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可溶性弓形虫速殖子抗原联合蜂胶和IFN-γ鼻内免疫小鼠诱导的细胞免疫应答被引量：17: 2006年; 目的比较蜂胶、IFN-γ佐剂以及两种佐剂混合鼻内免疫辅助STAg增强机体细胞免疫应答的水平，探讨两种佐剂联合应用的免疫效果。方法将5～6周龄雌性BALB／c小鼠60只随机分为4组：20μg STAg组，20μg STAg＋40μg蜂胶组，20μgSTAg＋1000U IFN-γ组和20μg STAg＋40μg蜂胶＋1000U IFN-γ组。将抗原和佐剂溶于20μl PBS中，双侧鼻孔（10μl／鼻孔）滴鼻免疫。免疫2次，间隔14d，末次免疫后第10d用RH株弓形虫速殖子4×10^4个／只灌胃攻击。逐日观察小鼠存活情况。攻击后第43d处死全部存活小鼠，免疫细胞化学（ICC）法检测小鼠PP结、IEL和脾T淋巴细胞亚群水平。结果与STAg组相比，各佐剂组小鼠T淋巴细胞亚群比例有升高的趋势，其中IFN-γ、蜂胶＋IFN-γ佐剂组小鼠PP结CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞，IEL、脾CD8^＋T淋巴细胞数显著高于STAg组，CD4^＋／CD8^＋T淋巴细胞比值倒置。结论在抗弓形虫感染中，IFN-γ的佐剂作用优于蜂胶，有效激发机体细胞免疫应答，可用作鼻内免疫抗弓形虫感染的粘膜佐剂。IFN-γ＋蜂胶佐剂鼻内免疫效果优于单独蜂胶、IFN-γ佐剂，应用联合佐剂是抗弓形虫感染免疫的一个新思路。; 殷国荣刘成芳刘娟娟管志玉石蓉张宇斌银晶晶; 关键词：可溶性速殖子抗原 IFN-Γ 蜂胶鼻内免疫细胞免疫粘膜免疫

不同佐剂的弓形虫复合黏膜疫苗鼻内免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答被引量：3: 2006年; 目的比较IFN-γ、蜂胶佐剂以及两种佐剂混合鼻内免疫辅助可溶性速殖子抗原(STAg)增强机体黏膜免疫应答的水平,探讨两种佐剂联合应用的免疫效果。方法将5～6周龄雌性BALB/c小鼠60只随机分为4组(各15只):20μgSTAg,20μgSTAg+40μg蜂胶,20μgSTAg+1000UIFN-γ或20μgSTAg+40μg蜂胶+1000UIFN-,γ均溶于总体积为20lμ的PBS中,滴鼻免疫(10lμ/鼻孔),免疫2次,间隔14d。末次免疫后第10天用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击。攻击后第43天处死全部存活小鼠,比较各组小鼠肠黏膜小肠上皮内淋巴细胞(IEL)、PP结T淋巴细胞数;检测小鼠粪便、鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液中弓形虫特异性sIgA含量。结果各佐剂组小鼠IEL、PP结T淋巴细胞数显著高于STAg组,黏膜sIgA含量显著高于STAg组;蜂胶+IFN-γ联合组小鼠黏膜免疫应答水平高于单独佐剂组,其中显著高于蜂胶组(P<0.05)。结论IFN-γ作为弓形虫黏膜疫苗佐剂的效应优于蜂胶,IFN-γ+蜂胶作为复合黏膜佐剂鼻内免疫效果优于两者单独应用。; 刘成芳殷国荣刘娟娟管志玉石蓉张宇斌; 关键词：可溶性速殖子抗原鼻内免疫黏膜疫苗

CpG寡核苷酸作为黏膜佐剂的研究进展: 2006年; 含未甲基化的CpG二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸模体(CpG ODN)具有很强的黏膜佐剂活性,已成为近年来的研究热点之一。应用CpG ODN与各种病毒和细菌抗原进行了大量实验研究,所涉及的黏膜免疫途径包括滴鼻、口服和生殖道。CpG ODN可与传统的黏膜佐剂CT和LT产生协同效应,对人体无毒副作用,是一种极具应用前景的黏膜佐剂。目前认为,CpG ODN的佐剂效应发挥与TLR9识别和后续的一系列信号转导密切相关。; 石蓉殷国荣; 关键词：CPG ODN 黏膜免疫佐剂

