傅玉才
- 作品数：136 被引量：409H指数：11
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学政治法律更多>>
- 新生鼠卵巢FOXO3a表达水平与卵母细胞凋亡的相关性初步研究被引量：15
- 2006年
- 目的:探讨新生大鼠卵巢中FOXO3a(forkhead box groupO)转录因子表达水平与卵母细胞凋亡的相关性。方法:取出生后2d、3d、8d、15d龄大鼠的卵巢,用免疫组化方法观察FOXO3a、caspase-3在卵巢组织中的定位及表达水平,且用TUNEL技术检测卵巢内卵母细胞的凋亡变化。结果:FOXO3a在新生大鼠部分卵母细胞巢内的卵母细胞核内高表达,而在卵泡发育启动后,FOXO3a则从卵母细胞的核内逐渐转移至胞浆。而在次级和成熟卵泡的卵母细胞内,FOXO3a仅出现在胞浆内。≤8d龄大鼠卵巢的部分卵母细胞核内或胞核、胞浆内可检测到caspase-3表达,2d、3d龄大鼠部分卵母细胞核内高表达。TUNEL染色与caspase-3结果相似,2d龄大鼠卵巢的卵母细胞阳性率最高。结论:生后2d大鼠卵巢的卵母细胞存在一个凋亡高峰期;在原始卵泡形成前,FOXO3a在部分卵母细胞核内高表达,并与卵母细胞的凋亡率呈一致性。
- 隋旭霞罗丽莉傅玉才郭宪国许铭炎许锦阶
- 关键词：卵母细胞凋亡FOXO3ATUNEL
- 淫羊藿甙腹腔注射对新生大鼠卵巢发育的影响被引量：10
- 2010年
- 目的应用淫羊藿甙对新生大鼠进行腹腔注射,了解其对卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响。方法用淫羊藿甙对出生后1～8d大鼠腹腔注射50mg/(kg·d),分别取出生后2、4、8d龄卵巢,用苏木素-伊红(hematoxylin-eoxin,HE)染色观察不同发育阶段卵泡比例,末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling,TUNEL)荧光染色检测卵巢内卵母细胞凋亡变化。结果在淫羊藿甙腹腔注射组的新生的鼠中,1、2d龄卵巢内未装配卵泡比例及4、8d龄卵巢内原始卵泡比例均高于对照组;各日龄组卵巢中卵母细胞TUNEL阳性率明显低于对照组。结论淫羊藿甙可能通过延缓卵母细胞巢破裂,抑制原始卵泡的发育启动,减少卵母细胞凋亡从而增加新生大鼠卵巢中卵母细胞的储备量。
- 黄菊傅玉才许锦阶罗丽莉
- 关键词：卵泡发育淫羊藿甙腹腔注射TUNEL
- 阴道毛滴虫RRas同源基因的克隆和序列分析被引量：2
- 2006年
- 目的克隆和分析阴道毛滴虫RRas同源基因,以探讨其在细胞内信号传导通路中的功能。方法从已构建的阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离得到一个与人类RRas同源的cDNA克隆,用PCR扩增该cDNA克隆TvRRas相对应的基因组DNA,并对cDNA克隆及其对应的基因组DNA进行测序。利用BLASTP,RPS-BLAST和ClustalW等工具进行序列分析。结果TvRRascDNA序列全长705对碱基,读码框含615对碱基,推测蛋白质序列具205个氨基酸。序列分析显示该基因的基因组DNA序列含有5′端ATG起始密码子和3′端的终止密码子,与cDNA序列完全一致,提示该基因无内含子;进一步分析表明该基因系RRas亚家族的同源基因,其氨基酸序列与人类和小鼠的RRas同源性最高(两者的一致性均为51%,相似性均为70%),同时拥有人类RRas基因高度保守的结合GTP的结构域和完全一致的效应结构域。进化树分析表明该基因与人类的RAS原癌蛋白基因分支及RRas分支聚类。结论获得了阴道毛滴虫RRas同源基因。
- 许铭炎傅玉才刘居理张仁利
- 关键词：阴道毛滴虫基因克隆
- PC12细胞应激损伤中能量限制的效应及SIRT3的表达被引量：3
- 2011年
- 目的 研究H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤中,能量限制（CR）及SIRT3参与的调控效应.方法 实验分4组：H2O2组,H2O2＋CR组,CR组和正常对照组 MTT法检测不同浓度H2O2作用下CR对细胞生存率的影响 TUNEL染色法检测过氧化氢作用后CR对细胞的凋亡的影响 免疫荧光检测PC12细胞中SIRT3的表达定位 RT-PCR及Western印迹检测SIRT3、Caspase-3的表达变化.结果 60μmol/L H2O2作用6 h后,H2O2组细胞生存率（74.01±2.21）%可维持在70%以上,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05） 120μmol/L H2O2作用下,H2O2组的细胞活力显著下降（38.22±3.34）%,后续研究选取60μmol/L H2O2浓度作为应激源 60μmol/L H2O2作用6 h后H2O2组细胞生存率（74.01±2.21）%与CR＋H2O2组（97.26±1.92）%间比较差异有统计学意义（P＜0.05）.TUNEL凋亡检测H2O2＋CR组凋亡率较H2O2组显著降低.免疫荧光双染色证实PC12细胞中SIRT3为一种线粒体蛋白.Western印迹显示与正常对照组（5256±144）比较,CR组中SIRT3表达升高（6857±157）,差异有统计学意义（P＜0.05）、H2O2组中表达降低（3786±160）,差异有统计学意义（P＜0.05）.