凡振伟
- 作品数：4 被引量：18H指数：2
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 刚地弓形虫Peroziredozin基因的克隆表达与免疫原性分析
- 目的对刚地弓形虫Peroxiredoxin(TgPrx)基因进行克隆、表达和免疫原性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子，提取总RNA;设计合成引物并引入EcoRI和Xhol酶切位点，RT-PCR扩增编码TgPrx的基...
- 刘转转王海龙殷国荣马广源张建中凡振伟
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- 非肌层浸润性膀胱癌细胞系BIU-87导向肽的筛选
- 目的:利用噬菌体展示环七肽库体外减性筛选，获得能与人非肌层浸润性膀胱癌细胞系BIU-87特异性结合的小分子肽，并初步鉴定其与BIU-87细胞结合的特异性。
方法:以人非肌层浸润性膀胱癌细胞系BIU-87为靶细胞，人...
- 凡振伟
- 关键词：噬菌体展示肽库非肌层浸润性膀胱癌BIU-87细胞
- 文献传递
- 中国人膀胱癌BIU-87细胞导向肽的体外筛选与特异性鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的:体外差减筛选噬菌体展示环七肽库,获得与中国人膀胱癌BIU-87细胞系高度结合的小分子多肽并鉴定其结合特异性。方法:以中国人膀胱癌BIU-87细胞作为靶细胞,正常人膀胱上皮细胞为吸附细胞,对噬菌体展示环七肽库进行3轮体外差减筛选。ELISA法鉴定与BIU-87细胞呈强阳性结合的噬菌体克隆,对其编码的DNA进行序列测定和同源性分析。化学合成与BIU-87细胞强阳性结合的肽段并制备成FITC标记的荧光探针,流式细胞术、荧光显微镜下鉴定其与BIU-87细胞、正常人膀胱上皮细胞、人前列腺癌PC3M细胞、人肝癌SMMC-7721细胞以及人结肠癌HCT116细胞的特异结合能力。结果:经3轮差减筛选将噬菌体展示环七肽库富集了25倍,阳性率达76%。共获得10个强阳性克隆,DNA共有序列为SISSLTH、MARYMSA、TVRTSAD。BIU-87细胞与小分子荧光探针FITC-SISSLTH的结合率为(80.06±8.78)%,显著高于FITC-MARYMSA的(52.93±7.28)%、FITC-TVRTSAD的(38.04±7.47%)、FITC-EDRKETA的(1.91±1.37)%和FITC的(9.85±2.9)%(均P<0.01)。FITC-SISSLTH与BIU-87细胞的结合率显著高于与正常人膀胱上皮细胞、人前列腺癌PC3M细胞、人肝癌SMMC-7721细胞和结肠癌HCT116细胞的结合率[(80.06±8.78)%vs(13.89±1.97)%,(8.13±2.85)%,(27.00±2.87)%,(2.33±1.75)%;均P<0.01]。结论:噬菌体展示环七肽库经3轮体外差减筛选获得高效结合BIU-87细胞的导向肽SISSLTH,具有良好的结合特异性。
- 王玮杨晓峰凡振伟张帆徐磊
- 关键词：膀胱癌BIU-87细胞
- 刚地弓形虫peroxiredoxin基因的克隆表达与免疫原性分析被引量：16
- 2009年
- 目的对刚地弓形虫peroxiredoxin(TgPrx)基因进行克隆、表达和免疫原性分析。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取总RNA;设计合成引物并引入EcoRI和XhoI酶切位点,RT-PCR扩增编码TgPrx的基因片段克隆到原核质粒pET30a(+)中,经双酶切、PCR及测序鉴定阳性克隆;在大肠杆菌BL21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE进行鉴定,重组蛋白用Western blotting分析其免疫原性。结果从弓形虫RH株cDNA中扩增出591bp的TgPrx基因片段,并成功构建重组质粒pET30a(+)/TgPrx;SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌BL21/DE3中高效表达。重组蛋白的相对分子量约32kDa,Western blotting显示其能被兔抗弓形虫免疫血清识别。结论RH株刚地弓形虫peroxiredoxin可在原核表达系统中高效表达,该重组蛋白具有免疫原性,有望作为弓形虫疫苗的候选抗原。
- 刘转转王海龙殷国荣马广源张建中凡振伟
- 关键词：刚地弓形虫PEROXIREDOXIN克隆原核表达免疫原性