小鼠腹水中弓形虫排泄分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的免疫应答被引量：7: 2007年; 目的观察弓形虫感染小鼠腹水中分离的排泄-分泌抗原（excreted/secreted antigens,ESA）鼻内免疫小鼠对不同粘膜部位和系统的免疫效应。方法将5～6周龄BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只,实验组分别用从感染弓形虫后24、48、72 h小鼠腹水中提取的ESA 20μg/只鼻内免疫小鼠2次,间隔2周;对照组用20μl/只PBS滴鼻。观察小鼠健康和死亡情况,记录体重。末次免疫后第3周处死小鼠,计数PP（Peyer’s patches）个数;分离PP淋巴细胞、脾淋巴细胞、小肠上皮内淋巴细胞（intraepithelial lymphocyte,IEL）及肠系膜淋巴结细胞（mesenteric lymph node lympho-cyte,MLNL）并计数。眼眶采血和收集直肠内粪便,ELISA检测血清特异性IgG水平及粪便sIgA。结果72 h ESA组小鼠免疫后健康状况较差,体重逐渐降低,死亡4只;其他组小鼠体重仍呈增高趋势。各实验组小鼠IEL、MLNL、脾淋巴细胞以及PP淋巴细胞的增殖活性均高于对照组（P〈0.05）,72 h和48 h ESA组高于24 h ESA组（P〈0.01）。免疫后第3周,各实验组小鼠血清IgG、粪便sIgA水平均高于对照组（P〈0.05）,72 h和48 h ESA组高于24 h ESA组（P〈0.01）。结论感染后不同时间提取的腹水弓形虫ESA鼻内免疫小鼠均可诱导不同粘膜部位及系统特异性的免疫应答,48 h ESA的免疫效果最好。; 刘娟娟殷国荣管志玉石蓉张宇斌孟晓丽; 关键词：弓形虫鼻内免疫粘膜疫苗

弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的肠IEL持续性免疫应答被引量：11: 2006年; 目的采用可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen,STAg)和霍乱毒素(choleratoxin,CT)佐剂制备弓形虫复合黏膜疫苗,观察经滴鼻免疫BALB/c小鼠后诱导的肠上皮内淋巴细胞(intraepitheliallymphocytes,IEL)免疫应答及持续时间,探讨其抗弓形虫感染的作用机制。方法BALB/c小鼠96只随机分为实验组和对照组,实验组以免疫原性好的STAg(20μg/只)为抗原和CT(1μg/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次(间隔2周)后分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死小鼠。制备肠IEL细胞悬液,计数并涂片;免疫细胞化学法(immunocytochemistry,ICC)检测CD4+T、CD8+T细胞亚群水平。结果免疫后肠IEL显著增生,第2周达高峰,第1周至第4周(P<0.01)高于对照组。其中以CD8+T细胞增生为主,CD8+T细胞水平第2周达高峰,第1周至第6周增高显著(P<0.01),CD4+T细胞也略有增生,第2、3周(P<0.05)有显著性,CD4+/CD8+比值倒置,第1、2周明显低于对照组(P<0.05)。结论弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导肠IEL免疫应答,且可持续较长时间,在预防弓形虫感染中起重要作用。; 殷国荣孟晓丽王海龙石蓉刘娟娟管志玉; 关键词：弓形虫黏膜疫苗滴鼻免疫 STAG

CpG寡核苷酸和霍乱毒素联合STAg滴鼻免疫小鼠诱导的弓形虫特异性免疫应答: 目的：确定CpG寡核苷酸(CpGoligonucleotide，CpGODN)作为可溶性速殖子抗原(solubletachyzoiteantigen，STAg)的最佳剂量，观察最佳剂量的CpGODN和STAg鼻内免疫小鼠...; 石蓉; 关键词：STAG CPG寡核苷酸霍乱毒素黏膜佐剂黏膜疫苗; 文献传递

STAg联合CpG ODN和CT鼻内免疫小鼠诱导的特异性抗体应答和脾淋巴细胞的特异性增殖反应被引量：5: 2008年; 目的观察可溶性速殖子抗原(STAg)联合CpG寡核苷酸(CpG ODN)和/或霍乱毒素(CT)鼻内免疫BALB/c小鼠后血清IgG、肠冲洗液IgA抗体水平及脾淋巴细胞体外特异性增殖反应,探讨CpG ODN和CT的佐剂效应。方法6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为5组,分别用20μl PBS(PBS组)、20μg STAg(抗原组)、20μg STAg+10μgCpG ODN(CpG佐剂组)、20μg STAg+1μg CT(CT佐剂组)、20μg STAg+1μg CT+10μg CpG ODN(联合佐剂组)滴鼻,间隔2周,免疫2次。末次免疫后第20 d颈椎脱臼处死小鼠,收集血清和肠冲洗液,ELISA法检测血清弓形虫特异性IgG和肠冲洗液IgA。分离脾淋巴细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测致敏脾淋巴细胞体外增殖活性。结果ELISA法测定PBS组、抗原组、CpG佐剂组、CT佐剂组及联合佐剂组小鼠血清IgGA值分别为0.025 6±0.012 1、0.054 2±0.024 4、0.109 4±0.007 5、0.110 1±0.009 1和0.124 6±0.013 7,肠冲洗液IgAA值分别为0.141 8±0.030 2、0.415 2±0.080 70、.526 9±0.075 40、.846 5±0.115 5和1.128 9±0.100 3,脾淋巴细胞刺激指数SI分别为1.159 0±0.275 5、1.364 0±0.349 8、1.582 0±0.375 3、1.928 0±0.278 9和2.371 0±0.646 9,差异均有统计学意义(P<0.01);联合佐剂组肠冲洗液IgA水平和脾淋巴细胞的SI值与CpG佐剂组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论STAg联合CpG ODN和/或CT鼻内免疫小鼠可有效诱导机体免疫反应,两种佐剂联合免疫的效果优于单一抗原或抗原联合单一佐剂。; 马广源石蓉殷国荣刘红丽孟晓丽; 关键词：可溶性速殖子抗原 CPG寡核苷酸鼻内免疫粘膜佐剂

