窦文文
- 作品数：8 被引量：21H指数：3
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项山东省优秀中青年科学家科研奖励基金国家大学生创新性实验计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 山羊β雌激素受体多克隆抗体的制备及免疫组化方法的建立被引量：3
- 2013年
- 本研究旨在克隆济宁青山羊雌激素受体β(ERβ)基因,进行原核表达,制备多克隆抗体,建立免疫组化分析方法,检测济宁青山羊卵巢和子宫内ERβ分布。根据GenBank发布的绵羊ERβ基因序列设计一对引物,应用RT-PCR方法从济宁青山羊卵巢组织中扩增ERβ部分基因。经双酶切和测序分析后,连接到原核表达载体pET32a(+),构建重组表达载体pET32a(+)-ERβ,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定;经Ni-NTA纯化融合蛋白后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,并检测抗体效价及特异性;使用该抗体检测济宁青山羊卵巢和子宫组织细胞中的ERβ分布。结果表明,成功扩增出ERβ部分基因,并构建原核表达质粒,转化至大肠杆菌中表达出相对分子质量约为53ku的融合蛋白;Western blotting证明该融合蛋白能与兔抗人的ERβ多克隆抗体特异性反应。制备的多克隆抗体经ELISA检测效价达到1∶213,以此抗体代替购置的标准兔抗人ERβ抗体,进行Western blotting反应,特异性良好;使用该抗体建立免疫组化方法检测结果表明济宁青山羊卵巢颗粒细胞和子宫内膜上皮细胞、平滑肌细胞存在ERβ的分布。本研究获得特异性兔抗山羊ERβ多克隆抗体,使用该抗体建立免疫组化方法首次报道了济宁青山羊卵巢和子宫ERβ的分布表达,为进一步研究β雌激素受体的生物学功能奠定了方法学和形态学基础。
- 刘海港李宏梅王树迎成子强刘法孝窦文文井维芳郭慧君
- 关键词：山羊雌激素受体Β多克隆抗体免疫组化
- 荧光定量RT-PCR检测性成熟前与性成熟山羊卵巢α/β-ER mRNA表达的比较
- 2013年
- 为分析性成熟前与性成熟波尔山羊和沂蒙黑山羊卵巢内α、β雌激素受体(α/β-ER)表达的差异规律,根据已发表波尔山羊α/β-ER基因序列,设计不同引物,对PCR反应条件进行优化,建立稳定检测2种山羊卵巢雌激素受体mRNA含量的荧光定量RT-PCR方法;并对性成熟前后2种山羊卵巢组织中α/β-ER mRNA进行了检测比较。结果显示,性成熟前2种山羊卵巢α-ER和β-ER mRNA表达含量较性成熟山羊低;而且这2种山羊无论性成熟前还是性成熟后,α雌激素受体表达均显著低于β雌激素受体。
- 王洪进李宏梅胡洪杰刘海港窦文文井维芳郭慧君
- 关键词：山羊
- ALV-Jgp85重组蛋白与免疫佐剂联合接种雏鸡诱导免疫保护的研究被引量：6
- 2013年
- 为研究原核表达J亚群禽白血病病毒(ALV-J)gp85囊膜蛋白诱导雏鸡产生保护性抗体及抗ALV-J感染的作用,本研究采用ALV-J gp85重组蛋白与不同免疫佐剂接种雏鸡,检测其免疫后血清抗体变化,并在二免后第35 d进行攻毒,检测鸡体内病毒血症。结果显示单一gp85重组蛋白只能诱导少部分雏鸡产生抗体,抗体效价较低、维持时间短;而弗氏佐剂(F)和CpG(C)佐剂联合重组蛋白能够使所有的免疫鸡产生抗体,效价较高,维持时间约56 d;二次免疫可以增强免疫效果,高效价抗体维持时间进一步延长。重组蛋白免疫组减少病毒血症的免疫保护率为33.3%,而F佐剂组及F和C佐剂与重组蛋白联合免疫组免疫保护率分别为53.8%和66.7%;另外,F和C佐剂与重组蛋白联合免疫明显增强机体对病毒的抵抗力。以上结果表明使用F和C佐剂可以增强gp85重组蛋白的免疫原性,产生较好免疫保护作用,为开发有效的ALV-J亚单位疫苗提供实验依据。
- 窦文文李宏梅成子强刘建柱刘海港井维芳崔治中郭慧君
- 关键词：J亚群禽白血病病毒免疫佐剂免疫保护
- 不同组织样品或检测方法对ALV检测结果的影响被引量：11
