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鸭坦布苏病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立被引量：10: 2012年; 根据鸭坦布苏病毒(DTMUV)BYD-1株基因序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了快速检测DTMUV的实时荧光定量RT-PCR方法。特异性结果显示,DTMUV显示阳性,而3株非鸭坦布苏病毒均显示阴性,说明该方法具有高度特异性。其表达式为Ct=-3.32×lg Copy number+41.151,R2=0.998,R循环效率Eff%=100.072,DNA拷贝数在101～108范围内检测曲线有良好的线性关系,对质粒标准品最低检测限为1.0×101拷贝/μL,变异系数低于5%。利用该方法分别对攻毒感染具有典型鸭新型黄病毒病临床症状和病理变化的蛋鸭的脾脏和肝脏组织进行检测,阳性率均为100%,而用本实验室建立的普通RT-PCR方法检测的阳性检测率为85%(17/20)和75%(15/20)。建立的方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的特点,可用DTMUV早期感染的快速诊断和流行病学调查。; 李庆阳陈芳艳刘平谢永福冯金牛况少祥陈瑞爱唐秀英王林川; 关键词：TAQMAN探针

鸭疫里默氏杆菌巢式PCR检测方法的建立被引量：5: 2013年; 为建立一种更加准确、敏感的鸭疫里默氏杆菌检测方法,根据鸭疫里默氏杆菌16S rRNA基因序列设计2对巢式PCR引物,在完成最佳反应条件筛选、特异性、敏感性、重复性试验的基础上,建立巢式PCR检测方法。结果表明,建立的巢式PCR对1、2、10、X型鸭疫里默氏杆菌的16SrRNA都能扩增出特异性片段,而对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、沙门菌、鸭源金黄色葡萄球菌的基因组不能扩增出特异性片段,DNA最小检测量为0.392fg/μL,是常规PCR的1000倍。该巢式PCR方法具有快速、敏感、特异、通用的优点,可用于鸭疫里默氏杆菌感染的检测、分子流行病学调查和分离菌株的快速鉴定。; 谢永福陈芳艳冯金牛欧德庆刘平况绍祥徐庆云王林川; 关键词：鸭疫里默氏杆菌巢式PCR

珠三角地区猪圆环病毒2型的分离鉴定及序列分析被引量：2: 2011年; 为了解珠三角地区猪群中猪圆环病毒2型（PCV-2）的流行变异情况,从2008年-2010年珠三角地区疑似PMWS病死猪组织中分离获得PCV-2流行毒株,用间接免疫荧光方法进行检测和用PCR方法对这些毒株进行全基因扩增及测序分析。结果显示,在接毒细胞内观察到了特异性免疫荧光,8株PCV-2分离株与GenBank中的其他PCV-2基因组同源性在91.2%~99.8%之间,毒株间同源性在94.2%~99.8%之间。; 黎丁滔陈芳艳陈瑞爱晏勇邦冯金牛王林川; 关键词：猪圆环病毒2型

血清9型鸭疫里默氏杆菌在华南地区的分离鉴定被引量：1: 2010年; 本研究于2009年7月～2010年4月针对广东、广西、福建等养鸭密集地区进行鸭疫里默氏杆菌(RA)流行病学调查,并分离到5个RA分离株。经形态特征、生化特性和血清学鉴定表明,5个分离株与血清9型RA相似。对16S rRNA部分基因进行序列测定,并与GenBank中登录的菌株16S rRNA基因序列进行比对及系统进化分析显示:该5株分离株与报道的RA H-1785、H-2199、H-2565和P-2123的16S rRNA序列相似性较高,同源性达99.1%～99.7%,进一步证实这5个分离株为血清9型RA。; 冯金牛陈芳艳区德庆阮二垒杨丽云黎丁滔陈瑞爱唐秀英王林川; 关键词：鸭疫里默氏杆菌血清型系统进化分析

鹅细小病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立: 2010年; 阮二垒杨丽云陈芳艳陈瑞爱冯金牛黎丁滔王林川; 关键词：鹅细小病毒 PCR检测方法荧光定量败血性传染病细小病毒病小肠黏膜

