刘建东
- 作品数：28 被引量：79H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 牛分枝杆菌三价组合及融合DNA疫苗免疫效果的研究被引量：3
- 2008年
- 分泌性蛋白Ag85B、MPB64和ESAT-6为Mycobacterium bovis的主要保护性抗原,在诱导机体免疫反应和抵抗感染中发挥重要作用。本研究以pcDNA3.1(+)为载体,构建了由上述3种抗原基因构成的不同疫苗:3基因融合(pcDNA-MPB64-Ag85B-ESAT-6,pCMAE)DNA疫苗和三价(pcDNA-Ag85B+pcDNA-MPB64+pcDNA-ESAT-6)DNA疫苗,评价各种DNA疫苗诱导的体液免疫、细胞免疫及以BCG攻毒后的免疫保护水平。试验结果表明,多基因融合DNA疫苗免疫后的小鼠血清抗体水平、淋巴细胞增殖(SI值)、gamma interferon(IFN-γ)和interleukin-2(IL-2)水平明显高于其他各组(P<0.05),攻毒保护效果也优于多价DNA疫苗,达到了BCG疫苗的免疫保护水平,表明本研究制备的融合DNA疫苗具有良好的应用前景。
- 宫强刘思国王春来王勇刘建东刘慧芳施远祥阿曼古丽李发斌孔宪刚
- 关键词：牛分枝杆菌多价DNA疫苗
- 牛分枝杆菌DNA疫苗免疫效果的研究
- 根据Gen Bank中发表的已知序列设计多对特异性引物,以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ菌株基因组DNA为模板扩增Ag85B、esat-6、hsp65、mpb64、mpb70和mpb83基因片断,并通过SOE-PCR技术扩增...
- 宫强刘思国郭设平王春来王勇刘建东迟磊赵昆孔宪刚
- 文献传递
- 猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型抑制消减杂交文库的构建和分析被引量：4
- 2007年
- 为了研究猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）不同血清型之间的差异表达基因,采用抑制消减杂交（SSH）法,以APP血清7型DNA作为测试方（Tester）、APP血清1型DNA作为驱动方（Driver）,进行2轮杂交和2轮选择PCR扩增,将PCR扩增产物连接pMD18-T载体,筛选阳性克隆后进行测序和序列比对.结果显示,15个阳性克隆中的13个为已知序列,其同源性为88%～100%,2个为未知序列,其结构和功能还需进一步研究.首次构建了APP7的抑制消减杂交文库,为APP感染和致病机制的研究奠定了基础.
- 王勇刘思国王春来宫强刘建东刘慧芳周媛媛常月红云孟克李广兴
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌抑制消减杂交DNA文库
- EIAV诱导的特异性T细胞免疫应答检测方法的建立
- 马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus，EIAV)是一种双链RNA病毒，属于反转录病毒科(Retroviridae)慢病毒亚科(Lentivirus)，是严重危害养马业的马传染性贫...
- 刘建东
- 关键词：传染性贫血病毒特异性T细胞免疫应答
- 文献传递
- 猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗在小鼠体内的免疫机制及其保护效力被引量：6
- 2007年
- 【目的】欲构建具有较好交叉免疫保护效果的多组分重组亚单位疫苗,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考。【方法】利用分子克隆和重组表达技术获得了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要毒力因子rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP。并设立以灭活苗(5×108cfu)为试验Ⅰ组,以重组蛋白rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP为试验Ⅱ组,以rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP为试验Ⅲ组,以PBS为空白对照组。分3次免疫BALB/c小鼠,每次间隔2周,第3次免疫后的第7天以APP1型(5×109cfu)和APP2型(5×1010cfu)进行攻毒保护试验。【结果】试验Ⅱ组的4种抗体水平(ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ和OMP)和脾淋巴细胞诱生IL-2水平显著高于其它3组(P<0.05),脾淋巴细胞增殖水平也一直高于其它3组(P>0.05)。且试验Ⅱ组对APP1型保护作用(9/10)明显高于试验I组(6/10)、试验Ⅲ组(5/10)和对照组(0/10),而对APP2型保护作用(无肺脏损伤)也明显优于其它3组(典型肺部损伤),显示出细胞免疫和体液免疫水平与免疫攻毒保护之间存在着正相关性。【结论】试验Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫,对不同血清型APP的攻击提供了很好的交叉保护作用。
- 邵美丽刘思国王春来王勇宫强尹训南郭设平刘建东佟恒敏
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗保护力淋巴细胞增殖
- 牛分枝杆菌分枝菌酸环丙烷合酶PCAA的表达与鉴定
- 目的:克隆表达牛分枝杆菌持续感染相关蛋白PCAA,并鉴定其免疫活性.方法:以牛分枝杆菌Vallee株基因组为模板,利用PCR方法扩增该菌株的环丙烷-分枝菌酸合酶pcaA基因,并克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,通...
