高云
- 作品数：14 被引量：22H指数：2
- 供职机构：江苏省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目卫生部科学研究基金更多>>
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- 培美曲塞对不同miR-21表达水平人肺癌细胞凋亡影响的实验研究
- 2012年
- 目的检测不同miR-21表达水平的人肺癌细胞对培美曲塞的药物敏感性,并探讨可能作用机制。方法采用Annexin V-EGFP荧光染色法定性检测及流式细胞术定量检测培美曲塞对不同miR-21表达水平的A549人肺癌细胞凋亡诱导作用,级联酶底物显色法检测caspase-3的活化状态,蛋白免疫杂交法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达水平变化。结果20μmol/L培美曲塞作用24h可以诱导高表达miR-21的A549人肺癌细胞(A549-21H0)和低表达miR-21的A549细胞(A549-21L0)的凋亡,且A549-21L0处于细胞凋亡晚期,而A549-21H0处于细胞凋亡早期。5μmol/L培美曲塞作用24h可以诱导65.3%的A549-21L0细胞早期凋亡,仅诱导2.8%的A549-21H0细胞早期凋亡。5μmol/L培美曲塞作用6h即可引起A549-21L0细胞中caspase-3活化,与作用前相比活化效应超过2倍(P<0.01);在9h时活化效应最强,活化效应超过7倍(P<0.01);18h后活化效应超过6倍(P<0.01);至24h时活化效应仍在5倍以上(P<0.01)。同样条件下,5μmol/L培美曲塞作用18h才引起A549-21H0细胞中caspase-3活化,与作用前相比活化效应接近3倍(P<0.01),至24h活化效应在4倍以上(P<0.01)。5μmol/L培美曲塞作用于A549-21L0细胞9h即可引起Bax表达水平显著性升高和Bcl-2表达水平明显下降。结论A549-21L0人肺癌细胞对培美曲塞诱导的细胞凋亡具有更高的敏感性。培美曲塞可引起A549-21L0细胞中caspase-3活化,并可通过调控Bax和Bcl-2表达水平诱导凋亡,这种效应具有一定的时间-效应关系。
- 印洁李玉枫宋勇姚鸣高云孙倍成施毅
- 关键词：MIR-21肺癌凋亡培美曲塞
- miR-21在肺癌血管生成中的作用及培美曲塞对其影响被引量：8
- 2012年
- 目的肺癌死亡率居肿瘤相关疾病死因的首位。肿瘤组织中血管异常增生,与肿瘤的分级、转移和预后不良密切相关。文中利用体内外血管生成模型评价肺癌细胞不同miR-21表达水平肺癌细胞在肿瘤血管生成中的作用及其可能机制,并探讨培美曲塞对其影响。方法采用划痕实验研究不同miR-21表达水平肺癌细胞培养上清对血管内皮细胞增殖能力的影响。采用Luminex检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在不同miR-21表达水平肺癌细胞培养上清中的表达水平。采用免疫组化法检测CD31(亦称血小板内皮细胞黏附分子-1)、血管内皮生长因子受体2(Vascularendothelial growth factor receptor 2,VEGFR2)及磷酸化VEGFR2蛋白在不同miR-21表达水平肺癌实体瘤组织的表达水平差异。结果划痕实验表明,miR-21高表达的人肺癌A549(A549-21H)细胞划痕修复能力明显强于miR-21低表达的人肺癌A549(A549-21L)细胞,表现为划痕直径明显缩小。Luminex检测VEGF在不同miR-21表达水平肺癌细胞培养上清的表达水平,实验结果表明,A549-21H细胞培养上清中VEGF含量显著高于A549-21L。采用IHC法检测裸鼠肺癌移植瘤中CD31、VEGFR2及磷酸化VEGFR2蛋白表达变化研究结果表明,A549-21H瘤体CD31表达明显高于A549-21L(P<0.01),A549-21H瘤体VEGFR2表达与A549-21L比较无显著性差异,A549-21H瘤体Tyr951磷酸化VEGFR2表达明显高于A549-21L(P<0.01)。结论 miR-21可能通过调节VEGF表达水平及VEGFR2磷酸化水平参与肿瘤血管生成的调控,培美曲塞对肿瘤血管生成具有一定的抑制作用。
- 印洁李玉枫宋勇姚鸣高云孙倍成施毅
- 关键词：MIR-21非小细胞肺癌血管生成血管内皮生长因子培美曲塞
