾周洋孔庆然刘忠华
- 关键词：慢病毒载体绿色荧光蛋白聚合法诱导性多能干细胞
- 慢病毒载体介导的绿色荧光蛋白转基因标记与猪嵌合体制作研究
- 嵌合体是指将两种或多种具有不同遗传性状的胚胎或多能性细胞和早期胚胎聚合或经显微注射后所发育产生的一个个体。嵌合体是发育生物学研究非常重要的技术手段，同时嵌合体发育，尤其是生殖系嵌合已经成为多能性干细胞(胚胎干细胞、诱导性...
- 石永乾
- 关键词：慢病毒载体绿色荧光蛋白诱导性多能干细胞
- 文献传递
- 猪四倍体胚胎制作及早期发育初步研究
- 2n/4n嵌合体胚胎在胚胎发育调控机理的研究、基因缺陷动物模型的建立和动物克隆方面有着特殊的应用价值。四倍体胚胎能通过抑制早期胚胎的卵裂或者卵裂球的融合来实现。抑制早期胚胎卵裂是采用只抑制胞质分裂，而不抑制核分裂的化学药...
- 何文腾焦明霞石永乾周洋孔庆然尹智刘忠华
- 关键词：发育调控
- TSA浓度及处理时间对猪体细胞核移植胚胎体外发育影响被引量：3
- 2011年
- 曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂。有研究表明TSA处理可以提高核移植胚胎的发育率。为探讨TSA对猪核移植胚胎发育的作用,试验重点研究了TSA浓度及处理时间对核移植胚胎体外发育的影响,同时也探索了TSA对不同供核细胞构建的重构胚体外发育的影响。结果表明,40nmo·lL-1的TSA处理核移植胚胎可以显著提高其体外囊胚发育率;40nmo·lL-1TSA处理重构胚12和24h,两组重构胚的卵裂率与囊胚发育率差异不显著;40nmo·lL-1TSA处理12h对不同供核细胞构建的重构胚均具有提高囊胚发育率的效果,不同供核细胞所构建的重构胚发育率无显著差异。由此可知,40nmo·lL-1TSA处理12或24h可以提高猪体细胞核移植胚胎体外发育能力。
- 黄波郇延军石永乾王峰何文腾张鑫淼刘仲凤朱江吕明刘忠华
- 关键词：曲古抑菌素A体细胞核移植体外发育
- TSA促进转基因猪体细胞核移植胚胎发育和外源基因表达被引量：6
- 2011年
- 不完全的表观遗传重编程是造成转基因克隆动物效率低下的主要原因,组蛋白修饰作为表观遗传修饰的一个重要部分,可以直接影响克隆胚胎的发育和外源基因的表达情况。TSA(Trichostatin A)作为一种组蛋白去乙酰化抑制剂,可以改变组蛋白的乙酰化水平,促进表观遗传重编程,提高克隆动物的效率。同时TSA能改变染色质结构,使转录因子易于与DNA序列结合,促进外源基因的表达。文章确定了TSA处理转基因猪成纤维细胞和核移植胚胎的最佳条件,分别为250 nmol/L、24 h和40 nmol/L、24 h,通过进一步正交实验发现,TSA同时处理供体细胞和克隆胚胎可以显著的促进核移植胚胎的体外发育。此外,无论TSA处理转基因猪成纤维细胞或核移植胚胎,都可以提高外源基因的表达水平。
- 孔庆然朱江黄波郇延军王峰石永乾刘仲凤武美玲刘忠华
- 关键词：TSA体细胞核移植胚胎发育外源基因表达
- 甲基-β-环化糊精对猪体外受精及早期胚胎发育的影响
- 2012年
