言普
- 作品数：92 被引量：134H指数：6
- 供职机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项海南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因嵌合hpRNA载体一步快速构建及沉默效果的研究被引量：2
- 2016年
- 番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)严重威胁番木瓜种植业的发展,且目前没有十分有效的防治办法。病毒侵染植物依赖寄主因子的协助,真核翻译起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)是多种RNA病毒侵染植物的必需因子。以番木瓜eIF4E家族基因为研究对象,构建同时干扰其eIF4E和eIFiso4E基因的发卡RNA(hairpin RNA,hpRNA)载体,并将其导入到番木瓜叶肉原生质中。通过荧光实时定量检测发现,番木瓜中eIF4E和eIFiso4E基因的表达量分别下降了49.8%和67.6%,这为进一步研究番木瓜eIF4E家族基因对PRSV侵染的影响以及利用RNA干扰技术靶向植物基因的病毒防治新策略提供理论和实践依据。
- 霍鹏言普沈文涛黎小瑛周鹏
- 关键词：番木瓜原生质体EIF4E
- 番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因嵌合hpRNA载体一步快速构建及沉默效果的研究
- 番木瓜环斑病毒(PRSV)严重威胁番木瓜种植业的发展,且目前没有十分有效的防治办法。病毒侵染植物依赖寄主因子的协助,真核翻译起始因子4E(eIF4E)是多种RNA病毒侵染植物的必需因子。本研究以番木瓜eIF4E家族基因为...
- 霍鹏言普沈文涛黎小瑛周鹏
- 关键词：番木瓜HPRNA原生质体EIF4E
- 文献传递
- 一步法RT-PCR扩增PRSV海南分离物全长基因组cDNA被引量：1
- 2011年
- 以植物总RNA提取试剂盒提取的高纯度的总RNA为模板,使用Oligo dT-Adaptor和Random9引物合成了番木瓜环斑病病毒海南分离物(PRSV HN-2)的cDNA第一链,基于已报道的PRSV全长基因组序列,设计合成了一对引物,一步法RT-PCR扩增出PRSV海南分离物全长基因组cDNA。为了验证获得的全长基因组cDNA的正确性,并以扩增出的全长cDNA为模板,将PRSV全长基因组分成A、B 2个大片段进行扩增,应用T载体进行克隆和测序以验证所获得的全长基因组cDNA序列的正确性。测序结果显示,该cDNA序列与国内外报道的PRSV各分离物全长核苷酸序列的相似性很高,表明本文建立的一步法RT-PCR扩增PRSV全长基因组cDNA的方法正确、可行。
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- 兼抗番木瓜畸形花叶病毒和番木瓜环斑病毒的双价弱毒疫苗
- 本发明涉及植物保护技术领域，尤其涉及兼抗番木瓜畸形花叶病毒和番木瓜环斑病毒的双价弱毒疫苗。本发明通过对PRSV病毒片段的筛选和优化，将其与PLDMV弱毒株进行配合，形成的载体制备获得疫苗能够兼抗PRSV和PLDMV，实现...
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- 文献传递
- 基于Nimble Cloning的新型植物BiFC载体的构建和应用
- 2019年
- Nimble Cloning是一项新型的分子克隆技术,具有操作简单、使用灵活、克隆效率高、标准化克隆等优点,但Nimble Cloning需要使用配套的表达载体。本研究将pDOE系列的4个整合型BiFC载体上的SfiI位点去除,然后在这4个载体的多克隆位点处插入NC克隆框,构建了一套适用于Nimble Cloning的新型植物BiFC表达载体,命名为pNC-BiFC-VD系列载体。将pNC-BiFC-VD载体应用到植物蛋白互作研究中,分析了番木瓜eIFiso4E和病毒PRSV的vpg蛋白之间的互作,结果表明番木瓜eIFiso4E和PRSV-vpg在细胞核发生互作。该套新型植物BiFC表达载体有望在植物蛋白互作研究中得到广泛应用。
- 曾妍静沈文涛庹德财黎小瑛言普高新征周鹏
- 关键词：分子克隆
- 用于检测ANSSV的RT-LAMP检测引物及其应用、检测试剂和检测方法
- 本发明涉及生物技术及微生物检测技术领域，特别涉及用于检测ANSSV的RT‑LAMP检测引物及其应用、检测试剂和检测方法。该RT‑LAMP检测引物的序列如下：外引物ANSSV‑F3、外引物ANSSV‑B3、内引物ANSSV...
