姚文荣
- 作品数：12 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 狂犬病毒核蛋白基因的克隆表达及其免疫原性被引量：4
- 2008年
- 目的构建狂犬病毒核蛋白(NP)基因的重组杆状病毒表达载体,在昆虫细胞中表达出具有免疫原性的抗原,用于狂犬病的检测及诊断。方法应用RT-PCR方法扩增ERA株狂犬病毒NP基因后克隆到PCR2.1TA载体,转化OneShortTMTOP10感受态细胞构建TA克隆载体,并与pFastBacTM1转座质粒载体分别用KpnΙ和NotΙ双酶切,用T4连接酶连接,构建pFast ERA-NP重组转座质粒,经双酶切、PCR扩增及插入序列方向鉴定后,转化到DH10BacTME.coli感受态细胞,经三抗培养基筛选和PCR扩增鉴定后获得重组Bacmid质粒,将重组Bacmid质粒转染Sf9昆虫细胞制备重组杆状病毒毒液,并继续扩增重组杆状病毒,以第三代毒液感染Sf9昆虫细胞,96h收获细胞,用直接免疫荧光(DFA)、SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行检测和分析。结果构建了含有ERA NP基因的重组杆状病毒,并在昆虫细胞中获得表达。结论本研究成功表达出了具有免疫原性的狂犬病毒核蛋白。
- 姚文荣徐兰李明慧张永振
- 关键词：狂犬病毒核蛋白基因杆状病毒表达系统
- 1980-2010年广州市狂犬病监测分析被引量：2
- 2011年
- 目的分析广州市1980-2010年30年间狂犬病的流行病学特征。方法收集狂犬病疫情资料及狂犬病病例个案调查表,用回顾性调查方法分析资料;采集疫区犬脑组织,用免疫荧光法和RT?PCR法检测狂犬病病毒抗原。结果 1980-2010年广州市共报告655例人间狂犬病,其中597例为1980-1989年报告的病例,占总病例数的91.15%,45例为2005-2010年报告的病例,占总病例数的6.87%,形成了2次流行高峰;45例患者中男性多于女性,10～55岁年龄组发病人数较多,学生、民工和农民居多。在疫区共捕捉86只犬,取脑组织,经免疫荧光和PCR检测,全部为阴性。结论广州市过去30年人间狂犬病有2次流行高峰;1990年以前犬免疫率低,人暴露后疫苗接种率低使人狂犬病发病率达到最高峰;2005年后,养犬数增多,人们预防狂犬病的意识放松,忽视伤口处理及暴露后免疫,导致狂犬病发病率回升;86只犬中未检测到狂犬病病毒,说明广州地区狂犬病病毒在家养犬中的流行强度较低。
- 潘志明覃新程姚文荣李明慧张永振
- 关键词：狂犬病
- 人绒毛外滋养层细胞HTR-8/SVneo中Toll样受体mRNA的表达及对吲哚胺2,3-双加氧酶mRNA水平的影响被引量：1
- 2013年
- 目的系统检测人绒毛外滋养细胞HTR-8/SVneo中Toll样受体(TLR)mRNA的表达情况,定量分析TLRs配体刺激前后吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)mRNA的表达差异。方法 RT-PCR检测HTR-8/SVneo细胞中TLR 1-10mRNA的表达情况;实时荧光定量RT-PCR检测TLR3、TLR4、TLR7/8、TLR9配体刺激前后IDO mRNA表达水平。结果 HTR-8/SVneo细胞中有IDO及TLR 1-10 mRNA表达;在48 h内IDO mRNA表达随着时间延长,呈升高趋势;IDO mRNA的表达与培养基营养状况相关;TLRs配体刺激后,除TLR-3转录水平表达下调外,TLR-4、7、8、9 mRNA表达均上调;poly(I∶C)刺激后IDO mRNA表达低于正常组,IFN-γ刺激后表达高于正常组(P<0.05)。结论 TLRs mRNA的表达提示该细胞具有抗感染作用;HTR-8/Svneo细胞中IDO mRNA的表达与母胎界面营养状况相关;TLRs配体刺激剂对TLRs及IDO mRNA表达的影响不仅验证了TLRs的功能活性,而且提示了IDO在抗病原体免疫应激中可依赖TLRs途径发挥作用。
