金虎
- 作品数：8 被引量：25H指数：4
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：化学工程轻工技术与工程生物学农业科学更多>>
- 毕赤酵母流加培养诱导生产植酸酶的流加控制策略被引量：7
- 2006年
- 对毕赤酵母流加培养生产植酸酶过程中的底物和诱导剂流加策略和性能进行了比较研究。在生长期采用基于DO/pH在线测量的人工神经网络状态模式识别控制法（ANNPR—Ctrl）特别有效。它可大幅度提高细胞生产强度，并使以甲醇为诱导剂的植酸酶诱导生产时刻提前。然而，在诱导期ANNPR—Ctrl和pH—Stat法等均不能有效地提高植酸酶酶活。为此，在生长阶段采用ANNPR—Ctrl法，当菌浓达到一个较高水平后，引入一个5～6h的过渡期，并在此阶段继续利用ANNPR—Ctrl法流加葡萄糖和甲醇的混合物，使细胞对甲醇逐步产生适应。最后，利用纯甲醇和离线检测甲醇的控制方法开始诱导。在此阶段，离线控制可粗略地将甲醇浓度控制在5～15g/L的范围内，酶活高达320U/mL，比3种基本控制方式提高了5倍。同时，ANNPR—Ctrl法和离线检测甲醇控制模式的有效组合还缩短了酶活达到最高水平的时间。
- 金虎肖杰段生兵郑志永史仲平
- 关键词：毕赤酵母植酸酶流加培养
- 降低诱导温度提高毕赤酵母甲醇代谢关键酶基因转录水平和猪-α干扰素生产性能被引量：1
- 2011年
- 以一株表达猪-α干扰素（pIFN-α）重组毕赤酵母为研究对象，考察了诱导温度对pIFN-α表达、细胞代谢活性及甲醇代谢关键酶的影响。在5L发酵罐开展毕赤酵母高密度流加培养生产表达pIFN-α研究，利用实时PCR技术对不同诱导温度、诱导稳定期的胞内甲醇代谢关键酶（包括解毒酶）基因转录水平进行定量分析。低温（20℃）可以同时提高细胞的代谢活性和猪-α干扰素的表达水平，低温（20℃）下最高pIFN-α抗病毒活性达到5．57×10^6IU／mL，是30℃常温诱导下最高抗病毒活性（2．9×10^5IU／mL）的19．2倍；相比于30℃常温诱导，20℃下醇氧化酶（AOX）、甲醛脱氢酶（FLD）、甲酸脱氢酶（H）H）、过氧化氢酶（CAT）及二羟基丙酮合成酶（DHAS）基因的转录水平明显提高，其中CAT和DHAS转录水平的增加尤为显著。低温诱导提高pIFN-α表达原因在于：（1）甲醇利用速度快，细胞代谢活性强；（2）低温诱导下甲醛产能途径和解毒能力得到加强，为合成细胞物质提供更多的能量；（3）甲醛同化途径关键酶（DHAS）转录水平在低温下增强更为显著，促使更多的碳流向细胞合成和外源蛋白表达。
- 金虎戴科科汪汇慧李震段作营史仲平
- 关键词：毕赤酵母转录
- 多变量在线测量条件下的猪α干扰素高效表达被引量：6
- 2009年
- 在5L发酵罐中进行了重组毕赤酵母高密度培养表达猪α干扰素（IFN-α）的研究.在诱导阶段，高且稳定的摄氧速度（OUR）是实现毕赤酵母流加培养高效表达IFN-α的最关键因素，利用多变量在线测量可有效地帮助寻找高且稳定的OUR的形成条件.结果表明，高且稳定的OUR[约200-280mmol/（L·h）]可通过适度控制混加期及诱导期的菌体比增殖速度和甲醇浓度（约10g/L）而得以实现.在此条件下，猪α干扰素最高活性可达6.6×10^6IU/mL，是较低OUR的罐发酵及摇瓶条件下的10-300倍.