- 刘建东刘思国王春来宫强王勇
- 关键词：牛分枝杆菌
- 文献传递
- 牛抗菌肽Bac7-Bac5融合基因在大肠杆菌中的过表达,纯化及抑菌活性被引量：14
- 2007年
- 牛抗菌肽Bac7和Bac5是一种线性阳离子小分子多肽,在机体天然免疫和获得性免疫中都发挥着重要作用。根据Gen bank中公布的牛抗菌肽bac7和bac5成熟肽基因序列,人工合成了融合基因Bac7-Bac5片段,克隆于原核表达载体pET32(a+)中构建了重组表达载体pET-B7-B5,将其转化于E.coli BL21(DE3)中实现了重组蛋白B7-B5(rB7-B5)的过表达,表达的rB7-B5以包涵体形式存在,rB7-B5表达量约占细菌总蛋白的36.6%,分子量大小为33kDa,与预测大小相符。以8mol/L尿素变性包含体后用Ni亲和层析柱纯化目的蛋白,经多步透析法复性的rB7-B5对猪胸膜肺炎放线杆菌和耐药性大肠杆菌具有很好的抑菌活性,为新型抗菌制剂的研制和开发奠定了基础。
- 赵昆刘思国王春来宫强迟磊刘建东王勇云孟克常月红刘慧芳周媛媛孙延鸣
- 关键词：融合基因抑菌活性
- 牛分枝杆菌新型DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫效果研究
- 利用PCR技术从牛分枝杆菌ValleeⅢ菌株中扩增出esat-6、mpb70和mpb83基因,通过重叠延伸剪接技术(SOE)合成mpb70-mpb83融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDN...
- 宫强刘思国郭设平王春来王勇刘建东赵昆迟磊孔宪刚
- 关键词：牛分枝杆菌DNA疫苗免疫应答
- 文献传递
- 牛分枝杆菌单基因及双价融合基因DNA疫苗免疫效果的研究被引量：2
- 2007年
- 利用PCR技术和SOE技术扩增牛分枝杆菌ag85b、esat-6、hsp65、mpb64基因和ag85b-esat-6、hsp65-esat-6和mpb64-esat-6融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCA、pCE6、pCH、pCM、pCAE、pCHE和pCME。转染SP2/0细胞,检测目的基因的表达。以各重组质粒和pCDNA3.1(+)及PBS免疫BALB/c小鼠后检测血清特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖情况和IFN～γ分泌情况。结果表明,7种重组质粒免疫后小鼠血清抗体水平持续上升,与pCDNA3.1(+)对照组和PBS对照组相比差异显著(P<0.05),其中pCA组血清抗体水平明显高于其他6种DNA疫苗免疫组(P<0.05);三免两周后,融合基因免疫组的刺激值(SI值)与单基因免疫组相比差异显著(P<0.05),其中以pCME组的SI值最高;PPD刺激后融合基因DNA疫苗免疫组小鼠脾细胞分泌的IFN～γ高于单基因DNA疫苗组(P<0.05),而两对照组则未检测到IFN～γ的产生。成功构建了牛分枝杆菌ag85b、esat-6、hsp65、mpb64单基因和ag85b-esat-6、hsp65-esat-6、mpb64-esat-6双价融合基因DNA疫苗,从而为牛结核病新型疫苗的研制奠定了基础。
- 宫强刘思国王春来王勇刘建东迟磊赵昆周媛媛常月红云孟克孔宪刚
- 关键词：牛分枝杆菌单基因融合基因DNA疫苗
- 重组ApxⅡA对胸膜肺炎放线杆菌灭活疫苗免疫效果的影响被引量：9
- 2006年
- 将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的结构基因ApxⅡA克隆到原核表达载体 pGEX-6P-1,并在大肠埃希氏菌中进行了表达,表达产物rApxⅡA以包涵体形式存在。为了检测 rApxⅡA的免疫原性,分别用rApxⅡA、灭活疫苗以及灭活疫苗添加rApxⅡA对比利时白兔进行了免疫。免疫后进行攻毒,所用菌株分别为同型菌株(APP7型L25-4株)和异型菌株(APP1型 4074株)。结果,免疫动物对相同血清型菌株的攻击获得完全保护,且对异型菌的攻击也获得一定保护作用。表明,rApxⅡA蛋白具有良好的免疫原性,作为抗原成分添加到灭活疫苗中后可提高灭活疫苗的免疫效果。
- 王春来刘思国邵美丽王勇宫强郭设平刘建东赵昆迟磊
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌灭活疫苗免疫效果
