陈平
- 作品数：11 被引量：51H指数：5
- 供职机构：云南省地方病防治所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 鼠疫F1单克隆抗体杂交瘤株建立过程中几个重要因素的探讨
- 2006年
- 尹家祥陈平杜春红唐雪董兴齐于国林
- 鼠疫F1单克隆抗体建株过程中的动物免疫被引量：3
- 2005年
- 目的探讨在建立抗鼠疫F1抗原的单克隆抗体杂交瘤株的过程中抗原免疫的剂量及免疫方法.方法采用F1抗原常规免疫、改良的F1抗原脾内注射免疫以及EV菌免疫3种方法免疫6～8周龄,体重为10～20g,健康的雌性BALB/c小鼠,并用间接ELISA法检测尾血中的抗体. 结果在常规免疫中,200μg 组和100μg组免疫效果优于50μg组,而200μg组和100μg组免疫效果基本一致;改良的F1抗原脾内注射免疫,血中抗体效价较高;EV菌免疫的效果不理想. 结论用F1抗原常规免疫小鼠,免疫剂量用100μg/只较为合适;若要缩短免疫时间,采用改良的脾内注射免疫法是理想的选择.
- 尹家祥于国林陈平杜春红唐雪
- 关键词：鼠疫F1抗原动物免疫单克隆抗体
- 胶体金免疫层析法快速诊断鼠疫的实验研究被引量：15
- 2006年
- 目的建立一种快速、简易的检测鼠疫F1抗原的胶体金免疫层析法(G ICA)。方法采用直径为20nm胶体金颗粒,标记F1单克隆抗体,并将标记物以6μL/cm喷于玻璃纤维;将另1株F1单克隆抗体与羊抗鼠IgG以1μL/cm喷线固定于硝酸纤维素膜上,装配后以4mm/条切割制成免疫层析检测试条。分别用粗制F1抗原和EV菌对该试纸条的敏感性进行测定,同时用44株鼠疫近缘菌及昆明小鼠、黄胸鼠、褐家鼠、大足鼠的正常血清等标本进行特异性检测。结果本试纸条可在15m in之内完成实验,检测粗制F1抗原的浓度可达0.5ng/mL,最小检出EV菌菌量为10万个;本方法的特异性为100%。结论G ICA检测鼠疫F1抗原特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有广泛应用价值。
- 王鹏杜春红郭英尹家祥石丽媛陈平唐雪钟佑宏黄鹏吴明寿董兴齐于国林
- 关键词：鼠疫胶体金免疫层析F1抗原
- 鼠疫快速诊断技术及其应用研究
- 于国林王鹏尹家祥杜春红石丽媛郭英陈平吴明寿黄鹏钟佑宏董珊珊唐雪
- 本课题采用新技术首次将鼠疫FI抗原及其单克隆抗体纯化至“免疫纯水平”；以“免疫纯”抗原、单克隆抗体构建了快速检测鼠疫的胶体金标免疫层析技术；采用独特的研究思路使该技术首次达到了鼠疫快速诊断对准确性的要求，解决了免疫学诊断...
- 关键词：
- 关键词：鼠疫
- 分泌抗鼠疫耶尔森菌F1抗原单克隆抗体杂交瘤株的建立被引量：10
- 2005年
- 目的应用杂交瘤技术,制备分泌抗鼠疫F1抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法用鼠疫菌F1抗原免疫雌性BALB/c小鼠,检测小鼠血清中的F1抗体,选抗体滴度最高的小鼠用于细胞融合,融合前3天F1抗原经腹腔注射加强免疫1次,然后取其脾脏细胞与处于对数生长期的SP2/0骨髓瘤细胞混合,50%的PEG作为细胞融合剂,HAT培养液选择培养融合后的细胞,间接ELISA法检测细胞培养上清中的F1抗体,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法进行克隆及再克隆。结果获得共计100余株分泌F1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,3株进行了4次克隆化,经8个月保存后抗体分泌稳定。结论应用杂交瘤技术,在云南首次成功制备了3株能稳定分泌抗鼠疫杆菌F1抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,建立了杂交瘤技术的实验程序。
- 尹家祥陈平杜春红董兴齐于国林
- 关键词：耶尔森菌鼠疫F1抗原杂交瘤细胞单克隆抗体
- BALB/c小鼠选择与腹水产量和抗体效价间关系的研究被引量：6
- 2008年