- 金虎高敏杰徐俊段作营刘立明李震史仲平
- 关键词：毕赤酵母流加培养猪Α干扰素
- 基于自联想神经网络的毕赤酵母发酵过程两阶段故障诊断被引量：1
- 2012年
- 在毕赤酵母表达人血清白蛋白-人白介素-2融合蛋白(IL-2-HSA)过程中,诱导期甲醇浓度和pH值直接影响了IL-2-HSA表达量的高低和发酵过程的稳定。为了准确有效的控制这两个参数,本论文基于毕赤酵母诱导期的生理学特性和过程参数特征,提出了基于自联想神经网络的毕赤酵母表达IL-2-HSA过程的诱导期两阶段故障诊断。研究结果表明该诊断系统能够在线快速准确地诊断出毕赤酵母诱导期的各种故障。当系统提示出现故障时,离线分析,对比最优的pH值和甲醇质量浓度变化曲线,确定故障类型,采取相应措施。
- 高敏杰詹晓北郑志永吴剑荣金虎
- 关键词：毕赤酵母神经网络故障诊断
- 甲醇/山梨醇共混流加诱导改变毕赤酵母生产猪α干扰素过程的代谢产能途径强化发酵性能被引量：5
- 2012年
- 旨在探讨毕赤酵母生产猪α干扰素过程的代谢产能规律及其对发酵性能的影响。在10 L罐下,开展了不同诱导条件下的毕赤酵母高效发酵生产猪α干扰素过程的代谢酶学和能量再生分析研究。结果表明:甲醇单独诱导条件下、将诱导温度从30℃降低到20℃,胞内醇氧化酶(AOX)、甲醛脱氢酶(FLD)和甲酸脱氢酶(FDH)的比活性增加显著,细胞的甲醇代谢和甲醛异化产能能力、猪α干扰素抗病毒活性大幅提高,最高抗病毒活性达到1.4×106IU/mL,约为30℃诱导条件下的10倍。30℃、甲醇/山梨醇共混流加下,主要供能途径由甲醇单独诱导时的甲醛异化代谢转向TCA循环,甲醛异化供能途径被弱化、毒副产物甲醛的生成积累得到抑制,走向目标蛋白合成途径的甲醇分配比例得到提高。此时,最高抗病毒活性达到1.8×107IU/mL,是30℃甲醇单独诱导下最高活性的100倍以上。更加重要的是,共混流加诱导可以在常温、使用空气供氧的条件下进行,发酵成本明显下降、整体发酵性能改善显著。
- 汪汇慧金虎高敏杰戴科科董世娟于瑞嵩李震史仲平
- 关键词：毕赤酵母甲醇山梨醇猪Α干扰素
- 不同控制模式对毕赤酵母表达IL-2-HSA的比较研究被引量：1
- 2008年
- 以溶氧（DO）和甲醇浓度作为控制指标，分别考察了诱导表达阶段DO和甲醇浓度对毕赤酵母高密度发酵表达白介素-2-白蛋白融合蛋白（IL-2-HSA）的影响。通过实验比较得出：诱导阶段控制DO对IL-2-HSA表达影响不明显，而甲醇浓度对IL-2-HSA影响很大。高甲醇浓度（15～25g／L）有利于IL-2-HSA的表达，发酵结束时的表达量约是低甲醇浓度（5～8g／L）诱导下的2倍。此外，在诱导阶段，通过限制性添加甘油可以有效提高菌体的呼吸活性，促进菌体生长。
- 堵益平高敏杰金虎史仲平
- 关键词：毕赤酵母溶氧
- 呼吸商监控毕赤酵母表达猪α干扰素活性水平的研究被引量：2
- 2010年
- 在5L发酵罐下开展毕赤酵母流加培养表达pIFN-α研究。通过多批次研究,结果表明:诱导阶段,RQ稳定情况可以作为反映底物甲醇浓度水平是否合适以及pIFN-α活性高低的监控指标。当甲醇浓度在8～12g/L水平时,RQ在整个诱导阶段能稳定在0.4～0.5之间某个特定值上,同时pIFN-α最高活性都能维持在106IU/mL水平上;而当甲醇浓度在0～5g/L或15～20g/L范围内时,RQ很不稳定,分别在0.15～0.4和0.4～0.8区间上下振动,相应的pIFN-α最高活性也只在103IU/mL和104IU/mL水平上。
- 徐俊金虎高敏杰虞瑞嵩董世娟段作营史仲平李震
- 关键词：毕赤酵母猪Α干扰素呼吸商流加培养
- 降低诱导温度对改善猪α-干扰素发酵生产性能和ATP再生效率的作用被引量：4
- 2011年
- 在10 L发酵罐、控制甲醇浓度的条件下,考察了诱导温度对毕赤酵母发酵生产猪α-干扰素(pIFN-α)性能的影响。结果表明,温度对pIFN-α表达的影响明显,20℃低温有利于pIFN-α的表达,该条件下pIFN-α最高活性可达1.5×106IU·ml-1,是30℃传统诱导生产时最高活性(1.0×104 IU·ml-1)的150倍。发酵状态参数的在线测量和代谢分析结果表明,20℃低温诱导环境下,细胞代谢活性高、甲醇比消耗速度(0.036 h-1)比30℃时的(0.021 h-1)大;同时,低温诱导下的CO2释放速度(CER)和呼吸商(RQ)均较低,表明改变诱导温度可以改变胞内代谢流的分配。更重要的是,低温诱导既可以增加目标蛋白表达支路的碳代谢流,又可以提高甲醇能量代谢支路中产生的NADH利用效率、改善毕赤酵母生产pIFN-α系统的ATP再生效率和速度,实现了目标蛋白的高效表达。
- 刘国强金虎高敏杰戴科科汪汇慧李震史仲平
- 关键词：毕赤酵母
