韩峰
- 作品数:71 被引量:290H指数:9
- 供职机构:中国海洋大学更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金国家高技术研究发展计划山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域:生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- κ-卡拉胶酶CgkX催化区的重组表达菌株筛选和发酵优化被引量:1
- 2016年
- 目的:CgkX是来自Pseudoalteromonas sp.QY203的一种高活性、高稳定性的κ-卡拉胶酶,本文旨在构建CgkX催化结构域(CgkX-CM)重组表达菌株,并对发酵条件进行优化,提高CgkX-CM的产量。方法:在分析κ-卡拉胶酶CgkX-CM基因序列的基础上,构建多种CgkX-CM表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组表达,通过酶活测定筛选其中产量最高的表达菌株,并优化发酵起始pH、诱导温度、IPTG浓度、装液量以及甘氨酸浓度等因素。结果:构建了5种重组表达菌株,其中E.coli BL21(DE3)/p ET22b-CgkX-CM酶产量是其他重组菌株的7.4-11.6倍。确定了该菌株最佳发酵条件为:培养基含1 g·L^(-1)甘氨酸(起始pH 7.5),装液量为75 m L,0.1 mmol·L^(-1) IPTG 20℃诱导28 h,酶产量是优化前的7.3倍。结论:经过重组表达载体筛选和发酵优化,CgkX-CM产量大幅度提高,为今后比较CgkX全长及其催化区域的酶学性质,确定C端Big_2结构域对CgkX的作用奠定了基础。
- 张兰苏平安杨雪梅于文功韩峰
- 关键词:催化结构域发酵优化
- 海洋弧菌QY103褐藻胶裂解酶的研究
- 褐藻胶是由β-D-甘露糖醛酸和α-L-古罗糖醛酸两种糖单元通过1,4糖苷键聚合而成的线性大分子,主要存在于海带、马尾藻、巨藻等褐藻的细胞壁和细胞间质。另外,假单胞菌属、固氮菌属等细菌也可以产生胞外褐藻胶,但在β-D-甘露...
- 韩峰
- 关键词:海洋弧菌褐藻胶裂解酶
- 文献传递
- 褐藻胶裂解酶产生菌Vibro sp.QY102的发酵条件优化被引量:17
- 2007年
- 对海洋来源的Vibro sp.QY102的产褐藻胶裂解酶的发酵条件进行研究。结果表明,该菌株最适液体培养基成分为(w/v):0.5%褐藻酸钠;0.4%蛋白胨;0.3%KH2PO4;0.7%K2HPO4.3H2O;2%NaCl;0.01%MgSO4.7H2O,pH=6.0。按3%的接种量接入培养基,30℃150 r/min振荡培养120 h,产酶达到10.2 U/mL,为优化前的4.5倍。Mg2+是该菌株产酶所必需的,这在其他褐藻胶裂解酶生产菌株中未见报道。该菌株产酶发酵条件的研究,为褐藻胶裂解酶的大规模制备及应用奠定了基础。
- 傅晓妍李京宝韩峰路新枝于文功
- 关键词:褐藻胶裂解酶弧菌发酵条件
- 参加生药学实验课程教学评估的体会
- 2023年
- 生药学是药学专业核心课程之一,实验教学在生药学课程中占有重要地位。通过实验教学,不仅培养学生的科学思维能力、实践操作能力以及严谨扎实的科研态度,学生还掌握了生药鉴定的基本方法,初步具备了鉴别生药的能力。2022年秋季学期笔者参加了学校组织的生药学实验课程教学评估工作,教学质量和效果得到了评估专家和学生的一致好评,本文总结了教学评估中的经验。
- 李海花刘婵娟刘婵娟韩峰韩峰郝杰杰刘红兵李春霞
- 关键词:教学评估教学质量
- 一种β-琼胶酶基因aga及其制备方法和应用
- 本发明的β-琼胶酶基因agaA是编码假别单胞菌CY24的β-琼胶酶的基因,用其生产的重组β-琼胶酶温度和pH稳定性好,活性高,能降解琼脂糖,降解产物主要为聚合度2-6的新琼寡糖,因此可以用于新琼寡糖的制备以及从琼脂糖凝胶...
