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薛红刚: 作品数：22 被引量：148H指数：7; 供职机构：武汉生物制品研究所有限责任公司更多>>; 发文基金：“重大新药创制”科技重大专项国家科技支撑计划广西壮族自治区卫生厅资助项目更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学理学更多>>

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A群脑膜炎球菌兔抗血清的制备及鉴定: 2016年; 目的制备A群脑膜炎球菌兔抗血清内部参考品,并进行鉴定。方法用新鲜培养的A群脑膜炎球菌混悬液按确定的免疫方案免疫日本大耳白兔,免疫完成后,按确定的采血时间点,经颈动脉采血,分离血清,进行凝集试验,观察兔抗血清凝集反应情况;采用免疫双扩散和ELISA法检测兔抗血清效价,同时利用火箭免疫电泳和ELISA法鉴定兔抗血清的血清学特异性。结果确定免疫方案为基础免疫4周后,加强免疫2周;免疫完成后第6天为最佳采血时间点。6份自制A群脑膜炎球菌兔抗血清的凝集试验效价均达到1︰160,与相应的多糖能够产生沉淀线的最大稀释倍数均不低于1︰8,与A群脑膜炎球菌荚膜多糖反应的抗体滴度均在106及以上,与C、Y和W135群脑膜炎球菌荚膜多糖之间无交叉反应。结论自制的A群脑膜炎球菌兔抗血清可作为A群脑膜炎球菌荚膜多糖疫苗的定性和定量检测的内部参考品,同时也为其他多糖类疫苗血清抗体的制备提供了参考。; 刘鹏张海峰郭蓉薛红刚; 关键词：A群脑膜炎球菌

聚乳酸/聚乙醇酸可生物降解微球的制备及其对RNP的佐剂作用被引量：10: 2000年; 目的　制备包裹狂犬病毒核衣壳 (RNP)的PLA/PLG可生物降解微球 ,并观察其对RNP的佐剂作用。方法　以蛋白载量、包裹率、微球形态及粒径分布作为评价微球质量的指标 ,通过变换制备条件 ,获取质量较好的微球 ;观察三种不同聚合物材料制成的RNP微球在体外 37℃条件下的水解和释放 ;比较不同微球免疫效果。结果　PLA/PLG微球作为RNP载体 ,单剂接种诱生实验动物的抗NP抗体与AL(OH) 3 佐剂两次接种的滴度接近 ,但明显好于不加佐剂的对照组。结论　PLA/PLG微球对RNP具有良好的佐剂作用。; 苏焱王继麟薛红刚朱家鸿; 关键词：佐剂 RNP

抗狂犬病毒核蛋白单克隆抗体在狂犬病街毒检测中的应用被引量：10: 2005年; 目的　测试抗狂犬病毒核蛋白单克隆抗体用于间接免疫荧光法检测已确认的狂犬病阳性及狂犬病阴性的动物脑组织标本的灵敏度和特异性。方法　将巴斯德研究所狂犬病参考中心保存的来自不同国家的 6 2份狂犬病街毒动物脑组织标本以及 2 71份法国境内收集的正常动物脑组织标本 ,用上述间接免疫荧光检测 ,并以巴斯德研究所狂犬病参考中心提供的狂犬病毒酶联免疫吸附法、组织细胞分离法及直接免疫荧光法等三个试验作确认试验 ,进行比较。结果　间接免疫荧光法可检测涵盖狂犬病毒 7个基因型在内的所有 6 2份街毒标本 ,对确认为狂犬病阴性的动物脑组织标本检测均为阴性 ,其特异性和灵敏度均达到 10 0 %。结论　抗狂犬病毒核蛋白单抗作为间接免疫荧光法检测狂犬病毒具有良好的应用前景。; 徐葛林严家新Larrous F祝玉桃Cozette P薛红刚胡巧玲Bourhy H; 关键词：狂犬病毒间接免疫荧光法核蛋白单克隆抗体

狂犬病毒街毒抗原的快速检测被引量：7: 1998年; 本实验采用抗狂大病毒糖蛋白及核蛋白单抗包被、以抗狂犬病毒核蛋白单抗酶结合物作抗体夹心法（SEIA），检测21份接种了可疑狂犬病街毒的小鼠脑组织悬液，并与小鼠颅内接种法（MIT）比较，结果表明SEIA阳性者17份，滴度范围为1：100～1：1280，这17汾样品经MIT检测亦为阳性，二者符合率达100％，其中2份样品由于病毒量少，要经盲传后，接种小鼠才发病，而用SEIA检测一开始即呈阳性，且随着传代病毒量的增加而SEIA检测滴度也上升。表明SEIA快速、敏感、特异，可用于狂犬病毒病的实验室诊断。; 徐葛林朱家鸿吴杰徐雯薛红刚; 关键词：抗原

