姜梨华
- 作品数：18 被引量：32H指数：3
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划浙江省重中之重学科开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体的构建
- 人体各种类型的恶性肿瘤几乎都可以检测到高水平的端粒酶活性,因此端粒酶已成为肿瘤治疗的新靶点。本文通过构建hTERT启动子控制的特异性针对端粒酶阳性肿瘤的增殖缺陷型腺病毒载体,比较分析了该载体携带绿色荧光蛋白报告基因(EG...
- 苏长青王星华崔贞福吴红平李林芳姜梨华钱炎珍吴孟超钱其军
- 文献传递
- 肿瘤端粒酶靶向腺病毒载体的表达活性被引量：4
- 2004年
- 目的 构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体 ,研究其介导目的基因在肿瘤细胞内的定向表达能力。方法 将端粒酶逆转录酶 (hTERT )启动子克隆入质粒 pDC3 12的多克隆位点构成外源基因表达盒 ,在基因表达盒上下游分别插入 1个绝缘子序列 ,构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体pSG TPE ;采用Luciferase报告基因进行hTERT启动子的活性分析 ;以pSG TPE携带绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因 ,重组腺病毒AdTPE EGFP ,观察其介导EGFP在肿瘤细胞内的定向表达能力 ,并与CMV启动子控制的腺病毒AdCMV EGFP作对照。结果 hTERT启动子在正常细胞内几乎没有活性 ,而在肿瘤细胞内的活性与SV 40启动子相近。腺病毒AdTPE EGFP能介导EGFP在肿瘤细胞内定向而稳定表达 ,在正常细胞内不表达 ,而对照腺病毒AdCMV EGFP在肿瘤和正常细胞内均表达EGFP。结论 靶向端粒酶阳性肿瘤的腺病毒载体 pSG TPE ,不但提高了对基因表达调控的特异性 ,而且降低了对正常细胞毒性作用。绝缘子的应用隔断了外源基因表达盒和病毒基因表达调控序列之间的互相干扰 ,进一步提高目的基因的表达效率。该载体对肿瘤的靶向基因治疗具有重要的应用价值。
- 苏长青王星华崔贞福吴红平李林芳姜梨华钱炎珍吴孟超钱其军
- 关键词：基因治疗腺病毒端粒酶启动子
- 携带全长抗CD20抗体的嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20载体构建与表达研究被引量：1
- 2009年
- 构建Ad5F11b-Anti-CD20嵌合型腺病毒载体并探索该腺病毒在体外表达全长抗体的能力。合成部核糖体进入位点(IRES)序列,将其与美罗华抗体重轻链连接,克隆到pDC338质粒载体上,并与以11b型腺病毒(Ad11b)Fiber替代5型腺病毒(Ad5)Fiber的嵌合型腺病毒骨架质粒pAd5F11b进行重组,获得Ad5F11b-Anti-CD20嵌合型腺病毒。将鉴定正确的病毒空斑感染293细胞,ELISA检测其表达水平以及间接免疫荧光检测该病毒表达抗体的特异性。结果表明,嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20在293细胞中的表达量高达3.78μg/ml±0.30μg/ml,间接免疫荧光(IFA)显示该病毒表达的抗体只与CD20+的Raji细胞有特异性结合,而与CD20-的Molt-4细胞无结合能力。成功构建了高效表达抗CD20抗体的嵌合型腺病毒Ad5F11b-Anti-CD20。
- 杨秋梅吴红平周秀梅李林芳王春红姜梨华钱其军
- 关键词：抗CD20抗体IRES
- 人肝癌细胞系EH-H1的建立及其相关生物学特性被引量：3
- 2009年
- 目的:采用原代培养的方法建立一株人肝癌细胞系EH-H1,并对其生物学特性进行分析。方法:将取自东方肝胆外科医院诊断为原发性肝细胞癌的组织标本分离成单细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液进行原代和传代培养,在普通显微镜以及电子显微镜下观察细胞的形态,并绘制细胞的生长曲线。用放射免疫法检测细胞系AFP和HBV的含量,采用染色体G显带方法进行细胞染色体核型的分析,裸鼠皮下接种细胞检测该细胞的成瘤能力。结果:成功建立一株新的人肝癌细胞系,命名为EH-H1。EH-H1细胞体外连续传代80代以上,细胞形态不变,生长周期恒定在24 h。放射免疫检测EH-H1各代细胞HBV均为阴性,AFP分泌微量(0.6μg/L)。染色体G带显示,EH-H1细胞染色体为非整倍体,以超2倍体为主。该细胞经皮下接种可使裸鼠致瘤(10/10),移植瘤病理组织学类型和分化程度与肝细胞癌一致。结论:通过原代培养建立的肝癌细胞系EH-H1与原发癌保持相似的生物学特性,可望成为一个稳定的细胞系。