- 人肿瘤抑素(tumstatin)的基因克隆及其原核表达被引量：1
- 2005年
- 目的克隆人肿瘤抑素(tumstatin)基因,并进行其在大肠杆菌表达的研究。方法用RT-PCR技术从人肾癌旁组织中扩增出肿瘤抑素的cDNA,构建原核表达载体pQE-tum,IPTG诱导重组蛋白质的表达,并利用Ni-NTAHis-Bind树脂纯化该重组蛋白质。结果经PCR扩增成功获得742 bp的人肿瘤抑素基因,测序正确。在大肠杆菌中目的蛋白质的表达量占菌体总蛋白质的10%,SDS-PAGE及Western blot分析显示,其相对分子质量为28 000,纯化后的6×His-tumstatin纯度可达92%。结论tumstatin基因克隆、表达及纯化的成功,为其今后的肿瘤抗血管生成治疗研究奠定了基础。
- 高云俞悦陆森孙倍成王学浩
- 关键词：肿瘤抑素原核表达纯化
- IMP3与IGF2在乙肝相关性肝癌组织中表达及与临床病理特征的关系被引量：2
- 2014年
- 目的：研究胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3（IMP3）与胰岛素样生长因子2（IGF2）在乙肝相关性肝癌中的表达,并探讨二者的相关性及与乙肝相关性肝癌临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学法,检测82例乙肝相关性肝癌组织及对应癌旁组织中IMP3及IGF2的表达;采用实时定量聚合酶链式反应法检测32例冰冻肝癌组织中IMP3及IGF2 mRNA含量;采用蛋白质印迹法检测4例IMP3强阳性染色及4例IMP3阴性染色对应的新鲜冰冻肝癌组织中IMP3及IGF2蛋白含量。结果：IMP3在62.2%肝癌组织中表达,在癌旁组织中不表达。IGF2在59.8%肝癌组织及14.6%癌旁组织中表达。同时,IMP3与IGF2在乙肝相关性肝癌组织中表达密切相关（rn = 0.335,P = 0.002）。另外,IMP3高表达与Edmondson-Steiner 3-4级（P = 0.001）、TNM 3-4期（P = 0.001）、α-甲胎蛋白（AFP）〉 200 ng/ml （P = 0.012）及伴有门脉癌栓的肿瘤（P = 0.018）均密切相关;与IMP3表达相似,IGF2高表达亦与Edmondson-Steiner 3-4级（P = 0.001）、TNM 3-4期（P 〈 0.001）及伴有门脉癌栓的肿瘤（P 〈 0.001）密切相关。结论：IMP3与IGF2在乙肝相关性肝癌组织中表达密切相关,同时,IMP3与IGF2蛋白分子的检测有助于判断肿瘤恶性分化程度及进展。
- 胡帅俞悦高云吕凌李国强
- 关键词：IMP3IGF2乙肝相关性肝癌临床病理特征
- 慢病毒载体介导的针对端粒酶的RNA干扰技术对HepG2细胞的体外效应
- 2009年
- 目的观察针对hTERT的siRNA对肝癌HepG2细胞的体外抑制效应。方法将逆转录表达载体中的针对hTERT的siRNA序列亚克隆至慢病毒表达载体pWPT-GFP中,经293T细胞包装,收集病毒上清,感染肝癌细胞株HepG2。采用半定量RT-PCR法、TRAP法及MTT法,分别检测hTERT基因表达、端粒酶活性、肿瘤细胞生长抑制情况等。结果限制性内切酶酶切分析表明成功构建了靶向人端粒酶逆转录酶的干扰RNA的慢病毒表达载体;以293T包装的重组慢病毒能够高效感染肝癌细胞,感染效率可达99%以上;在稳定表达pWPT-hTERT-siRNA的肝癌细胞中,hTERT mRNA表达水平、肿瘤细胞的体外增殖受到抑制。结论慢病毒介导的siRNA转染能明显抑制恶性肝癌细胞的生长。
- 张勇高云邓蕾席力森殷爱红王学浩孙倍成
- 关键词：RNA干扰逆转录病毒载体人端粒酶逆转录酶
- 慢病毒载体介导端粒酶逆转录酶小干扰RNA治疗肝癌的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨慢病毒介导的端粒酶逆转录酶（hTERT）小干扰RNA（siRNA）对肝癌细胞生长的影响。方法构建携带hTERTsiRNA的慢病毒表达载体，在体外转染人肝癌HepG2细胞系，以MTr法测定细胞生长变化，半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测hTERTmRNA的表达。将转染hTERTsiRNA的HepG2细胞，接种于裸鼠腋窝皮下，观察移植瘤生长情况。取移植瘤组织，常规HE染色，行组织学观察，应用原位末端标记（TUNEL）技术检测细胞凋亡情况。