狂犬病毒核蛋白(NP)的纯化及其免疫原性的研究被引量：5: 2001年; 对重组痘苗病毒和重组杆状病毒表达的狂犬病毒NP及原代地鼠肾细胞培养的狂犬病毒核衣壳蛋白 (RNP) ,先经SepharoseCL 4B分子筛柱初步提纯 ,再以抗狂犬病毒NPMcAB 2C12 Sepharose 4B亲和层析柱纯化分离 ,经ELISA ,SDS PAGE电泳和Western Blot分析证实 ,获得了高纯度和免疫反应性的NP和RNP。以相同剂量的纯化蛋白免疫小鼠 ,RNP和两种重组NP均可诱生特异的抗NP抗体 ,三种蛋白间无明显差异 ;狂犬病毒CVS株攻击保护实验结果显示 ,三种蛋白免疫的小鼠存活率约为 5 0 %;; 苏焱王继麟杨想平薛红刚朱家鸿; 关键词：狂犬病毒核蛋白免疫原性

A群脑膜炎球菌多糖-重组蛋白Pep10结合物的制备及其免疫原性被引量：6: 2008年; 目的制备A群脑膜炎球菌多糖(GAMP)-重组蛋白Pep10结合物,并检测其免疫原性,探讨重组蛋白Pep10作为一种候选载体蛋白的可行性。方法GAMP经溴化氰(CNBr)活化后,共价接合己二酰肼(ADH)手臂,在碳二亚胺(EDAC)催化下与重组蛋白Pep10偶联,制备结合物GAMP-ADH-Pep10。纯化后免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA法检测小鼠血清中抗GAMP IgG抗体水平,并分析载体诱导的免疫抑制率。结果所制备的多糖衍生物GAMP-ADH及多糖-蛋白结合物GAMP-ADH-Pep10均具有GAMP抗原特异活性,免疫小鼠后可诱生比多糖单独免疫更高水平的GAMP血清IgG抗体,且接近GAMP-ADH-TT疫苗诱生的抗体水平,并能形成免疫记忆。重组蛋白Pep10诱导的免疫抑制率远低于TT诱导的免疫抑制率。结论制备的重组蛋白Pep10与A群脑膜炎球菌多糖偶联能发挥较强的载体效应,为研究理想载体蛋白提供了新的思路。; 刘汉平薛红刚方志正; 关键词：载体蛋白结合物免疫原性

高效阴离子交换色谱-脉冲安培法对A群脑膜炎球菌结合疫苗中游离多糖的检测: 2014年; 目的采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培法（high-performance anion-exchange chromatography with pulsed amperometric detection,HPAEC-PAD）检测A群脑膜炎球菌多糖-破伤风类毒素结合疫苗（group A meningococcal polysaccharide-tetanus toxoid conjugate vaccine,MenA-PS-TT）中的游离多糖含量.方法采用1％脱氧胆酸钠（sodium deoxycholate,DOC）处理MenA-PS-TT分离游离PS.游离和结合PS经三氟乙酸水解后,用HPAEC-PAD检测水解产物,并将检测结果与改良钼酸铵分光光度法的检测结果进行比较.结果 1％DOC处理的样品的PS回收率为90％～104％,TT沉淀率为99％以上,说明1％DOC处理不会对游离和结合PS产生影响.HPAEC-PAD检测MenA-PS的重复性良好,3次MenA-PS标准品定位结果和3次MenA-PS-TT成品检测结果的相对标准偏差分别为1.7％和6.4％.HPAEC-PAD与改良钼酸铵分光光度法的检测结果相当.结论 HPAEC-PAD可用于MenA-PS-TT中的游离PS含量检测.; 郭蓉卢佳丽薛红刚胡菁杨燕珠