鸭疫里氏杆菌的分离与16 S rRNA的鉴定被引量：8: 2010年; 从疑似患有鸭疫里氏杆菌病的病死鸭群中采取的肝脏、心脏、脑等病料中分离病原,进行生化鉴定,自6只病死鸭的12份病料中分离鉴定出6株鸭疫里氏杆菌。根据鸭疫里氏杆菌16 S rRNA基因的保守序列设计特异引物,对6株鸭疫里氏杆菌进行PCR扩增,均能扩增出680 bp的特异条带;从凝胶中回收DNA目的条带并测序,测序结果与GenBank中鸭疫里氏杆菌相应序列相似率达到99.99%。; 冯金牛阮二垒杨丽云黎丁滔陈瑞爱王林川; 关键词：鸭疫里氏杆菌生化鉴定 RRNA PCR

鸭出血性卵巢炎广东病例报道及其RT-PCR方法的建立被引量：8: 2011年; 本文对广东省内9个白鸭种蛋鸭场发生的鸭出血性卵巢炎症状、病变、流行情况进行了报道,并建立能从病死鸭肝脾组织直接进行特异性RT-PCR的快速检测方法。; 王林川李庆阳陈瑞爱陈芳艳刘平张秀冯金牛; 关键词：病原分离

鸭疫里默氏杆菌16 S rRNA PCR快速检测方法的建立被引量：4: 2010年; 根据GenBank中的鸭疫里默氏杆菌（RA）1-19型16 S rRNA基因序列,分别与大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、巴氏杆菌的16 S rRNA基因序列对比,设计特异性引物,建立了基于鸭疫里默氏杆菌16 SrRNA的PCR检测方法。结果表明,用该方法对鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、巴氏杆菌进行检测,只有鸭疫里默氏杆菌的DNA能扩增出680 bp的特异条带,其他细菌的DNA不能扩增出任何条带;测序结果与GenBank中鸭疫里默氏杆菌相应序列完全一致;同时分别将鸭疫里默氏杆菌基因组DNA和菌液10倍稀释进行PCR扩增,对鸭疫里默氏杆菌DNA的最小检出量为1.907×10^-5g/L,对鸭疫里默氏杆菌菌液的最小检出量为1.5×10^4CFU/mL。证实,建立的基于鸭疫里默氏杆菌16 S rRNA的PCR检测方法具有快速、灵敏、特异的优点,可用于鸭疫里默氏杆菌感染的检测、分子流行病学调查和分离菌株的快速鉴定。; 冯金牛陈芳艳阮二垒杨丽云黎丁滔陈瑞爱区德庆唐秀英王林川; 关键词：鸭疫里默氏杆菌 RRNA基因聚合酶链反应

鸭疫里默氏杆菌荧光定量PCR检测方法的建立被引量：7: 2011年; 根据鸭疫里默氏杆菌(RA)16SrRNA基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了检测RA的实时荧光定量PCR方法。特异性试验结果显示,2株RA均呈阳性,而3株非RA均呈阴性。试验结果表明,该方法具有良好的特异性,该方法的表达式Ct=-3.676×lg copies+45.17,相关系数r2=0.996,R循环效率Eff(%)=93.482,DNA拷贝数在100～108范围内检测曲线有良好的线性关系,对质粒标准品的最低检测限为1.0×101 copies/μL,重复性检测的变异系数低于5%,利用该方法分别对自然感染表现典型鸭疫里默氏杆菌病临床症状和病理变化的死亡雏鸭肝、心、脑组织等不同脏器进行细菌定量检测,阳性率均为100%,而用普通PCR检测阳性率分别只有72%(18/25)、84%(21/25)和92%(23/25)。证实本研究所建立的荧光定量PCR方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的特点,可用于RA感染的快速诊断、流行病学调查以及鸭产品的检疫。; 冯金牛陈芳艳晏永邦张秀黎丁滔区德庆唐秀英陈瑞爱王林川; 关键词：鸭疫里默氏杆菌荧光定量聚合酶链反应 TAQMAN探针

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冯金牛