结果hTERTsiRNA转染HepG2细胞后，随着时问的延长，对细胞增殖的抑制作用逐渐增强，到第8天，于扰组细胞抑制率为57．5％，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。RT—PCR产物凝胶电泳图显示，hTERTsiRNA转染后，肿瘤细胞的端粒酶活性明显下降。转染后72h，干扰组hTERTmRNA的表达水平为0．035±0．007，明显低于空载体对照组（0．151±0．016）和空白对照组（0．155±0．014，均P〈0．01）。转染细胞皮下接种后，干扰组的肿瘤生长速度明显慢于两个对照组，随着时间的延长，差异越来越明显。移植瘤组织常规HE染色显示，组织坏死增多，周围炎性细胞浸润。TUNEL检测结果显示，细胞凋亡增多，增殖减慢。结论慢病毒介导的hTERTsiRNA转染能明显抑制肝癌细胞的生长。
- 张勇高云席力森邓蕾殷爱红王学浩孙倍成
- 关键词：端粒酶逆转录酶RNA干扰慢病毒
- 腺相关病毒载体介导的CTLA4Ig表达对大鼠肝移植免疫抑制作用的实验研究被引量：2
- 2005年
- 目的:将CTLA4Ig腺相关病毒载体经门静脉导入移植肝中,研究该基因在移植肝中的表达以及对同种异体大鼠肝移植排斥反应的抑制作用.方法:二袖套法建立大鼠肝移植模型,供体为SD大鼠,受体为Wistar大鼠,受体随机分成3组,每组12对,对照组:将1011v.g.pSNAV-LacZ病毒液灌注移植肝门静脉并冷保存1 h;CsA组:移植后第1～7天腹腔内注射CsA 8 mg(kg·d);基因转染组:供肝加用1011v.g.pSNAV-CTLA4Ig病毒液灌注移植肝门静脉并冷保存1 h,术后1周剖腹取肝、脾和血标本.RT-PCR检测移植肝中CTLA4Ig的表达,双抗体夹心法测定血中CTLA4Ig浓度,TUNEL法检测肝细胞、脾淋巴细胞凋亡情况,并观察大鼠生存时间.结果:基因转染组大鼠生存时间平均为61天,与对照组10天比较差异有显著性(P＜0.05).基因转染组大鼠的肝脏中能扩增出特异性约500bp条带,而对照组未能扩增出相应条带,基因转染组血中CTLA4Ig浓度为(41.87±11.02)μg/ml,明显高于对照组(0.49±0.16)μg/ml,基因转染组大鼠肝移植术后1周肝细胞凋亡计数(5.88±1.88)%与对照组(28.25±6.50)%相比较差异有显著性(P＜0.05).基因转染组大鼠肝移植术后1周脾淋巴细胞凋亡计数(57.62±10.83)%与对照组(16.37±3.11)%相比较差异有显著性(P＜0.05).结论:经门静脉供肝灌注pSNAV-CTLA4Ig能在大鼠移植肝内良好表达,延长生存时间.
- 陆森李国强王学浩俞悦高云
- 关键词：腺相关病毒CTLA4IG肝移植
- 针对人IKKα、IKKβ基因RNA干扰慢病毒质粒的构建及其对人肝癌细胞生长的影响被引量：2
- 2009年
- 目的构建人IKKα、IKKβ基因RNA干扰慢病毒质粒,并观察其对肝癌细胞生长的影响。方法将目的片段亚克隆入慢病毒载体中,包装成病毒后感染人肝癌细胞,检测细胞IKKα、IKKβ的表达,并将感染细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况。结果目的片段被成功克隆入载体质粒。pLenti-GFP-IKKα-SiRNA慢病毒液感染的细胞中IKKα蛋白表达明显降低,pLenti-GFP-IKKβ-SiRNA慢病毒液感染的细胞中IKKβ蛋白表达明显降低。实验组裸鼠皮下肿瘤出现晚且生长缓慢。结论成功构建了针对人IKKα、IKKβ基因RNA干扰慢病毒质粒,包装成病毒后感染人肝癌细胞后能抑制其生长。
- 李俊孙倍成邓蕾张勇席力森高云王学浩
- 关键词：核糖核酸干扰肝癌
- 一种肝胆系统肿瘤类器官培养基及培养方法
- 本发明涉及一种肝胆系统肿瘤类器官培养基，由如下成分组成：基础培养基、条件培养基、青链霉素、谷氨酰胺、HEPES、B27、N2添加剂、N‑乙酰半胱氨酸、烟酰胺、Gastrin I、EGF、FGF10、HGF、重组人Nogg...
- 高云王学浩浦立勇陈潇远
- 肝移植围手术期损伤及术后肿瘤复发机制
- 李相成王学浩李长贤俞悦王科高云韩晟王东姚爱华游伟焦臣
- 肝移植是治疗终末期肝病的唯一有效手段，是现代医学发展的里程碑，挽救了无数患者的生命。然而，肝移植围手术期损伤、肝移植后再生障碍、肝癌术后复发是长期困扰肝移植疗效的关键性因素，严重影响肝移植患者长期存活率及生活质量。南京医...
- 关键词：
- 关键词：肝移植治疗肿瘤复发肝癌