超滤法去除A群脑膜炎球菌多糖料液中的苯酚被引量：3: 2012年; 目的采用超滤法去除A群脑膜炎球菌多糖料液中的苯酚。方法选取Omega OS010C10膜包(C型筛网,10 KD,过滤面积0.1 m2)和Omega OS010T12膜包(T型筛网,10 KD,过滤面积0.1 m2),分别对A群脑膜炎球菌多糖料液进行超滤,比较两种膜包不同压力对膜滤速的影响,测定超滤前后膜净水滤速的恢复率,分析经超滤和透析后样品中磷和苯酚含量及固体总量。结果 OS010T12膜包切向流速和压力的增加对滤速的影响较OS010C10膜包更显著,且在较低的压力差和过膜压力下,OS010T12膜包具有更高的过滤速度;在浓缩和洗滤阶段,OS010T12膜包的平均滤速较OS010C10膜包高约1.3倍;膜包经清洗后,膜净水滤速OS010T12膜包可恢复至试验前水平;两种膜包超滤的滤出液中苯酚的含量均符合《中国药典》三部(2010版)要求,且多糖回收率均高达90%以上,超滤用时比透析至少节约46 h,且耗水量只有透析工艺的20%。结论可用OS010T12膜包替换透析袋,对A群脑膜炎球菌多糖料液进行超滤,去除残余苯酚,为A群脑膜炎球菌多糖疫苗的生产提供了参考。; 胡菁薛红刚郭蓉陈有喜瞿明霞陈浩军; 关键词：超滤脑膜炎球菌多糖疫苗苯酚多糖

肺炎球菌PsaA抗原及其在结合疫苗中的应用被引量：1: 2011年; 目的应用基因工程技术表达和制备肺炎链球菌表面黏附素A（ pneumococcal surfaceadhesin A, PsaA），并与细菌荚膜多糖耦联制备成多糖蛋白结合疫苗，探讨PsaA作为肺炎球菌蛋白载体在增强结合疫苗中其他细菌多糖抗原的免疫原性的同时，还能获得对肺炎球菌的抗体反应，从而达到用一种结合疫苗能诱导出针对两种细菌的抗体免疫应答的目的。方法从肺炎链球菌基因组中扩增psaA基因，将目的基因插入原核表达载体pET-28a，获得重组质粒pET28a-psaA，通过转化进入大肠杆菌BL21中，经IPTG诱导，采用DEAE．阴离子交换层析法纯化基因重组rPsaA蛋白。将纯化到的rPsaA蛋白与A群脑膜炎荚膜多糖（group A meningococcal polysaccharide, GAMP）耦联成多糖蛋白结合疫苗后，用小鼠动物模型进行免疫实验，检测该疫苗的免疫原性，用ELISA法测定该疫苗在小鼠体内产生的针对肺炎球菌和脑膜炎球菌两种病原菌特异性抗原的抗体水平。结果成功克隆基因重组表达质粒，而且表达的PsaA蛋白在载体上的组氨酸标签之前终止表达，不带有组氨酸标签，保证疫苗的安全性。SDS—PAGE技术分析表明：rPsaA蛋白高效表达，约为菌体蛋白的60％，蛋白质相对分子质量约为37×10’，而且蛋白的可溶性好，不形成包涵体，用DEAE-阴离子交换层析法纯化其纯度可达80％以上。纯化到的PsaA蛋白与荚膜多糖耦联成功，应用于小鼠免疫实验，PsaA蛋白载体能显著增强A群脑膜炎荚膜多糖抗原的免疫原性，并同时产生针对肺炎球菌蛋白抗原和脑膜炎球菌多糖抗原的特异性抗体。结论利用基因工程技术获得无组氨酸标签的PsaA蛋白，并将它与A群脑膜炎荚膜多糖耦联，可以在增强荚膜多糖抗原免疫原性的同时，提高疫苗的免疫保护效果，探讨了给儿童接种一种疫苗能同时预防肺炎和脑膜炎两种传染病的可能性。; 樊小英薛红刚郭蓉胡菁卢佳丽朱越雄; 关键词：多糖蛋白结合疫苗

广西家犬携带狂犬病毒的实验研究被引量：21: 2003年; 目的调查研究广西地区外观健康的家犬是否携带狂犬病毒。方法从广西13个县 (市 )收集了外观健康的家犬犬脑标本140份 ,采用小鼠颅内接种试验、间接免疫荧光技术、夹心ELISA试验、小鼠中和试验以及逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)方法检测脑标本中的狂犬病毒及其相应的抗原。结果除RT-PCR的检出率稍低 (2.86 %,4/140)外,其余4种方法均获得3.57%(5/140)的检出率。而且 ,不同县(市 )的检出率亦有所不同。结论以实验室方法首次证实了广西外观健康的家犬确实携带有狂犬病毒 ,从而为过去的流行病学调查资料提供了科学的实验室依据 ,对进一步做好狂犬病的预防和控制有重要的意义。; 古绍文徐葛林吴泰才吴杰薛红刚; 关键词：家犬狂犬病毒流行病学

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