- 耳蜗内毛细胞特异性MLCK基因敲除小鼠的听力学初步研究
- 范迟
- 关键词：肌球蛋白轻链激酶内毛细胞听性脑干诱发电位
- 耳蜗内毛细胞特异性MLCK基因敲除小鼠的听力学及内耳形态学研究
- 细胞骨架结构发生改变可以导致听觉功能障碍，常见的有Usher综合症等。在细胞骨架的重组过程中，MLCK基因扮演了重要的角色。肌球蛋白具有促使肌动蛋白转运的功能，而肌球蛋白的磷酸化及重组都需要MLCK基因作为激酶的参与。基...
- 范迟
- 关键词：感音性聋
- X-连锁低磷酸盐血症Pug小鼠的听力学和耳形态学研究
- 2008年
- 目的Phex基因点突变Pug小鼠是典型的人类X-连锁低磷酸盐血症小鼠模型。通过研究Pug小鼠的听力学表型,探讨Phex基因点突变对小鼠听觉功能与内耳形态的影响。方法运用听性脑干诱发电位(ABR)对4月龄Pug小鼠和野生型小鼠进行听功能测试,取小鼠耳蜗进行大体形态观察,运用石蜡切片观察小鼠耳蜗骨壁、前庭膜、血管纹、螺旋韧带、盖膜、Corti器、螺旋神经节等结构。运用扫描电镜观察小鼠耳蜗Corti器上的内、外毛细胞及其表皮板等结构。结果Pug小鼠的ABR在短声和8kHz、16kHz、32kHz短纯音刺激的反应阈值均有提高,在短声和16kHz、32kHz频率,其差异具有统计学意义(P<0.05)。小鼠耳蜗骨壁增厚,骨质过度增长,有大量骨质矿化不完全区域;耳蜗底转部位螺旋神经节出现明显退化,神经元数目大量减少;耳蜗顶转到底转内、外毛细胞静纤毛散在性缺失,静纤毛形态异常。结论Phex基因点突变引起的基因功能缺失导致了Pug小鼠的听觉功能减退和耳蜗形态异常。
- 徐琳高下熊熙文高翔陈杰张倩丁小琼麻晓峰范迟
- 关键词：感音神经性耳聋小鼠
- 携带神经营养因子-3基因的重组腺病毒的构建和鉴定
- 2010年
- 目的:构建含人神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)的重组腺病毒载体,为初步研究NT-3的在体功能做准备。方法:酶切法从已构建好的真核表达载体NT-3-pIRES2-DsRed2质粒中切下含有NT-3和DsRed2(包括连接区域pIRES2)的目的片段,将其插入到腺病毒骨架质粒pAdShuttle-CMV的多克隆位点中,电穿孔法将腺病毒骨架载体pAdShuttle-CMV-NT-3-DsRed2和预转入人肠杆菌BJ5183的穿梭载体pAdEasy-1进行细菌内同源重组。PacⅠ酶切线性化鉴定正确的同源重组载体,脂质体法转染293T细胞,包装形成表达NT-3目的蛋白和红色荧光的腺病毒。通过293T细胞3轮扩增病毒,氯化铯密度梯度离心,获得高滴度的纯化腺病毒。Western blot方法检测蛋白表达情况。结果:同源重组质粒载体的DNA测序证实腺病毒载体中含有NT-3的目的片段,Western blot证实感染重组腺病毒的293T细胞中有相应的NT-3蛋白表达;病毒滴度为109PFU/ml。结论:利用细菌内同源重组的方法可以成功构建同时表达NT-3蛋白和红色荧光的重组腺病毒。
- 范迟高下徐琳朱光洁陈杰麻晓峰丁小琼陆玲周函
- 关键词：红色荧光蛋白
