为了分离与鉴定巨龙竹速生巨大相关基因,以巨龙竹当年所发新叶为材料,用植物叶RNA抽提试剂盒提取了总RNA;采用C reatorTMSM ARTIMcDNA L ibrary construction k it所提供的方法,合成及纯化cDNA,并将cDNA连接到质粒载体上,通过C aC l2法将重组质粒转化到DH 5a中,成功构建了巨龙竹cDNA文库。文库容量为1.04×105,PCR检测表明大多数插入片段均大于1 000 bp,表明构建的巨龙竹cDNA文库质量较高,为进一步进行EST测序和全长基因克隆打下了基础。
Tri Pure法和RNA提取试剂盒法是目前实验室动植物RNA提取的常用方法。本试验通过对两种不同的RNA提取试剂盒与Tri Pure法进行比较,发现Trans公司研发的型号为ER501-01的Trans Zol Up Plus RNA Kit试剂盒适合提取单头西花蓟马总RNA,所得到的RNA纯度和浓度都比较高。该研究结果为通过分子手段研究蓟马等小型昆虫提供理论基础。
基于樟叶越桔叶芽转录组测序数据,筛选获得ARP7基因cDNA片段,采用RACE-PCR技术克隆了樟叶越桔VdARP7基因cDNA序列,并应用半定量PCR技术分析了VdARP7基因在樟叶越桔不同组织中的表达特征。结果表明:克隆了VdARP7基因964 bp cDNA片段,包括3'UTR完整区域和Poly A尾巴特征,VdARP7属于Actin超级家族ARPs亚家族基因新成员,与多种高等植物已知ARP7基因具有较高的同源性,推导编码VdARP7蛋白的C-末端225个氨基酸残基序列,含1个NBD_sugar-kinase_HSP70_actin保守结构域。VdARP7基因能在樟叶越桔叶芽、嫩叶、老叶、花芽和花等组织中稳定表达,推测ARP7作为组成型表达的蛋白质在植物生长和发育等过程中发挥重要生理功能。