- 目的观察在鼠疫F1单克隆抗体制备过程中，BALB／c小鼠的选择和饲养与所获腹水量和抗体效价的关系，为大量制备该单克隆抗体提供实验室参考依据。方法根据小鼠周龄、性别和饲养条件对BALB／c小鼠进行分组，并采用动物体内诱生法制备腹水，间接ELISA用来检测腹水中F1单克隆抗体效价。结果12～16周龄组、雄性和加强营养组小鼠所获腹水产量和效价均高于其它周龄组和对照组。结论选择适当周龄的雄性小鼠、饲养过程中加强营养和管理可适当提高腹水产量和抗体的效价。
- 杜春红钟佑宏陈平尹家祥石丽媛于国林
- 关键词：BALB/C小鼠腹水
- 平均分布细胞进行鼠疫杂交瘤株克隆化的实验研究被引量：6
- 2007年
- 目的探讨在建立了分泌抗鼠疫F1抗原的单克隆抗体杂交瘤株后,对其进行克隆化的实验方法。方法对我课题组融合成功的5株杂交瘤株,采用初步计数后取约100个细胞,平均分布于96孔细胞培养板进行克隆化,用间接ELISA法检测培养孔上清的抗体。结果用该方法进行克隆化,在96孔板中单克隆生长孔平均为26孔、多克隆为15孔,在1～2次克隆后,上清抗体检测均达到100%,与有限稀释法无差异。结论采用计数100个细胞进行克隆化的方法是可行的。
- 杜春红陈平尹家祥钟佑宏于国林王鹏
- 关键词：杂交瘤细胞单克隆抗体鼠疫克隆化
- 鼠疫快速诊断技术及其应用研究被引量：14
- 2006年
- 目的寻找和确定引起特异性不足的因素,实施科学的对策加以解决,真正实现鼠疫的快速诊断技术并以此为基础构建新一代的检测技术。方法(1)研制高质量的鼠疫F1抗原的单克隆抗体,考虑到位点问题要求尽可能多的、针对不同位点的高效价瘤株,构建稳定的“抗体源;”(2)利用获得的高效瘤株通过纯系小鼠生产抗体或用无蛋白细胞培基生产抗体;(3)对抗体进行纯化并使其达到“免疫纯水平”并建立提取、纯化工艺,最终建立稳定的低成本的无交叉“抗体源;”(4)纯化抗原至“免疫纯水平”或“电泳纯水平”,建立提取、纯化工艺,最终建立稳定低成本的无交叉“抗原源;”(5)对新一代快速检测技术进行实验室和现场评价,对特异性即实验的准确性做出评价。结果(1)确定了影响鼠疫免疫学诊断技术特别是间接红细胞凝集试验(IHA及R IHA)特异性不足的两大因素:a.技术落后,试验中采用的载体不适导致了相当数量的假性凝集;b.技术方法中使用的抗原、抗体严重不纯,尤其是制备抗体时免疫动物“自身抗体”的掺入是造成交叉反应更重要的因素;(2)研制并开发出分泌抗鼠疫F1单克隆抗体(F1-M cAb)的杂交瘤株164株,并从其中筛选出针对不同位点的高效瘤株6株,经活性鉴定及配对试验形成了4个组合,具高效价和高活性;(3)使用制备电泳技术将鼠疫F1抗原提纯至电泳纯水平;(4)将鼠疫F1-M cAb提纯至免疫纯水平;(5)引进、消化了具有先进水平的胶体金标免疫层析技术;(6)使用电泳纯的鼠疫F1抗原及免疫纯的鼠疫F1-M cAb构建了能自人和动物血液中直接检测鼠疫特异抗体的金标免疫层析技术(G ICA)和能自人和动物脏器或穿剌物中直接检测鼠疫F1抗原或鼠疫病原的反向金标免疫层析技术(RG ICA);(7)由于采用了纯化的抗原、抗体,提高了标记效果,其敏感性超过IHA和R IHA,阳性检出率在排除了假�
- 于国林王鹏尹家祥杜春红石丽媛郭英陈平吴明寿黄鹏钟佑宏董珊珊
- 关键词：鼠疫
- 鼠疫F1单克隆抗体腹水制备过程中的影响因素分析被引量：3
- 2007年
- 目的分析制备鼠疫F1单克隆抗体腹水中的一些影响因素。方法收集课题组在制备腹水过程中的相关资料并进行分析。结果腹水的制备受小鼠、免疫抑制剂、杂交瘤细胞的性状、腹水的采集与处理等方面因素的影响。结论通过采取一些措施,可以适当提高鼠疫F1单克隆抗体的腹水质量。
- 杜春红王鹏钟佑宏陈平尹家祥于国林
- 关键词：鼠疫单克隆抗体腹水影响因素
- 辣根过氧化物酶标记不同表型鼠疫F1单克隆抗体的效果观察被引量：4
- 2006年
- 目的观察用辣根过氧化物酶(HRP)标记4种鼠疫F1抗体的效果。方法使用过碘酸钠改良法制备酶结合物,酶标抗体的效价和最适工作浓度用双抗体夹心法测定。结果3株鼠疫F1单克隆抗体中B12标记成功;鼠疫γ球蛋白标记效果较鼠疫F1单克隆抗体B12差。结论过碘酸钠改良法制备辣根过氧化物酶标记鼠疫F1单克隆抗体B12效果优于另外3种鼠疫F1抗体。
- 尹家祥唐雪陈平杜春红董兴齐于国林
- 关键词：鼠疫F1抗原单克隆抗体