- 为了优化猪体外受精技术体系,本试验探索了甲基-β-环化糊精(methyl-beta-cyclic dextrin,MBCD)对猪体外受精以及早期胚胎发育的影响。在体外受精0和4 h向受精液(modified Tris-buffered medium,mTBM)中添加不同浓度(0,0.5,1,2,5,10,15,20μmol/mL)的MBCD,受精孵育结束后转至PZM-3培养液中进行胚胎培养。对各处理组卵母细胞的受精情况以及胚胎发育能力进行了系统的检测,并用金霉素(chlortetracycline,CTC)染色法评估了MBCD处理后精子获能状态。结果显示:1)体外受精0 h添加5μmol/mL MBCD组的卵裂率、囊胚率、囊胚细胞数显著高于(P<0.05)对照组和除10μmol/mL MBCD组之外的其他试验组。2)体外受精0 h添加5和10μmol/mL MBCD组、单精入卵率显著高于(P<0.05)对照组和其他试验组,而多精入卵率显著低于(P<0.05)对照组和其他试验组。3)添加5μmol/mL MBCD组,0～1 h,F型精子迅速减少(78.56～19.43),B型精子迅速增加(10.79～69.86);1～4 h,F型精子和B型精子基本保持不变(B型:69.86～78.78,F型:19.43～9.11)。上述结果表明在体外受精0 h向mTBM中加入5μmol/mL MBCD可以显著提高获能精子比例,减少多精受精发生,提高早期胚胎发育潜能。
- 吕明何文腾焦明霞郇延军石永乾孔庆然刘忠华
- 关键词：体外受精精子获能
- 慢病毒载体介导的绿色荧光蛋白转基因标记法研究猪嵌合体制作
- 2012年
- 目的:通过建立慢病毒载体感染猪胚胎体系实现胚胎标记,进而研究不同发育阶段猪孤雌胚胎之间的嵌合能力,为进一步研究猪早期胚胎发育以及细胞分化奠定基础。方法:首先,通过显微注射的方法把2×109I.U./ml、2×108I.U./ml和2×107I.U./ml三个梯度的表达绿色荧光的慢病毒载体分别注射到猪1-细胞胚胎和2-细胞胚胎的透明带下,进行胚胎的GFP转基因标记,在荧光显微镜下观察比较卵裂率、阳性胚胎率、囊胚率、阳性囊胚率和囊胚细胞数。然后,采用凹窝聚合法对同步发育胚胎在不同阶段(2-细胞,4-细胞,8-细胞)进行嵌合,2-细胞胚胎与不同发育阶段(2-细胞、4-细胞、8-细胞)胚胎进行嵌合以及2-细胞胚胎卵裂球互换制作嵌合体胚胎,发育到囊胚时在荧光显微镜下检测胚胎的嵌合状态。结果:2×109I.U./ml的慢病毒感染猪2-细胞胚胎组中,体外受精和孤雌胚胎感染阳性率(80.00%、76.36%)和阳性囊胚率(90.74%、89.56%)都显著高于其它滴度组(P<0.05),另外,慢病毒感染的两种胚胎与对照组对卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数三个指标没有显著影响(P>0.05)。2-细胞胚胎之间嵌合囊胚率和2-细胞卵裂球互换嵌合囊胚率(53.85%、62.50%)显著高于2-细胞胚胎与4-细胞胚胎的嵌合率(18.60%,P<0.05),在同步发育胚胎中8-细胞胚胎之间的嵌合率(75.00%)高于4-细胞胚胎之间和2-细胞胚胎之间的嵌合率(65.00%、53.80%)。结论:2×109I.U./ml的慢病毒感染2-细胞期胚胎效率最高,另外,慢病毒感染对猪胚胎发育没有明显影响。8-细胞间的嵌合率比较高;发育同步胚胎间的嵌合率高于发育非同步胚胎间的嵌合率。
- 石永乾何文腾周洋焦明霞解炳腾胡魁孔庆然刘忠华
- 关键词：慢病毒载体绿色荧光蛋白聚合法嵌合
- 一种提高猪体细胞核移植效率的方法
- 本发明公开了一种提高猪体细胞核移植效率的方法，属于繁殖或授精方法领域。通过用小分子药物Calyculin A处理供体细胞，诱使供体核染色质凝聚、甲基化升高和乙酰化降低，体细胞核表观遗传修饰的“归零”，然后进行核移植，构建...
- 孔庆然刘忠华石永乾朱江王娟