- 褚艳韩峰李京宝路新枝
- 文献传递
- 一种β-琼胶酶基因agaB及其制备方法和应用
- 一种β-琼胶酶基因agaB,其特征在于它是编码假别单胞菌CY24的β-琼胶酶的基因。本发明的β-琼胶酶基因agaB编码的β-琼胶酶能够特异性地降解琼胶产生聚合度为8-14的新琼寡糖,每种主要新琼寡糖在降解产物中的含量大于...
- 于文功马翠萍路新枝韩峰褚艳石超
- 文献传递
- 海洋细菌QY202产κ-卡拉胶酶的分离纯化和性质研究被引量:5
- 2010年
- 为获得高效降解卡拉胶菌株,从青岛太平角海域采集的角叉菜表面分离到1株高产κ-卡拉胶酶的海洋交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)QY202,经硫酸铵沉淀、脱盐、DEAE阴离子交换层析等步骤从该菌株发酵液上清中分离纯化得到1种专一性降解κ-卡拉胶的κ-卡拉胶酶,并研究了该酶的基本酶学性质。结果表明该酶被纯化了23.1倍,回收率为43.9%,分子量大小为33.2 kDa。酶的最适反应温度为40℃,最适反应pH为8.0,在0-40℃,pH=7.0-8.0之间酶活力较稳定。酶对底物κ-卡拉胶的米氏常数Km值为1.6 mg/mL。Na^+、K^+对酶活有促进作用,而Hg^2+、Cu^2+强烈抑制酶的活性。酶解κ-卡拉胶的主产物为硫酸新κ-卡拉二糖和硫酸新κ-卡拉四糖。
- 段高飞苏贝韩峰于文功
- 关键词:交替假单胞菌分离纯化
- 海洋弧菌QY105中褐藻胶寡糖酶OalA的基因克隆、重组表达与性质研究被引量:2
- 2016年
- 目的褐藻胶寡糖酶可将褐藻胶多糖和寡糖降解为单糖,但现有的褐藻胶寡糖酶数量极少且活力较差。本文旨在从海洋弧菌QY105中克隆寡糖酶OalA的编码基因,重组表达并研究其酶学性质。方法利用简并PCR和SiteFinding-PCR从海洋弧菌QY105中克隆得到褐藻胶寡糖酶OalA的编码基因,在大肠杆菌中进行重组表达,对重组酶进行分离纯化及酶学性质研究。结果褐藻胶寡糖酶OalA基因全长2082bp,编码1条含有693个氨基酸残基的多肽链,理论分子量为79.17kDa,理论等电点为4.98,属于多糖裂解酶第15家族(PL^(-1)5)。重组OalA比活力为9.2U·mg^(-1),最适温度30℃,在10℃的酶活力达到最高酶活的45%,最适pH7.6,在低于30℃和pH6~10范围内稳定,偏好降解polyM。结论OalA具有低温酶的特点,且对polyM具有偏好性,可用于褐藻胶单糖制备、PL^(-1)5家族结构与功能相互关系研究等领域。
- 王莹张兰王亚楚艺于文功韩峰
- 关键词:褐藻胶弧菌
- 褐藻胶裂合酶的制备方法及其应用
- 一种褐藻胶裂合酶的制备方法,其特征是配制培养基,灭菌,冷却后,以弧菌进行接种,然后恒温摇床振荡发酵培养,将所得发酵液除菌,对上清液超滤浓缩;所述的弧菌为Vibrio sp.QY101。本发明的优点是:发酵时间短,产量高,...
- 于文功宋凯韩峰路新枝宫倩红
- 文献传递
- 一种新的褐藻胶裂合酶及其制备方法和应用
- 一种褐藻胶裂合酶的制备方法,包括配制培养基,灭菌后接入弧菌,然后在恒温摇床振荡发酵,其特征是将所得发酵液除菌后用微孔滤膜过滤,对上清液进行压滤浓缩至干,再用疏水层析除去与产品结合的褐藻胶。优点是本发明中的褐藻胶裂合酶活力...
- 于文功李京宝韩峰路新枝宫倩红
- 文献传递