不同剂量STAg滴鼻免疫小鼠诱导的抗弓形虫感染作用被引量：37: 2006年; 目的观察不同剂量可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)滴鼻免疫小鼠诱导抗弓形虫感染作用,确定STAg滴鼻免疫最佳剂量。方法BALB/c小鼠50只随机分为5组,实验组分别用5μg、10μg、20μg、30μg STAg/只滴鼻免疫小鼠2次,间隔2周,对照组用PBS滴鼻。末次免疫后第14d,用4×104个速殖子/只灌胃攻击全部小鼠,观察小鼠健康和死亡情况,记录体重。攻击后第30d检测粪便IgA和血清IgG,计数脾、脑组织内弓形虫速殖子,分离并计数小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)。结果20μg和30μg组小鼠存活率高于5μg、10μg及对照组。攻虫后对照组小鼠体重逐渐降低,而5μg组,10μg组(P<0.05),20μg组(P<0.05)和30μg组(P<0.05)小鼠体重仍呈增高趋势。20μg和30μg组脾、脑组织内虫荷(速殖子数)显著低于5μg、10μg组和对照组(P<0.05),实验组粪便IgA,血清IgG及IEL数量高于对照组。结论不同剂量STAg滴鼻免疫小鼠均可诱导抗弓形虫感染。; 孟晓丽殷国荣刘红丽石蓉张宇斌马秀瑞; 关键词：STAG 滴鼻免疫弓形虫黏膜免疫黏膜疫苗

不同剂量CpG ODN联合STAg鼻内免疫BALB／c小鼠诱导的免疫应答被引量：5: 2006年; 目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原（STAg）与不同剂量的CpG ODN联合滴鼻免疫小鼠的免疫效果，探索CpG ODN佐剂最佳剂量。方法 5-6周龄BALB／c小鼠50只随机分为5组，每组10只，实验组以20μg STAg联合不同剂量CpG ODN佐剂滴鼻免疫小鼠，佐剂剂量分别为0、1、5、10μg，对照组以PBS滴鼻，间隔2wk免疫2次。末次免疫后30d断颈处死全部小鼠，分离脾、Peyer＇s patch（PP结）、肠系膜淋巴结（MLN）和IEL淋巴细胞，观察淋巴细胞增殖情况。用ELISA的方法检测血清IgG和粪便IgA含量。结果与PBS组和0剂量佐剂组相比，10μg CpG ODN联合STAg免疫后，小鼠肠粘膜淋巴组织和脾淋巴细胞增殖明显（P〈0．05）。10μg组血清IgG远高于对照组（P〈0．05），粪便IgA高于对照组（P〉0．05）。结论 CpG ODN可作为STAg的粘膜佐剂，10μg CpG ODN与STAg联合具有最佳的免疫效果。; 石蓉殷国荣管志玉刘娟娟张宇斌孟晓丽; 关键词：刚地弓形虫 STAG ODN 鼻内免疫粘膜佐剂

STAg联合CpG ODN滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答被引量：1: 2009年; 目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)联合CpG寡核苷酸(CpG ODN)滴鼻免疫BALB/c小鼠诱导的免疫应答,探讨CpG ODN的佐剂效应。方法将72只雌性BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,每组36只。实验组以20μgSTAg联合10μg CpG ODN滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻,共免疫2次,间隔2周。于末次免疫后第1、2、3、4、5、6周每组分别随机处死6只小鼠,ELISA法检测血清IgG和小肠冲洗液sIgA,分离脾和肠上皮内淋巴细胞(iIEL)并计数。结果实验组小鼠血清IgG水平在末次免疫后第1周即显著高于对照组,在5周内呈持续上升趋势,至第6周出现下降。实验组小鼠小肠冲洗液sIgA水平在各个时间点均高于对照组,第2～6周差异有统计学意义。实验组小鼠脾淋巴细胞和iIEL数量均明显增生,脾淋巴细胞数量在第3周时达高峰,第2～6周显著高于对照组;iIEL数量分别在第2、4周出现2个峰值,第2、3、4周显著高于对照组。结论STAg与CpG ODN联合滴鼻免疫BALB/c小鼠,可有效诱导黏膜部位和系统的体液免疫和细胞免疫应答,且可持续较长时间。; 武云香石蓉殷国荣孟晓丽张杰; 关键词：可溶性速殖子抗原 ODN 滴鼻免疫免疫应答

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石蓉

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