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巴马小型猪SLA-2和β_2m复合体蛋白的构建及二级结构测定分析被引量：3: 2007年; 以巴马小型猪为研究材料,克隆SLA-2和β2m基因。然后采用剪接重叠延伸PCR(Splicing overlap exten-tion PCR,SOE PCR)法,将SLA-2的胞外区和β2m的成熟肽部分通过一富含甘氨酸/丝氨酸的Linker(G4S)3连接,形成SLA-2-Linker-β2m。将SLA-2-Linker-β2m在pMAL-p2X系统上表达,其融合表达蛋白分别经过West-ern-blot、纯化及Factor Xa切割,分离纯化单体蛋白。圆二色谱(Circular dichroism spectrum,CD)测定蛋白的二级结构。结果显示,重构表达的复合体融合蛋白MBP-SLA-2-(G4S)3-β2m大小为84.1 ku。切割后去除MBP的单体蛋白大小为41.6 ku。圆二色谱分析单体蛋白和融合蛋白二级结构元件α-螺旋、β-折叠、转角和随机卷曲的符合率分别达到了100%、97.3%、97.1%和97.9%,揭示重构的复合体具有正确的二级结构,可以用于体外多肽结合等研究。; 高凤山李新生李云岗方勤美郝慧芳夏春; 关键词：圆二色谱 SLA-2 Β2M

克隆猪主要组织相容性复合体Ⅱ类DR基因座α链和β链及其体外复合体的构建被引量：6: 2006年; 为推动猪主要组织相容性复合体(MHC)空间构象的研究,体外构建了猪的MHC-Ⅱ类蛋白复合体(SLA-Ⅱ)。首先克隆长白-达兰杂交商品猪DRA和DRB基因,用富含甘氨酸-丝氨酸的Linker(G4S)3连接DRA和DRB的胞外区,用SOE-PCR得到复合体基因DRA-linker-DRB,插入原核表达载体进行表达;对表达的融合蛋白进行Western-blot鉴定、纯化、蛋白酶切割并对切割后的蛋白进行分离和纯化。对分离的目的蛋白、融合蛋白及麦芽糖结合蛋白(MBP)进行二级结构测定。得到83.4 ku的可溶性融合蛋白MBP-DRA-(G4S)3-DRB,其Western杂交带与表达条带大小一致。切割分离后的目的蛋白大小为40.9 ku。目的蛋白DRA-(G4S)3-DRB二级图谱显示该蛋白呈典型α-螺旋结构,各二级结构元件α螺旋、β折叠、转角和随机卷曲的氨基酸数目分别为80、121、101和80,融合蛋白MBP-DRA-(G4S)3-DR与目的蛋白DRA-(G4S)3-DRB的二级结构各元件的符合率分别达到了95%、96.7%、91.1%和93.0%。结果分析表明得到的复合体构象正确,可用于进一步的B细胞抗原表位的筛选等结构和功能研究。; 高凤山王磊李新生李云岗王慧飞方勤美郝慧芳夏春; 关键词：主要组织相容性复合体基因座

精子介导法制备转基因鸡的研究被引量：3: 2007年; 以LacZ基因为报告基因,构建载体质粒p-OV-β-Gal,转移到鸡早期胚胎内,对外源基因的整合及表达情况进行检测分析,为制备转基因鸡探索新的方法。采用脂质体介导法、精子介导法以及电激法相结合的方法将载体质粒p-OV-β-Gal转移到鸡早期胚胎内,进行转基因鸡研究,结果发现其外源基因整合阳性率为13.2%(7/53),表达阳性率为20.7%(11/53)。说明该方法可作为制备转基因鸡的有效方法。; 苗向阳丁淑燕郝慧芳杨文胜; 关键词：转基因精子介导法

