刘继梅
- 作品数：21 被引量：233H指数：9
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- 云南野生稻中Xa21基因外显子Ⅱ的分离及序列分析被引量：11
- 2005年
- Xa21是已经分离克隆的一个具有广谱抗性的水稻白叶枯病抗性基因,根据已克隆的白叶枯病抗性基因Xa21外显子Ⅱ序列设计特异性引物对云南3种野生稻及其他稻种进行PCR扩增。结果表明,只有普通野生稻(景洪普通野生稻和元江普通野生稻)及长雄野生稻中扩增到了长400bp的目的片段,而疣粒野生稻和药用野生稻及栽培稻中均没有扩增到目的片段。通过序列比较发现所克隆的序列同长雄野生稻的氨基酸序列变化是随机的。
- 钱君程在全杨明挚刘继梅吴成军黄兴奇
- 关键词：野生稻DNA序列
- 水稻抗病基因同源序列的克隆及测序分析被引量：34
- 2001年
- 根据已知的 NBS- L RR类及丝 /苏氨酸蛋白激酶类抗病基因结构中氨基酸的保守区域 ,设计了两组简并引物用于扩增广谱抗稻瘟病品种云系 2号中的抗病基因同源序列。结果一共获得 11类的 NBS- L RR类抗病基因同源片段及 16类的丝 /苏氨酸蛋白激酶类抗病基因同源片段。所有 11类的抗病基因同源系列均含有 NBS- L RR类抗病基因的保守序列 ,如 P-loop、Kinase 2、Kinase 3a以及跨膜区域等。所有 16类的蛋白激酶的序列均含有丝 /苏氨酸蛋白激酶所共有的催化区 (共有氨基酸序列 :DL KPEN)、 (共有氨基酸序列 :GT/ SXXYXAPE)以及蛋白激酶的其他催化区。两条 NBS- L RR类的抗病基因同源片段 YR1、YR12分别与抗病基因 I2 C- 2及 Xa1氨基酸同源性很高 (>5 0 % )。7条丝 /苏氨酸蛋白激酶类的抗病基因同源片段与已克隆的 Xa2 1、Pto、L r10等抗病基因的氨基酸序列超过 6 0 %的相同以及 76 %～
- 杨勤忠杨佩文王群刘继梅鄢波李家瑞黄兴奇
- 关键词：稻瘟病抗病基因同源序列基因克隆
- 云南3种野生稻中抗病基因同源序列的克隆及序列分析被引量：47
- 2003年
- 根据已报道的NBS LRR类和STK类抗病基因结构中的氨基酸保守区域 ,设计简并引物 ,通过PCR扩增及克隆 ,从普通野生稻 (OryzarufipogonGriff.)、药用野生稻 (OryzaofficinalisWall.)、疣粒野生稻 (Oryzameye rianaBaill.)中共获得 14类NBS LRR类抗病基因同源序列 ,其中普通野生稻中的有 7类 ,药用野生稻中的有 2类 ,疣粒野生稻中的有 6类。药用野生稻中TO12代表序列与普通野生稻中TR19代表序列 ,同属一类 ,且具有 10 0 %的同源性 ,说明不同种野生稻中的同一类 (聚类 )抗病基因同源序列是完全一致的。同时 ,还获得 5类STK类抗病基因同源序列 ,其中普通野生稻中的有 4类 ;药用野生稻中的有 1类。通过氨基酸同源性比较分析 ,发现笔者克隆到的抗病基因同源序列与已克隆的抗病基因L6、N、Bs2、Prf、Pto、Lr10和Xa2 1等的氨基酸同源性都相当低 (均低于 2 5 % ) ,暗示了这些抗病基因同源序列可能是目前尚未报道的抗病基因的同源序列。
- 刘继梅程在全杨明挚吴成军王玲仙孙一丁黄兴奇
- 关键词：野生稻抗病基因
- 南瓜甘油-3-磷酸转酰酶基因cDNA的克隆及限制性图谱分析被引量：3
- 1998年
- 依据国外有关文献，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术成功地从南瓜子叶中分离了甘油－３－磷酸酰基转移酶（ＧＰＡＴ）基因的ｃＤＮＡ片段并克隆到了ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统的多克隆位点上．限制性内切酶分析表明确属该基因．ＧＰＡＴ对植物的抗冷性有着重要的作用。
- 杨明挚陈善娜鄢波黄兴奇刘继梅谭德勇
- 关键词：克隆南瓜CDNA
- 半套式PCR技术在植物基因克隆中的应用被引量：1
- 1998年
- 常规ＰＣＲ方法在分离克隆已知序列的基因中发挥着重要的作用，但要求目的基因片段与引物间的同源性几乎是１００％，一旦引物序列与目的基因间存在有差异，便往往会导致扩增的特异性不强，扩增效率不高，给克隆带来很大的困难．在常规ＰＣＲ基础上，若所分离的基因在不同植物间存在保守序列，依据这一序列再合成一对引物，进行半套式ＰＣＲ则能大大提高扩增的特异性及扩增效率．对于较长的基因片段而言还能同时完成亚克隆．本文依据南瓜ＧＰＡＴ（甘油－３－磷酸酰基转移酶）基因ｃＤＮＡ序列及比较拟南芥菜。