与H2O2组（3786±160）比较,CR＋H2O2组中SIRT3表达上升（5056±121）,差异有统计学意义（P＜0.05）.与正常对照组比较（5342±420）,H2O2组中Caspase-3表达升高（8499±426）,差异有统计学意义（P＜0.001）.CR＋H2O2组（5750±438）中Caspase-3表达较H2O2组表达下降（8499±426）,差异有统计学意义（P＜0.001）.RT-PCR显示与正常对照组（6204±134）比较,CR组（7214±148）中SIRT3表达升高,差异有统计学意义（P＜0.05）、H2O2组中表达降低（4807±143）,差异有统计学意义（P＜0.05）.与H2O2组（4807±143）比较,CR＋H2O2组中SIRT3表达上升（6195±166）,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 PC12细胞中,CR具有抗氧化应激损伤及凋亡的效应 CR可上调PC12细胞中SIRT3的表达,在H2O2诱导的PC12应激损伤�
- 李天题李朝晖庄绪莹傅玉才
- 关键词：氧化性应激PC12细胞过氧化氢热量限制
- 干扰SelK对小鼠巨噬细胞非特异性免疫应答的影响被引量：2
- 2015年
- 目的探讨硒蛋白K(Selenoprotein K,SelK)基因沉默(RNA silence,RNAi)对小鼠巨噬细胞增殖、吞噬和迁移的影响。方法制作并包装小鼠巨噬细胞SelK慢病毒干扰株,将细胞分为未转染正常对照组、空载体慢病毒转染组和慢病毒干扰组。建立稳定干扰的巨噬细胞株后,应用实时定量RT-PCR法和蛋白质免疫印迹法检测SelK的干扰效率,分别应用CCK8法、巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验和Transwell法检测细胞增殖、细胞吞噬能力和细胞迁移能力。结果与空载体慢病毒转染组相比,SelK慢病毒干扰组巨噬细胞的mRNA和SelK水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);48 h后,与空载体慢病毒转染组相比,慢病毒干扰组巨噬细胞的增殖受到了明显的抑制,差异有统计学意义(P<0.01),同时慢病毒干扰组巨噬细胞穿过小室的细胞数显著低于空载体慢病毒转染组(P<0.05),慢病毒干扰组巨噬细胞能吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量显著较少。结论 Selk基因沉默能使小鼠巨噬细胞的增殖、吞噬和迁移能力降低,从而改变其抗感染免疫能力。
- 黄飞雁满云翔傅玉才张仁利
- 关键词：巨噬细胞增殖迁移
- 阴道毛滴虫LAG1基因启动子区克隆及分析
- 2007年
- 本研究旨在克隆并分析阴道毛滴虫LAG1基因启动子,为进一步研究在细胞衰老过程中LAG1基因的转录调控提供实验资料。预测启动子所在区域,用PCR技术扩增启动子区序列,并分别克隆入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic及增强型绿色荧光蛋白报告基因载体pEGFP-1,用脂质体介导的方法瞬时转染EC109细胞,然后测定荧光素酶表达活性及观察绿色荧光蛋白的表达情况。结果表明在构建的6种荧光素酶报告基因表达体系及2种增强型绿色荧光蛋白报告基因表达体系中,表达载体pGL3-455(-455^+55bp)、pGL3-417(-417^+55bp)、pGL3-280(-280^+55bp)、pGL3-202(-202^+55bp)、pGL3-81(-81^+55bp)的荧光素酶表达活性相近,均明显高于表达载体pGL3-47(-47^+55bp)荧光素酶表达活性,而pGL3-47表达载体荧光素酶表达活性极低,与阴性对照活性相近,提示-47^+55bp区无启动子活性。绿色荧光蛋白的表达情况也类似,pEGFP-81(-81^+55bp)有明显的绿色荧光蛋白表达,而pEGFP-47(-47^+55bp)和空载体pEGFP-1未见表达。因此-81^-47bp区域含有阴道毛滴虫LAG1基因转录所必需的基本启动子序列。
- 刘居理许铭炎许锦阶傅玉才
- 关键词：阴道毛滴虫启动子细胞转染
- LASS1基因克隆及其在大鼠脑皮层的表达与神经元衰老的相关性初步研究(英文)被引量：7
- 2006年
- 长寿保障基因 LAG1 是从酵母中克隆的与酵母寿命相关的基因,随酵母生命衰老而表达发生变化. 对大鼠中同源基因LASS1 进行克隆、测序和序列分析,发现其 mRNA 序列不同于 GenBank 中的预测序列,开放阅读框包含 1 053 碱基对,编码蛋白由 350 个氨基酸组成,内含 Lag1 蛋白家族保守的 Lag1p motif 和 TLC 结构域. 从新生、1 月龄、6 月龄、12 月龄和 24月龄大鼠脑顶叶皮质提取总 RNA,用半定量 RT-PCR 及 RNA 印迹方法对 LASS1 在大鼠脑皮质中的表达随年龄变化情况进行分析. 结果表明,出生后 LASS1 表达量随年龄增加而增高,至 6 月龄达高峰,然后随年龄增加而逐渐下降,至 24 月老龄鼠达最低. 衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)对鼠脑皮层染色发现,神经元阳性染色随年龄增长明显增加. 大鼠 LASS1 基因表达在正常衰老过程中发生变化,为进一步研究该基因的作用奠定了基础.