噬菌体抗体库的构建及抗猪脂肪细胞膜单抗的筛选被引量：5: 2005年; 用猪脂肪细胞以免疫删减法免疫小鼠,取其脾细胞,RT-PCR扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,克隆入噬菌粒表达载体pCANTAB5E中,构建单链抗体(ScFv)文库。用猪脂肪细胞,对其进行3轮吸附-洗脱-富集,筛选抗猪脂肪细胞膜单抗。经ELISA检测,51/96克隆具有与猪脂肪细胞结合活性,阳性率为53%,与猪肝细胞则成阴性反应,初步证明了单抗的特异性,为猪脂肪细胞膜单抗的制备提供了一种新的方法。; 苗向阳丁淑燕朱玉良郝慧芳邵建军; 关键词：脂肪细胞膜噬菌体抗体库单抗结合活性脾细胞

脂肪细胞膜免疫对动物体脂含量的调控被引量：2: 2005年; 降低动物体内脂肪含量,改善畜产品质量一直是动物研究人员研究的重点。近年发展起来的脂肪细胞膜免疫为降低动物体脂含量提供了一种安全而有效的方法。本文简要介绍了脂肪细胞膜免疫的两种免疫方法,并对其发展前景进行了展望。; 郝慧芳苗向阳; 关键词：畜牧学脂肪细胞脂肪细胞膜免疫

商品长白杂交猪IgA H链CH1-CH3区基因的克隆与表达: 2007年; 在猪IgA重链CH1-CH3区设计一对引物,用RT-PCR方法从地方杂交品种长白猪肠系膜淋巴结组织中扩增出预期大小的片断,插入pGEM-Teasy载体,测序并与约克夏猪、人及其他动物的IgA进行序列比较。随后,将该序列酶切后引入到pQE-30表达载体相应位点,转化JM109大肠杆菌,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE分析。结果显示,本研究克隆了猪IgA重链恒定区部分CH1亚区及完整的CH2-CH3亚区基因序列,全长822bp,编码274个氨基酸,该序列与GenBank上登录的约克夏猪参考序列核苷酸序列同源率为99.8%,有2处核苷酸变异,氨基酸序列的同源率为100%。但与人及其他动物显示从84%～51%不等的同源性;在大肠杆菌表达出约31ku的蛋白条带,表达量约占菌体总蛋白的32.3%。本试验为今后的IgA免疫功能研究及基因工程化检测试剂开发打下了基础。; 李云岗孙稳平李新生高凤山郝慧芳夏春; 关键词：IGA

新城疫病毒作为疫苗载体的研究进展被引量：2: 2005年; 在综述新城疫病毒(NDV) 的分子生物学特征、致病本质、复制机理以及利用反向遗传操作技术获得NDV的感染性克隆的基础上,着重介绍了以NDV作载体,将报告基因、功能基因包括鸡传染性法氏囊病毒VP2基因及流感病毒HA基因等插入NDV基因组的不同位置构建重组新城疫病毒,并对外源基因进行成功表达的研究进展。同时对DNV作为新的疫苗载体表达外源基因的可行性及未来应用前景进行了初探。; 李新生闫若潜陈红英郝慧芳夏春; 关键词：新城疫病毒疫苗载体鸡传染性法氏囊病毒分子生物学特征 HA基因 DNV

抗猪脂肪细胞膜单链抗体基因的构建及鉴定被引量：3: 2004年; 应用噬菌体展示技术,从猪脂肪细胞免疫的小鼠脾细胞mRNA中构建出单链抗体(scFv)cDNA文库。cDNA文库克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E,转化E.coliTG1。通过噬菌体表面展示,用猪脂肪细胞对表达的重组噬菌体单链抗体文库进行3轮亲和富集,筛选出了猪脂肪细胞膜scFv,为今后的应用奠定了基础。; 苗向阳郝慧芳丁淑燕丁伟朱玉良邵建军; 关键词：单链抗体基因构建动物免疫

抗猪脂肪细胞膜蛋白单链抗体文库的构建: 该研究采用删减免疫法免疫动物,选用猪肝细胞作为耐受原腹腔免疫Ba1b/c 小鼠,然后于免疫后 15min、24h、48h腹腔注射环磷胺(Cyclophosphamide;CY)使小鼠对肝细胞膜表面抗原形成免疫耐受.免疫后...; 郝慧芳; 关键词：噬菌体展示单链抗体; 文献传递

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郝慧芳