邱立明
- 作品数：13 被引量：49H指数：3
- 供职机构：新疆大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金新疆生物资源基因工程重点实验室开放基金教育部“春晖计划”更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 叶绿体型转昆虫抗冻蛋白基因烟草的耐寒性被引量：3
- 2009年
- 根据已构建的大豆叶绿体表达载体pJY01,设计特异性引物,将昆虫抗冻蛋白基因MpAFP149插入此载体中构成叶绿体表达载体pJY01-MpAFP149,利用基因枪轰击法转化烟草,经壮观霉素筛选获得4株叶绿体型转抗冻蛋白基因烟草株系。PCR和PCR-Southern结果显示外源基因已整合至烟草叶绿体基因组中,但同质化水平不高;RT-PCR结果也表明昆虫抗冻蛋白基因已发生了转录。将野生型烟草、叶绿体型转抗冻蛋白基因烟草及核转化T1代转抗冻蛋白基因烟草(pCAMBIA1302-MpAFP149)于–1℃低温处理3d,观察耐寒表型及测定相对电导率。结果表明,叶绿体型转基因烟草的耐寒表型优于野生型烟草,但与核转化的T1代转抗冻蛋白基因烟草无显著差异。处理3d时,叶绿体型转基因烟草和T1代转抗冻蛋白基因烟草的电导率分别为39.2%和38.2%,而野生型烟草已达73.7%。本实验获得的异质化转叶绿体抗冻蛋白基因烟草与转核基因烟草的耐寒力无差异。
- 王艳马纪黄薇邱立明叶锋张富春
- 关键词：烟草耐寒性
- 准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因Mpafp149的生物信息学分析
- 2009年
- 利用生物信息学方法对准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因Mpafp149所编码蛋白MPAFP149进行分析,分别从氨基酸组成、理化性质、二三级结构和功能、进化关系等方面进行预测。结果表明MPAFP149与其他昆虫抗冻蛋白在氨基酸水平上具有79%的相似性,二级结构上预测其为水溶性蛋白,含有信号肽和跨膜区。三级结构上与黄粉虫抗冻蛋白YL-1具有较高的相似性,并且具有昆虫抗冻蛋白所特有的结构域。本研究为准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白功能的研究鉴定了基础。
- 邱立明王艳李秀明马纪
- 关键词：抗冻蛋白功能分析
- 荒漠甲虫光滑鳖甲和小胸鳖甲抗冻蛋白基因及其3'-UTR的序列分析被引量：3
- 2013年
- 拟步甲科昆虫光滑鳖甲Anatolica polita Kaszab和小胸鳖甲Microdera punctipennis Kaszab分别是新疆准噶尔盆地荒漠地区的广布种和特有种。它们的生活习性有很大差异,光滑鳖甲白天活动,且活动范围广,而小胸鳖甲喜阴避光夜晚活动,活动范围小,但在两者体内都发现有多拷贝的抗冻蛋白基因,并且抗冻蛋白基因在夏季也有表达。为了比较这两种昆虫的抗冻蛋白序列以及不同时期表达的抗冻蛋白序列的差异情况,本研究分别以光滑鳖甲和小胸鳖甲的过冬和夏季成虫为材料,根据已克隆的抗冻蛋白基因序列设计通用引物,扩增新的抗冻蛋白基因及其3'-非翻译区(3'-UTR)。序列分析结果表明,无论是冬季还是夏季表达的抗冻蛋白在两种昆虫中都具有拟步甲科昆虫抗冻蛋白的特点,即含有不同数量的"TCTXSXXCXXAX"12个氨基酸的重复序列;光滑鳖甲抗冻蛋白基因的变异性大于小胸鳖甲,并且在重复基序的保守位点都有突变现象。小胸鳖甲抗冻蛋白在C末端有较大变异。光滑鳖甲抗冻蛋白基因的3'-UTR区变异较大,而小胸鳖甲抗冻蛋白基因的3'-UTR区几乎没有变异。推测两种昆虫抗冻蛋白及抗冻蛋白基因3'-UTR的变异性可能与抗冻蛋白的表达调控以及昆虫对微环境的适应性有关。