- 庹德财赵光远沈文涛周鹏言普黎小瑛
- 文献传递
- 利用ID-ELISA技术调查分析海南3种主要番木瓜病毒分布及感病情况被引量：1
- 2015年
- 利用PCR方法分别扩增番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)、番木瓜畸形花叶病毒(papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)和番木瓜花叶病(papaya mosaic virus,Pa MV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并连接到原核表达载体p ET-28a上,获得重组质粒p ET28-PRSV-CP、p ET28-PLDMV-CP和p ET28-Pa MV-CP,通过转化、诱导表达后,经SDS-PAGE分析显示,这3种CP蛋白在大肠杆菌中高效表达,其中PRSV CP蛋白和PLDMV CP以包涵体形式存在,Pa MV CP以可溶蛋白形式存在。利用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化获得了3种病毒的重组CP蛋白,并免疫大白兔获得高效价的抗体。Western blot检测结果表明,这3种抗血清与对应的诱导表达蛋白发生特异反应。再采用抗血清建立一种快捷、简便和低成本的ID-ELISA(Indirect enzymelinked immunosorbent assay)技术,并利用此技术对海南岛283个疑似感病的番木瓜样品进行检测鉴别,初步掌握了海南岛3种主要番木瓜病毒的分布及感病情况,为下一步该病的有效防治策略提供科学依据。
- 杨勇庹德财沈文涛言普黎小瑛周鹏王锐萍
- 关键词：外壳蛋白抗血清
- 番木瓜eIF4E和eIFis04E基因嵌合hpRNA载体一步快速构建及沉默效果的研究
- 番木瓜环斑病毒(PRSV)严重威胁番木瓜种植业的发展,且目前没有十分有效的防治办法.病毒侵染植物依赖寄主因子的协助,真核翻泽起始因子4E(eIF4E)是多种RNA病毒侵染植物的必需因子.本研究以番木瓜eIF4E家族基因为...
- 霍鹏言普沈文涛黎小瑛周鹏
- 关键词：番木瓜环斑病毒原生质体基因沉默
- 文献传递
- 海南地区番木瓜畸形花叶病毒的发现与鉴定被引量：4
- 2013年
- 利用马铃薯Y病毒属的简并引物对3个海南感病番木瓜植株的叶片进行RT-PCR检测,并将其克隆到T载体上进行测序和BLAST分析.结果表明：均获得了大小约1 700 bp的特异性条带,与预期大小基本一致;所得序列与GenBank中收录的番木瓜畸形花叶病毒（Papaya leaf distortionmosaicvirus,PLDMV）基因序列相似性达到88％～96％,序列包含部分NIb蛋白基因、外壳蛋白（CP）基因和3’端非编码区.这是首次报道在中国海南地区发现番木瓜感染了PLDMV.但是仅基于PLDMV外壳蛋白基因的系统进化分析结果还不足以证明在海南发现的PLDMV与其他地区的某一PLDMV株系为同一进化簇.
- 杨勇庹德财沈文涛言普黎小瑛周鹏
- 关键词：番木瓜系统进化树
- 以P型PRSV-VPg为模板多位点突变获得W型PRSV-VPg的研究被引量：2
- 2009年
- 以P型PRSV-VPg(Papaya Ringspot Virus,VPggene)基因为模板利用高保真酶通过两对引物(突变4个位点),PCR扩增获得一条276bp和一条141bp的两个小片段.以此为基础,利用长引物延伸和套叠PCR的方法,定点突变剩余5个位点,最后拼接获得W型PRSV-VPg基因.结果表明通过上述方案可以成功改造P型PRSV-VPg基因,获得与W型PRSV-VPg同源的目的基因,成功率为100%.该技术可以绕开传统的通过寻找毒源进行RT-PCR方法和人工合成方法获得病毒基因,其技术操作简单,且节约时间和成本,并在人工合成基因、多位点基因定点突变等方面具有很好的借鉴作用和应用价值.
- 胡正龙肖旭倩沈文涛言普周鹏
- 关键词：基因改造