- 许巍杨贵波端家忠王越姚文荣刘学庆陈雪梅丁裕斌王应雄何俊琳
- 关键词：TOLL样受体
- 浙江省一例狂犬病患者的核酸检测分析
- 目的 对浙江省一例临床诊断狂犬病患者进行狂犬病毒的抗原、抗体和核酸的检测,提供实验室诊断依据。并分析所携带的狂犬病毒的生物学特征,探讨其基因型以及与现用疫苗株的差异和关系,为有效地使用疫苗和控制狂犬病提供科学依据。
- 姚文荣张永振熊成龙
- 文献传递
- 中国恒河猴DNGR-1分子C型凝集素样结构域在大肠杆菌系统表达被引量：2
- 2014年
- 目的获得恒河猴C型凝集素结构域家族9的A成员(Clec9A)基因编码区序列;体外表达CLEC9A的C型凝集素样结构域(CTLD)。方法利用Clec9A基因特异引物,反转录PCR扩增中国恒河猴Clec9A基因编码区,亚克隆至pGEM-T载体,获得pGEM-T-DNGR质粒并进行测序。构建CLEC9A分子的CTLD区原核表达质粒pET-32a-CTLD,转化BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,并用SDS-PAGE和Western blot法对目的蛋白进行鉴定。结果 PCR扩增得到726 bp的Clec9A编码区全长,测序和序列比对发现恒河猴CLEC9A编码区的核苷酸序列与人和小鼠的同源性分别为95.0%和73.1%,推测的氨基酸同源性分别为91.7%和57.3%。体外表达获得相对分子质量(Mr)约32 000的CTLD融合蛋白,Western blot方法鉴定发现其与人DNGR-1分子具有相似的抗原性。结论中国恒河猴Clec9A基因与人的高度相似并能编码与人CTLD抗原性相似的蛋白。
- 姚文荣杨贵波
- 关键词：中国恒河猴树突状细胞
- 恒河猴XC趋化因子受体1(XCR1)基因的克隆和体外表达
- 2017年
- 目的了解恒河猴XC趋化因子受体1(XCR1)基因特征,并在HEK293T细胞上表达。方法采用反转录PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆恒河猴XCR1基因、并与GenBank中其他物种XCR1的cDNA序列进行比对。构建真核表达载体3.1-XCR1并转染HEK293T细胞,采用流式细胞术、Western blot法和激光扫描共聚焦显微镜技术检测XCR1蛋白的表达。结果恒河猴XCR1 cDNA序列全长1665 bp,包含415 bp的5'非翻译区(5'UTR)、1003 bp的编码区和248 bp的3'UTR;恒河猴XCR1编码区氨基酸序列与人XCR1的相似性为96.8%,而且具有相似的结构特征:含有七次跨膜结构,酸性N端以及保守的G蛋白锚定功能性基序HRYLSVV。与基因组序列比对和跨外显子反转录PCR结果表明,在恒河猴多种组织中只存在缺失第二外显子的剪接变异体。恒河猴XCR1可在HEK293T细胞中表达Mr40 000左右的分子、主要分布于细胞质和细胞膜上。结论除mRNA剪接异构体以外,恒河猴XCR1分子与人高度相似,并且能在HEK293T细胞中有效表达。
- 余磊李冬姚文荣王凤杰崔艳芳杨贵波
- 关键词：恒河猴剪接异构体真核表达
- 恒河猴淋巴趋化因子克隆与原核表达
- 研究背景：在免疫系统中,趋化因子是细胞间联系的重要分子,可分为四个家族CX3C、CXC、CC和C.XCL1,也被称为淋巴趋化因子,是C型趋化因子的唯一成员.相较于其他三类趋化因子,XCL1缺少第一和第三位的半胱氨酸,并且...
