黄进
- 作品数：5 被引量：43H指数：3
- 供职机构：同济大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科委纳米专项基金上海市浦江人才计划项目更多>>
- 相关领域：生物学理学医药卫生更多>>
- 一种高效省时的利用磷酸钙转染DNA的改进方法被引量：1
- 2016年
- 对传统磷酸钙转染方法进行改进,即在经胰酶消化处理成悬浮状态的293T细胞悬液中直接加入磷酸钙转染试剂,而不需待其贴壁后再加转染试剂进行转染.通过比较悬浮和贴壁状态下293T细胞的转染效率、细胞增殖和荧光强度等指标,发现这两种转染方法的各项指标没有显著性差异.结果表明,293T细胞在悬浮状态下进行磷酸钙转染与传统的贴壁转染能够达到同等效果,在用胰酶消化的单细胞悬液中直接加入磷酸钙转染试剂进行转染,不影响细胞的转染效果,节省了操作步骤,缩短了操作时间.
- 黄进傅吉强张庆华
- 关键词：293T细胞磷酸钙细胞转染
- 纳米壳寡糖-铁配合物的制备及其生物活性的研究被引量：21
- 2006年
- 用分子量为5000的壳寡糖与FeCl3反应制得纳米壳寡糖-铁配合物,并通过FTIR,UV,DTA,TEM,PCS等手段对其结构与形态进行了表征.同时用紫外光谱法和凝胶电泳法对纳米壳寡糖以及纳米壳寡糖-铁配合物的生物活性进行了研究,实验结果表明纳米壳寡糖-铁配合物是以静电嵌插的方式与质粒DNA进行结合,而致使DNA损伤.
- 黄进汪世龙孙晓宇张蕤姚思德
- 关键词：质粒DNA紫外光谱法生物活性
- 纳米级壳寡糖/DNA复合物的制备和性能研究被引量：4
- 2007年
- 同甲壳素和壳聚糖这种生物大分子相比,壳寡糖具有许多独特的功能性质,如水溶性、保湿性、抗菌性、抗肿瘤和免疫促进性等。以数均分子量为5000的壳寡糖作为研究模型,根据凝胶电泳和紫外光谱分析,提出纳米级壳寡糖与pEGFPC-1质粒能通过静电结合或物理包裹形成复合物从而对DNA进行保护,同时证明形成壳寡糖/DNA复合物后,壳寡糖能够极大地提高DNA的贮存稳定性和结构稳定性;而DNaseI酶解实验也显示纳米级壳寡糖在合适比例下DNA有良好的保护作用,使其不被DNaseI降解,证明了纳米级壳寡糖应用于基因治疗载体的可行性与安全性。
- 钱君律朱融融黄进汪世龙孙晓宇
- 关键词：基因载体紫外光谱法
- 壳聚糖及其衍生物基因载体的研究进展被引量：16
- 2006年
- 壳聚糖是一种天然的生物可降解性,生物相容性好而且安全无毒的多糖,因而它成为基因治疗载体研究的热点。本文就近年来壳聚糖及其衍生物作为基因载体转染的研究进展和现状作简要的综述,并对转染率的影响因素如壳聚糖的分子量、粒径、脱乙酰度等进行着重介绍。
- 黄进汪世龙孙晓宇李文哲姚思德
- 关键词：壳聚糖纳米粒非病毒载体转染率
- 高效的红细胞特异性表达系统的建立和优化被引量：1
- 2013年
- 目的探讨慢病毒载体中红细胞特异性基因调控元件的优化对小鼠红白血病(murine erythroleu-kemia,MEL)细胞向红系终端分化期间组织特异性表达重组蛋白的影响。方法改变红细胞特异性β-珠蛋白启动子编码长度、改变β-珠蛋白基因位点控制区DNaseⅠ高敏位点(hypersensitive site,HS)的组合、删除β-珠蛋白3'端增强子或β-珠蛋白内含子IVS2,由此构建一系列由不同缺失组合的基因调控元件控制目的基因(如人凝血因子Ⅸ)表达的慢病毒载体,包装成重组慢病毒,测定病毒滴度,并分别感染小鼠MEL细胞。用O6-苄基鸟嘌呤(O6-benzylguanine,BG)-卡莫司汀[1,3-bis(2-chloroethyl)-1-nitrosourea,BCNU]联合筛选以富集感染的阳性细胞,用酶联免疫吸附测定方法检测目的基因的表达,评估不同基因调控元件组合对重组慢病毒载体所携带的目的基因表达的影响。结果经限制性内切酶谱分析和序列测定,构建的慢病毒载体结构正确;三质粒系统瞬时转染人肾胚胎293T细胞包装的重组自灭活慢病毒可通过长时间高速离心有效浓缩;用50μmol/L BG-50μmol/L BCNU联合筛选可有效富集感染的阳性细胞;经环六亚甲基双乙酰胺(N,N'-hexamethyle-nebisacetamide,HMBA)诱导第8天的106个小鼠MEL细胞中表达的重组人凝血因子Ⅸ平均质量浓度达到正常水平的3.8%(191 ng/ml)。结论通过适当减少调控元件优化慢病毒载体不仅有助于提高携带的外源基因片段长度、增加载体制备的有效性、实现温和提高目的基因产物达到治疗水平需求量的目的,而且为开展以红细胞特异性表达载体介导的携带蛋白类药物的红细胞治疗以及非血液病基因治疗奠定临床前的研究基础。
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- 关键词：慢病毒载体基因调控
