谢吉国
- 作品数：6 被引量：17H指数：3
- 供职机构：广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 草鱼呼肠孤病毒vp5基因诱饵重组载体的构建、转化与自激活作用检测被引量：7
- 2012年
- 根据草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性和毒性检测。PCR、酶切以及测序表明,pGBKT7-vp5重组诱饵载体构建成功。自激活性和毒性检测显示,阳性重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold和阴性对照菌株pGBKT7/Y2HGold在SD/-Trp平板上出现大小相一致的乳白色菌落,且在SD/-Trp/X-α-Gel、SD/-Trp/AbA+/X-α-Gel平板上生长出蓝色菌落,而在SD/-Trp/-Ade/-His无菌落出现。表明重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold表达的融合蛋白激活了报告基因AUR1-C和MEL1,没有激活报告基因ADE2和HIS3并且对宿主菌无毒性。该重组诱饵载体可用于酵母双杂交系统进一步筛选cDNA文库中与其相互作用的蛋白。
- 谢吉国闫秀英简纪常吴灶和
- 关键词：草鱼呼肠孤病毒酵母双杂交系统诱饵载体
- 红笛鲷重组激活基因rag1原核表达条件的优化及纯化被引量：3
- 2012年
- 克隆编码红笛鲷(Lutjanus sanguineus)RAG1蛋白(recombination activating protein1)活性核心区的基因序列,并与pET-28a(+)载体连接,构建原核表达载体pET-28a-RAG1,将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用IPTG进行诱导表达。为提高融合蛋白的表达效率,运用传统的实验方法对诱导条件进行优化。SDS-PAGE分析表明,在37℃条件下,利用0.1 mmol/L IPTG诱导8 h后,RAG1重组融合蛋白的表达量最大,相对分子质量与预测值相符,该蛋白主要以包涵体形式高效表达,利用His Trap HP亲和柱使其得到进一步纯化;Western blot分析显示,该融合蛋白可与鼠抗His-tag单克隆抗体发生特异性结合,说明表达蛋白为目的蛋白。
- 张雪利鲁义善谢吉国简纪常吴灶和
- 关键词：红笛鲷原核表达纯化WESTERNBLOT分析
- 草鱼呼肠孤病毒096 vp7基因生物信息学分析及其酵母表达载体的构建被引量：3
- 2014年
- 草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)是草鱼出血病的病原。从患病草鱼体内分离到一株草鱼呼肠孤病毒GCRV 096,经反转录PCR,克隆得GCRV 096长度为855 bp的vp7基因,并分析该基因编码蛋白的特性。结果表明,同一基因型分离株VP7蛋白间的差异不大,但不同基因型分离株VP7蛋白间存在很大的差异。对GCRV 096 VP7蛋白生物信息学分析表明,信号肽位点位于20氨基酸处,且VP7含有4个潜在的抗原决定簇。构建GCRV 096 vp7基因的酵母表达载体p GBKT7-S10,并成功转化至酵母中。
- 郑树城谢吉国王雅蔡双虎简纪常吴灶和闫秀英
- 关键词：草鱼呼肠孤病毒VP7基因生物信息学酵母表达载体
- 草鱼细胞系CIK酵母双杂交cDNA文库的构建及初步应用
- 2014年
- 旨在探索草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞蛋白质间的相互作用,运用SMART技术构建了草鱼肾组织细胞系CIK(Ctenopharyngodon idellus kidney)的酵母双杂交cDNA文库。提取CIK细胞总RNA后,分离纯化mRNA,然后以mRNA为模板,反转录合成cDNA第一链,再在DNA聚合酶作用下,通过长距离PCR,扩增双链cDNA。利用SMART技术,通过同源重组的方法,在酵母株Y187中构建了草鱼CIK细胞全长cDNA文库。经检测,未扩增文库的转化率为1.6×105,文库容量为2.4×106,插入的双链cDNA片段的长度为250-2 000 bp,文库滴度为7×107 CFU/mL,重组率为98%,此文库具有良好的cDNA片段多态性和完整性。利用构建的CIK酵母双杂交文库,以草鱼呼肠孤病毒的VP7和VP5蛋白作为诱饵进行筛选试验,得到VP7相互作用蛋白的阳性菌落,未得到VP5相互作用蛋白的阳性菌落。草鱼CIK细胞酵母双杂交cDNA文库的构建为研究草鱼呼肠孤病毒与宿主细胞间的互作机制提供了重要研究工具。
- 闫秀英谢吉国李杰丁燏吴灶和鲁义善简纪常
- 关键词：酵母双杂交CDNA文库
- 利用酵母双杂交系统筛选草鱼呼肠孤病毒NS38相互作用蛋白被引量：6
- 2013年
- 采用酵母双杂交技术,对草鱼呼肠孤病毒096(GCRV096)非结构蛋白NS38相互作用的蛋白进行了筛选,并对阳性克隆中的插入序列进行测序与生物信息学分析。结果表明,含有重组质粒pGBKT7-NS38的酵母菌Y2HGold与含有草鱼肾脏细胞(CIK)cDNA文库质粒的酵母菌Y187融合成功,并筛选得到3株阳性克隆;发现两条不同的插入序列,其中一条序列编码的蛋白与40S核糖体蛋白S16亚基的同源性高达99%,而另一序列相应的蛋白不存在匹配的蛋白。该结果为进一步深入研究NS38蛋白在GCRV096复制过程中的生物学功能奠定了基础。
- 李杰闫秀英丁燏吴灶和简纪常谢吉国
- 关键词：蛋白质相互作用酵母双杂交
- 草鱼呼肠孤病毒VP7蛋白相互作用蛋白基因的筛选
- 草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus，GCRV)是引起草鱼出血病的主要病原严重影响我国草鱼养殖业的发展。深入了解病毒和宿主之间相互作用的机制，找到其相互作用的蛋白，对于草鱼病毒性出血病的防治和分子水平上...
- 谢吉国
- 关键词：草鱼呼肠孤病毒酵母双杂交系统基因筛选相互作用蛋白