- 余磊姚文荣李冬杨贵波
- 北海道型汉坦病毒核蛋白基因的克隆表达及其免疫原性
- 2009年
- 目的构建北海道型汉坦病毒（HOKV）核蛋白（NP）基因的重组杆状病毒表达载体，在昆虫细胞中表达出具有免疫原性的抗原，用于HOKV的检测及诊断。方法应用RT-PCR方法扩增HOKVFusong-Cr-247株的NP基因，并将该基因片段克隆到PCR@2.1TA载体，转化到OneShort^TM TOP10感受态细胞构建TA克隆载体，并与pFastBac^TM1转座质粒载体分别用KpnI和NotI双酶切，用T4连接酶连接，构建pFast PUUV-S重组转座质粒，经双酶切、PCR扩增及插入序列方向鉴定后，转化到DH10Bac^TM E.coli感受态细胞，经三抗培养基筛选和PCR扩增鉴定后获得重组Bacmid质粒，将重组Bacmid质粒转染Sf9昆虫细胞制备重组杆状病毒毒液，并继续扩增重组杆状病毒，以第三代毒液感染Sf9昆虫细胞，96h后收获细胞，用间接免疫荧光（IFA）、SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定和分析。结果实验应用Bac-to-Bac^TM杆状病毒表达系统，成功构建了含普马拉类汉坦病毒核蛋白基因的重组杆状病毒表达载体，并在昆虫细胞中获得表达。IFA结果显示，感染细胞的胞浆中有亮绿色荧光颗粒，SDS-PAGE和Western blot检测细胞表达产物的50×10^3（M）的蛋白条带，证实重组病毒感染昆虫细胞后表达了相应的重组核蛋白，与预计的结果相符。并能与抗汉坦病毒抗体结合。结论成功表达具有HOKV免疫原性及反应性的重组核蛋白，为研制HOKV的诊断试剂奠定了基础。
- 姚文荣邹洋李明慧张永振
- 关键词：汉坦病毒核蛋白杆状病毒表达系统
- C型凝集素9家族A成员的研究进展
- 2016年
- C型凝集素9家族A成员(CLEC9A),又称为树突状细胞-NK细胞凝集素群受体1(DNGR-1),属于非经典的2型跨膜C型凝集素样受体,其表达具有高度的树突状细胞(DC)限制性。小鼠CLEC9A主要表达在CD8α^+DC和CD103^+DC表面,人CLEC9A主要表达在血液树突状细胞抗原3阳性DC(BDCA3^+DC)表面。在表型和功能方面,人的同时表达CLEC9A和BDCA3(CLEC9A^+BDCA3^+)的DC与小鼠的CD8α^+DC具有相似性。CLEC9A能够与坏死或受损细胞的纤维状肌动蛋白结合,经细胞质区的免疫受体酪氨酸活化基序结构启动细胞内信号的转导。CLEC9A能介导内吞作用,参与交叉提呈抗原等作用,在抗病毒感染、肿瘤预防与治疗和疫苗的研究中具有潜在的应用前景。本文阐述了CLEC9A分子的研究进展。
- 姚文荣杨贵波
- 关键词：树突状细胞内吞作用纤维状肌动蛋白
- 狂犬病毒核蛋白在昆虫细胞中的表达及免疫原性的研究被引量：2
- 2009年
- 目的在昆虫细胞中表达出狂犬病毒核蛋白(NP),并探讨重组NP的免疫原性.方法采用杆状病毒表达系统在Sf9昆虫细胞中表达狂犬病毒核蛋白,用直接免疫荧光(DFA)、SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行检测和分析,以感染重组杆状病毒的昆虫细胞裂解液免疫小鼠,检测表达产物的免疫原性.结果重组杆状病毒在昆虫细胞中获得表达,免疫小鼠可产生抗核蛋白抗体.结论在Sf9昆虫细胞中表达出狂犬病毒核蛋白,重组产物具有生物活性.
- 于翔翔谭有将姚文荣张永振
- 关键词：杆状病毒表达系统免疫原性