- 2013年
- 本研究探讨不同检测方法或样品等因素对ALV检测结果的影响,为建立我国种鸡场禽白血病净化检测和临床鉴别诊断方法提供科学依据。我们对从我国不同种禽场获得的蛋清和泄殖腔棉拭子进行ALV抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)比较检测;对上述不同检测结果区间的鸡只使用细胞培养分离病毒方法进行比较检验检测;对血清、血浆和蛋清样品使用DF1细胞和CEF进行病毒分离比较检测。结果,使用泄殖腔棉拭子和蛋清检测ALV P27的ELISA之间存在高度相关性,且蛋清检测更为灵敏(线性关系方程为Y(蛋清)=1.3765 X(泄殖腔)+0.0363,相关系数为0.9588)。ELISA直接检测值(S/P值)不小于1.5(蛋清)或2.0(泄殖腔棉拭子)的鸡只,分离外源性ALV的比例为100%;检测值不小于1.0(蛋清)或1.5(泄殖腔棉拭子)的鸡只,病毒分离比例在90%以上;检测值为0.2以上的鸡只,病毒分离比例仅为59%(蛋清)和32.4%(泄殖腔棉拭子);而且,至少10%得检测值小于0.2的鸡只仍能用细胞分离到病毒;另外,对相同鸡只,使用蛋清分离病毒的比例为21%,而血清为8.5%;从相同蛋清中使用DF1细胞分离病毒的比例为27.84%,而CEF为17.53%。结果表明,蛋清较泄殖腔棉拭子ELISA检测更敏感;90%以上检测值在1.0(蛋清)或1.5(泄殖腔棉拭子)以上的鸡只,使用DF1细胞能够分离病毒;比较发现蛋清较血清,DF1细胞较CEF分离检测病毒更敏感。该研究结果结论对在我国种鸡群实施ALV净化建立包括泄殖腔棉拭子或蛋清进行ALV P27抗原ELISA检测以及细胞分离ALV方法相结合的综合检测方法提供科学依据。
- 王明月窦文文陈立坤孙娜娜李宏梅赵鹏崔治中郭慧君
- 关键词：禽白血病病毒酶联免疫吸附试验外源性
- J亚群禽白血病病毒gp85重组亚单位疫苗对鸡群的免疫保护作用
- J亚群禽白血病是由反转录病毒引起的高度传染性疾病，该病最初发现于我国肉用鸡群，近几年大量报道显示在我国蛋鸡及地方品系鸡群中也发现ALV-J的感染。为了保护我国优良地方品系鸡，控制和预防ALV-J在中国地方种鸡中的流行，国...
- 窦文文
- 关键词：J亚群禽白血病病毒亚单位疫苗
- 文献传递
- 济宁青山羊雌激素β受体基因同源性比较与主要功能结构域预测分析
- 2012年
- 比较我国优良地方品种——济宁青山羊β雌激素受体(ERβ)的基因序列与其它动物间的同源性,分析其功能性结构基团氨基酸变异,阐释其生物学意义。根据NCBI发布的绵羊ERβ基因序列设计两对引物,使用RT-PCR方法扩增、鉴定、测序,并用DNAstar软件对其进行比对,预测分析其抗原区域、二级结构、蛋白质骨架柔性区域、表面可及性区域氨基酸组成及三级结构。研究发现,扩增得到了两段长度为640 bp和981 bp的ERβ目的基因片段。
- 刘海港王春阳李宝全侯秋玲黄丽波窦文文井维芳郭慧君
- 关键词：济宁青山羊功能结构域雌激素受体氨基酸组成基因片段
- 山东地方山羊ERα/β基因的原核表达与检测抗体的制备
- 2012年
- 克隆山东地方山羊的α-和β-雌激素受体(ERα/β)基因,进行原核表达,并制备检测用多克隆抗体。根据NCBI发布的绵羊ERα和ERβ基因序列分别设计两对引物,以济宁青山羊卵巢总RNA为模板,使用RT-PCR方法分别扩增ERα和ERβ部分基因,克隆序列经双酶切和测序验证后,连接到原核表达载体pET32a,构建成重组表达载体pET32a-ERα和pET32a-ERβ。
- 刘海港李宏梅侯秋玲李宝全王春阳刘法孝窦文文井维芳王洪进郭慧君
- 关键词：原核表达ERΑ抗体特异性蛋白抗原
- ALV-J gp85基因重组蛋白与免疫佐剂联合接种雏鸡诱导免疫保护作用研究
- 目的：探讨使用ALV—J囊膜蛋白基因gp85原核表达产物联合不同免疫佐剂及使用不同免疫次数诱导雏鸡产生保护性抗体的变化和抗ALV—J感染的作用。方法：设计引物，经PCR扩增出.ALV—J囊膜蛋白gp85基因，转染至原核表...
- 窦文文李宏梅刘海港成子强刘建柱井维芳崔治中郭慧君
- 关键词：雏鸡禽白血病病毒基因重组
