包海生
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 壳聚糖固定化金属离子亲和层析法对重组乙醛脱氢酶的纯化被引量：1
- 2012年
- 以壳聚糖为载体,甲醛为预交联剂,戊二醛为交联剂,用环氧氯丙烷法进行载体活化,乙二胺为螯合配基,制备了壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料。利用该填料对重组ALDH粗酶液进行了纯化,经分段盐析和亲和层析,纯化倍数达到9.23,回收率达到29%。结果表明,制备的壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料,能够用于带有组氨酸标签重组蛋白的快速分离与纯化。该方法对重组ALDH的纯化倍数和回收率均高于目前的其他分离纯化方法。
- 包海生高秀峰郑雪妮李永生
- 关键词：基因工程乙醛脱氢酶组氨酸标签纯化
- 壳聚糖锌离子固定化亲和层析填料的制备与性质被引量：1
- 2012年
- 目的:制备了壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料,并对其性能进行了研究。方法:采用反相悬浮法制备了交联壳聚糖;再以环氧氯丙烷为活化剂,乙二胺为螯合配基,制备了固定化亲和层析填料;表征了其有效粒径以及均匀系数、含水量、失重率、氨基含量、骨架密度、堆积密度以及孔度值。从时间、加入ZnCl2的浓度、温度、pH方面对Zn2+固定化条件进行了优选,并确定了Zn2+的固定化量。含组氨酸标签的乙醛脱氢酶粗酶液,经硫酸铵盐析后,考察了壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料的亲和性能。结果:制备的填料有效粒径为105μm;均匀系数为1.46;含水量为58.03%;失重率为85.43%;氨基含量为9.20mmol/g;骨架密度为1.217 8g/ml;堆积密度为0.843 2g/ml;孔度值为36.40%。固定化Zn2+的最佳条件是:时间3 h、加入ZnCl2溶液浓度0.1mol/L、温度28℃、pH 5.5;且此条件下,亲和层析填料中Zn2+固定化量为3.35mmol/g。壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料对乙醛脱氢酶的亲和性能为4.14IU/g(干重)。结论:制备了壳聚糖Zn2+固定化亲和层析填料,可用于带有组氨酸标签重组蛋白的快速分离与纯化。
- 包海生高秀峰郑雪妮李永生
- 关键词：壳聚糖乙醛脱氢酶
- 法尔凯干酵母乙醛脱氢酶的提取和纯化研究被引量：3
- 2010年
- 应用硫酸铵分级盐析、热沉淀及双水相萃取方法提取并纯化了法尔凯干酵母胞浆内的乙醛脱氢酶(ALDH)。结果表明,粗酶液经过硫酸铵分级盐析、热沉淀和2次双水相萃取后得到的ALDH酶液,比活性为0.14,纯化倍数为3.5,回收率为58%;酶的最适pH为7.5,最适反应温度为35～40℃,以乙醛为底物的Km值为6.9×10-3mol/L,K+离子为激活剂,Zn2+离子为抑制剂。
- 杨伟伟高秀峰包海生李永生
- 关键词：乙醛脱氢酶双水相纯化