- 侯小娟梁娜邱立明马纪
- 关键词：光滑鳖甲抗冻蛋白
- 花粉管介导的准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白转基因棉花的筛选被引量：4
- 2008年
- 利用新疆荒漠昆虫抗冻蛋白基因进行遗传转化是培育新疆棉花抗寒品种的新途径。研究采用RT-PCR结合RACE技术从新疆荒漠昆虫准噶尔小胸鳖甲(Microdera puntipennis dzungarica)中克隆获得抗冻蛋白(Antifreeze protein)基因MpAFP149。将MpAFP149克隆至pBI121上,获得重组质粒后采用电转化法将重组质粒转入农杆菌EHA105内,PCR筛选鉴定重组子,并测序确定抗冻蛋白植物表达载体构建正确。将pBI121-MpAFP通过田间的花粉管导入技术转化棉花,收取转化的棉花种子,经检测证明在转化10 000朵花中,卡那霉素抗性筛选出13株,PCR检测有2株阳性植株。实验结果为进一步开展抗冻蛋白基因转化棉花的研究奠定了基础。
- 马纪李春平邱立明徐建辉赵干李素丽
- 关键词：准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因转化棉花
- 低温下转昆虫抗冻蛋白基因烟草的亚显微结构变化被引量：1
- 2009年
- 分析在-1℃温度中处理1、2和3d的转昆虫抗冻蛋白基因MpAFP149烟草和野生型烟草亚细胞显微结构变化的结果表明,转基因烟草和野生型烟草的超微结构有差异,尤其是细胞膜、叶绿体和线粒体的膜。转基因烟草细胞器的膜结构伤害程度明显低于野生型烟草,这提示低温条件下转基因烟草中的抗冻蛋白可能有保护细胞膜和细胞器膜结构的作用,由此降低了低温的伤害。
- 王艳马纪邱立明王晶代春英张富春
- 关键词：低温胁迫超微结构
- 昆虫抗冻蛋白基因的克隆与表达研究进展被引量：3
- 2009年
- 产生抗冻蛋白(antifreeze protein,AFP)是许多昆虫抵御寒冷的一种重要机制。昆虫抗冻蛋白基因的克隆和表达是研究抗冻蛋白活性和功能的主要途径。文章归纳GenBank所登录的昆虫抗冻蛋白基因及其特点,总结昆虫抗冻蛋白基因的天然表达和基因工程表达方面尚未明确或需要克服的一些问题。目前在GenBank注册的昆虫抗冻蛋白基因约100个,集中于9种昆虫隶属鞘翅目3个科和鳞翅目1个科。昆虫抗冻蛋白基因具有多拷贝和多同种型(isoforms)的特点。昆虫抗冻蛋白的天然表达具有物种间和同种型间的多样性。基因工程表达昆虫抗冻蛋白需要克服表达量低活性不高的问题。对昆虫抗冻蛋白表达规律的研究有助于全面认识其功能。
- 邱立明马纪
- 关键词：昆虫抗冻蛋白基因克隆鳞翅目鞘翅目
- 光滑鳖甲Anatolica polita抗冻蛋白基因的发育阶段性表达以及低温对其表达的影响被引量：2
- 2010年