- 杨明挚陈善娜鄢波鄢波黄兴奇
- 关键词：基因克隆植物
- 抗寒剂和高油菜素内酯对高原水稻抗冷性的影响被引量：39
- 1997年
- 抗寒剂ＣＲ－４，高油菜素内酯ＢＲ－１２０分别浸种和喷洒在水稻二叶期叶面上，经低温（２±１℃）暗胁迫２ｄ，根干重、根长和茎叶干重，叶片的超氧物歧化酶（ＳＯＤ），过氧化物酶（ＰＯＸ）活性和还原性谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量皆高于对照。抗性强的丽粳低温胁迫时清除活性氧的效果较好。回温恢复（２５±１℃，３０００ｌｘ、１２ｈ／ｄ）１～５ｄ、抗性不同的两个品种的ＳＯＤ和ＰＯＸ活性、ＧＳＨ和抗坏血酸（ＡＳＡ）含量继续增加，丙二醛（ＭＤＡ）含量都有下降。但抗性弱的秀子糯回温恢复时，清除活性氧的效果较好，ＰＯＸ活性和ＧＳＨ含量增加较为显著。ＣＲ－４或ＢＲ－１２０处理在一定程度上提高了水稻幼苗活性氧清除系统的能力，增强了抗冷性。
- 陈善娜刘继梅游慧灵朱红俊秦志宝洪国民沈云光
- 关键词：抗寒剂水稻抗冷性
- 水稻中编码甘油-3-磷酸转酰酶部分cDNA的克隆及序列分析被引量：4
- 1998年
- 参照国外报道的几种双子叶植物的甘油－３－磷酸转酰酶的相对保守的氨基酸序列，设计并合成一对简并引物，提取抗冷性强的水稻品种“丽梗２号”的ＲＮＡ，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，扩增出了３１５ｂｐ的一段ｃＤＮＡ片段。扩增产物经纯化后直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统中，经ＰＣＲ法鉴定，所得的重组质粒中含有３１５ｂｐ的片段。证明已克隆到水稻甘油－３－磷酸转酰酶部分ｃＤＮＡ。采用双链双脱氧法定序分析，表明所克隆的该段ｃＤＮＡ序列与国外所报道的双子叶植物的该段ｃＤＮＡ的核苷酸序列及氨基酸序列的同源性均达到７０％以上，提示了该基因在进化上具有一定的保守性。
- 刘继梅陈善娜鄢波黄兴奇杨明挚
- 关键词：PCR基因克隆水稻CDNA克隆
- 甘油-3磷酸转酰酶氨基酸与植物抗冷性关系初探被引量：9
- 2000年
- 甘油 - 3磷酸转酰酶 (GPAT)与植物抗冷性密切相关。南瓜 (Cucurbitamoschata)与黑子南瓜 (Cucurbitaficifolia)同属不同种 ,亲缘关系较近 ,但却存在显著的抗冷性差异。南瓜及黑子南瓜GPAT基因的克隆 ,可以使我们从二者推导的有限氨基酸的差异中对GPAT氨基酸组成及其与植物抗冷性作一定的探讨。发现在南瓜与黑子南瓜 13个不同的氨基酸残基中有 3个与抗冷性植物拟南芥菜 (Arabidopsisthaliana)、豌豆 (Pisumsativum)、红花 (Carthamustincto rius)和菠菜 (Spinaciaoleracea)等相同 ,可能与黑子南瓜比南瓜更具抗冷性的原因有关。比较南瓜、黑子南瓜、豌豆、红花、拟南芥菜和菠菜等植物中GPAT基因推导的氨基酸序列发现 ,在比较抗冷的拟南芥菜、红花、豌豆和菠菜等植物中 ,虽然它们之间的亲缘关系都比较远 ,但某些位点上的氨基酸残基却完全相同 ,而与南瓜等抗冷性较差的植物不同 ,这些位点的氨基酸残基可能也与GPAT对底物酰基的选择性有关。
- 杨明挚陈善娜鄢波黄兴奇刘继梅
- 关键词：氨基酸序列植物
- 农杆菌介导的二氢黄酮醇3’5’羟化酶cDNA对非洲菊的转化及对其花色的影响(英文)被引量：12
- 2003年
- 通过非洲菊(Gerbera hybrida)组织培养建立起适合于农杆菌介导的基因转化受体系统.非洲菊叶柄外植体在MS+3 mg/L BA+0.01 mg/L NAA培养基中直接诱导芽生长,在MS+0.1 mg/L NAA培养基中生根培养,获得再生植株,诱导率达57％.带有云南矮牵牛(Petunia hybrida)二氢黄酮醇3’5’羟 化酶cDNA的pEH表达载体与农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404融合后,与非洲菊叶柄外植体共培养3 d,通过含有卡那霉素25 mg/L和羧苄青霉素500 mg/L的选择培养,诱导出转基因非洲菊.经PCR和Southern分子杂交检测,证明目的基因已整合入非洲菊的基因组中,转基因非洲菊花色、花型及叶型都有显著变化.
- 郑丽屏刘继梅王玲仙黄兴奇钦佩
- 关键词：非洲菊转基因植物花色农杆菌介导
- 蚕豆及水稻甘油-3-磷酸转酰酶基因的cDNA克隆及序列分析
- 刘继梅
- 关键词：基因克隆聚合酶链式反应蚕豆水稻
