黄海燕
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系分子医学教育部重点实验室更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人睫状神经营养因子基因的克隆、表达、纯化和生物活性鉴定
- 2005年
- 目的表达和纯化人睫状神经营养因子(CNTF)并观察其生物学活性。方法用PCR方法构建人CNTF的结构基因,并克隆于pLy4原核表达载体中。将重组表达质粒pLy4-CNTF转化大肠埃希菌JF1125,30℃培养至A600(nm)达到0.6时,迅速升温至42℃诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破胞,包涵体经变性、复性、透析和阴离子交换层析,获得纯化的CNTF重组蛋白。然后,用鸡胚背根神经节神经元细胞存活实验观察其生物活性。结果42℃诱导后可以获得Mr≈22.9×103的目的蛋白,Western印迹结果进一步表明,其具有人CNTF的抗原性。表达蛋白主要以不溶形式存在,占菌体蛋白的35%以上,表达产物经变性、复性,纯化后可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够促进鸡胚背根神经节神经元细胞的存活。结论在大肠埃希菌JF1125中成功表达了人CNTF分子,经变性、复性,纯化后得到具有生物活性的蛋白。
- 窦金民郭莉莉刘宏磊陈接根黄海燕宋后燕汤其群
- 关键词：人睫状神经营养因子生物活性鉴定纯化WESTERN印迹背根神经节神经元CNTF