- 【目的】光滑鳖甲是广泛分布于新疆荒漠地区的一种拟步甲科(Tenebrionidae)昆虫,它能够通过抗冻蛋白的表达从而在长时间低温和剧烈的温度变化等环境条件下生存。研究光滑鳖甲抗冻蛋白基因(Apafp)在不同发育阶段表达差异和冷胁迫对其表达的影响。【方法】通过实时定量PCR方法对Apafp752和Apafp914两种抗冻蛋白基因的mRNA水平变化规律进行了研究。【结果】随着幼虫龄期的增大,Apafps mRNA水平逐渐增加,至8～9龄幼虫阶段达到最高约为小龄幼虫的7～8倍,蛹期时则显著降低。血淋巴液的渗透浓度值也呈现相同趋势。【结论】发育阶段的变化是对光滑鳖甲抗冻蛋白基因表达的重要调节因素。在低温胁迫下4～6龄幼虫afps的表达显著提高,说明冷胁迫能促进幼虫afps的累积。结合Apafps基因表达和低温存活率可以推测光滑鳖甲大龄幼虫可能是一种过冬虫态。
- 王晶邱立明王岩马纪
- 关键词：光滑鳖甲REAL-TIME发育阶段冷胁迫
- 新疆荒漠昆虫抗冻蛋白理化性质与功能及基因表达特性研究
- 马纪毛新芳刘忠渊王艳刘小宁王岩邱立明候风
- 该项目依托国家自然科学基金项目“新疆荒漠昆虫准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因表达特性研究(30760056)”(2008-2010)和新疆生物资源基因工程重点实验室开放课题“新疆荒漠昆虫cDNA文库构建和抗冻基因分离研究(XJ...
- 关键词：
- 关键词：荒漠昆虫基因表达人工饲养
- 利用烟草高效转化功能基因体系的建立被引量：6
- 2008年
- 对农杆菌介导的烟草遗传转化条件进行探索,以20mg/L的潮霉素作为转化苗的筛选压,稀释至OD600为0.2～0.3的农杆菌对外植体浸染15min,于添加300mg/L头孢霉素的生根培养基中诱导生根,可稳定获得较高的阳性转化率.经PCR和PCR-Southern检测,阳性转基因植株达84.8%以上.通过本研究建立了一种稳定高效的功能基因烟草遗传转化体系.
- 邱立明王艳王瑜代春英马纪
- 关键词：烟草农杆菌生根培养基
- 昆虫抗冻蛋白MpAFP149抗血清的制备及转基因烟草免疫定位的检测被引量：2
- 2010年
- 目的:制备昆虫抗冻蛋白MpAFP149特异性抗血清,以便从细胞水平阐明昆虫抗冻蛋白在转基因烟草中的功能基础。方法:将具有完整读码框的MpAFP149基因连接到真核表达载体pcDNA3上,用做DNA免疫质粒。另外,将编码成熟肽的抗冻蛋白基因片段MpsAFP149插入原核表达载体pGEX-4T-1中,形成的重组质粒pGEX-4T-1-MpsAFP149转化大肠杆菌BL21(DE3),获得融合蛋白GST-sAFP149,用于蛋白免疫。采用"DNA初免-蛋白质加强"的策略免疫小鼠,制备抗血清,Western blot检测抗血清的特异性。制备野生型和转有MpAFP149转基因烟草叶片的超薄切片,利用免疫胶体金技术检测异源抗冻蛋白的表达及亚细胞水平的表达定位。结果:构建了昆虫抗冻蛋白基因MpAFP149的原核和真核表达载体;获得了预期的相对分子质量(Mr)约为36 000的融合蛋白。Western blot和转基因烟草的免疫定位结果表明此免疫策略可使小鼠产生特异性的昆虫抗冻蛋白抗血清。抗冻蛋白MpAFP149在转基因烟草中得到了表达并主要分布植物细胞质外体中的细胞壁上。结论:含有抗冻蛋白基因MpAFP149的真核表达质粒pcDNA3-MpAFP149和融合蛋白GST-sAFP149,通过"DNA初免-蛋白质加强"的免疫策略,可使小鼠产生专一性的抗血清。该抗血清可有效地用于抗冻蛋白基因MpAFP149转基因烟草的免疫定位研究。
- 王艳邱立明代春英王晶张富春马纪
- 关键词：抗血清免疫定位