- 王宝恒傅玉才史桂芝许铭炎耿义群徐小虎许锦阶
- 关键词：基因表达
- 能量限制条件下SIRT1和SIRT2的表达变化被引量：3
- 2011年
- 目的研究不同程度的能量限制(CR)下,大鼠脑组织中SIRT1和SIRT2的表达变化。方法 60只大鼠随机分成四组:正常对照组、75%CR组(喂养食物为正常对照组的75%),55%CR组(喂养食物为正常对照组的55%)和高脂组,喂养8周。免疫组织化学检测大鼠脑组织中SIRT1和SIRT2的表达与定位。RT-PCR及Western-blot检测各实验组中SIRT1、SIRT2的表达。结果在大鼠脑组织中发现SIRT1可于细胞浆和细胞核中表达,且主要于细胞核中表达;SIRT2主要在细胞核中表达。能量限制下,与对照组相比SIRT1表达升高;高脂食物条件下,SIRT1表达相对于对照组增高,但是比CR组减少。75%CR与55%CR相比,后者中的SIRT1的表达增加更多。与对照组相比,55%CR增加SIRT1的表达差异有统计学意义(P<0.05),而75%CR和HFa增加SIRT1的表达差异无统计学意义。SIRT2在CR和HFa下表达无明显变化。结论 CR能增加SIRT1而不增加SIRT2的表达,重度CR比中等程度CR对SIRT1表达的影响更大。
- 庄绪莹李天题赵虎傅玉才李朝晖
- 关键词：SIRT1高脂
- 哺乳类沉默信息调节因子1激活剂可上调肝X受体α-趋化因子受体7泡沫细胞移出信号和抑制炎症信号通路
- 2014年
- 目的:研究哺乳类沉默信息调节因子(SIRT)1参与调控单核细胞(U937)源性泡沫细胞从动脉粥样硬化斑块移出信号通路及其机制。方法:在体外模拟限制泡沫细胞移出的条件下检测泡沫细胞中SIRT1、肝X受体(LXR)α、趋化因子受体(CCR)7和转录核因子(NF)-κb的蛋白表达。结果:在SIRT1激动剂SRT1720激活下,SIRT1、LXRα和CCR7的蛋白表达水平上调,而NF-κb表达下调。SIRT1抑制剂尼克酰胺可阻断SRT1720的调节作用。结论:SIRT1可能通过上调LXRα-CCR7信号和抑制NF-κb炎症信号通路正向调节泡沫细胞的移出作用。
- 刘琳琪王伟刘雷傅玉才李玉光
- 关键词：泡沫细胞肝X受体Α趋化因子受体7
- H_2O_2诱导的PC12应激损伤中CR及SIRT1参与的调节效应被引量：3
- 2010年
- 目的研究H2O2诱导的PC12细胞(又称肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)氧化应激损伤中,热量限制(caloric restriction,CR)参与的调控效应及SIRT1的表达变化。方法采用MTT法检测H2O2诱导的氧化应激损伤中CR对PC12细胞活力的影响;TUNEL染色法检测各实验组中PC12细胞的凋亡;免疫荧光检测PC12细胞中SIRT1的表达与定位;RT-PCR及Wester-blot检测各实验组中SIRT1、Caspase-3的表达。结果 60μmol/LH2O2作用6h后,H2O2组细胞活力可维持在70%以上,与正常对照组及CR组比较差异具有统计学意义;而120μmol/LH2O2作用下,H2O2组细胞活力显著下降。本实验选取60μmol/LH2O2浓度作为后续实验使用浓度。CR处理后PC12细胞的凋亡率较H2O2组显著降低。PC12细胞中SIRT1可于细胞浆和细胞核中表达,且主要于细胞浆中表达。H2O2作用6h后,与正常对照组相比SIRT1表达降低,Caspase-3表达上升;在CR+H2O2组中,与H2O2组比较,Caspase-3降低,SIRT1表达上升。结论 CR具有抗应激损伤及凋亡的效应,可上调PC12细胞中SIRT1的表达,在H2O2诱导的PC12细胞应激性损伤中CR-SIRT1的调控具有保护效应。
- 李天题庄绪莹赵虎傅玉才李朝晖
- 关键词：热量限制SIRT1PC12H2O2