- 钱炎珍黎江李林芳刘辉刘韬姜梨华施乐华苏长青吴孟超钱其军
- 关键词：肝癌细胞系原代培养生物学特性
- 化疗对CD133＋结肠癌细胞的作用效果被引量：4
- 2011年
- 目的观察化疗前后结肠癌细胞株HT29、SW620中CD133^＋结肠癌细胞的数量变化，探讨化疗对CD133^＋结肠癌细胞的作用效果。方法取对数生长的结肠癌细胞株HT29、SW620，采用80mg／L5-氟尿嘧啶（5．Fu）和25mg／L奥沙利铂（Oxaliplatin）分别作用8h，并设对照组，利用CD133抗体进行标记后再用流式细胞仪进行检测，观察化疗前后CD133^＋细胞的比例。结果流式细胞仪检测结肠癌细胞株HT29，80mg／L5-Fu处理8h组中CD133^＋肿瘤细胞为45．00％，与未处理组（32．80％）比较结果差异有统计学意义（P〈0．01）；25mg／L奥沙利铂处理8h组中CD133^＋肿瘤细胞为55．30％，与未处理组和80mg／L5-Fu处理8h组比较结果差异有统计学意义（P〈0．01）。流式细胞仪检测结肠癌细胞株SW620，80mg／L5-Fu处理8h组中CD133^＋肿瘤细胞为47．10％，与未处理组（33．90％）比较结果差异有统计学意义（P〈0．01）；25mg／L奥沙利铂处理8h组中CD133。肿瘤细胞为56．50％，与未处理组和80mg／L5-Fu处理8h组比较结果差异有统计学意义（P〈0．01）。结论CD133^＋结肠癌细胞能明显抵抗化疗。
- 周育宏方国恩薛绪潮钱其军姜梨华
- 关键词：结肠癌细胞化疗CD133
- 特定条件下化疗诱导结肠癌细胞凋亡的研究被引量：2
- 2008年
- 目的:研究结肠癌化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂(OXA)分别诱导结肠癌细胞株HT-29细胞凋亡的作用。方法:用80μg/ml5-FU和25μg/mlOXA分别作用HT-29细胞8h,并应用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术对细胞凋亡进行检测,观察凋亡细胞的比例。结果:80μg/ml5-FU处理8h组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约9.2%(P<0.01);25μg/mlOXA处理8h组与空白对照组比较,凋亡细胞比例上升约21.1%(P<0.01)。25μg/mlOXA处理8h组与80μg/ml5-FU处理8h组比较,凋亡细胞比例约高于11.9%(P<0.01)。结论:在特定条件下,5-FU和OXA均能明显诱导结肠癌细胞株HT-29细胞凋亡;OXA对结肠癌细胞的诱导凋亡作用要强于5-FU。
- 李小秋周育宏姜梨华李蓉
- 关键词：结肠癌氟尿嘧啶奥沙利铂细胞凋亡流式细胞术
- 携带hIFN-γ的增殖型腺病毒治疗胃癌的体外实验研究
- 2008年
- 目的:研究增殖型腺病毒CNHK300-hIFN-γ在胃癌细胞中的增殖、杀伤能力与表达hIFN-γ蛋白的能力。方法:病毒增殖实验比较CNHK300-hIFN-γ与CNHK300在胃癌细胞SGC-7901与成纤维细胞BJ中的增殖能力;ELISA法比较CNHK300-hIFN-γ和复制缺陷型腺病毒Ad-hIFN-γ在细胞中hIFN-γ蛋白的表达量;细胞活力MTT检测法与CPE实验观察CNHK300-hIFN-γ对胃癌细胞与正常细胞的杀伤效应。结果:增殖实验结果表明CNHK300-hIFN-γ能选择性地在端粒酶阳性的胃癌细胞中大量增殖;ELISA实验结果表明CNHK300-hIFN-γ在胃癌细胞中hIFN-γ的表达量可至117.26±15.92ng/ml;MTT与CPE实验表明CNHK300-hIFN-γ对胃癌细胞有显著的杀伤性,对正常细胞无明显杀伤。结论:增殖型腺病毒CNHK300-hIFN-γ感染胃癌细胞后增殖活跃并能大量表达目的基因hIFN-γ,对胃癌细胞有明显杀伤作用但对正常细胞无明显杀伤,为胃癌的病毒基因治疗进一步提供了理论依据。
- 陈琳姜梨华李林芳吴红平钱炎珍薛旭潮
- 关键词：增殖型腺病毒胃癌基因治疗
- E1B55kDa缺失的增殖腺病毒抗肿瘤效果差异及其分子机制
- 2007年
- 目的:观察E1B55kDa缺失的增殖腺病毒CNHK200和CNHK200-hA对A549肺癌和MBD-231乳腺癌动物模型的抗肿瘤效果,结合研究肿瘤细胞柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)的表达状态,分析腺病毒抗肿瘤效果的差别及其分子机制。方法:建立A549肺癌和MBD-231乳腺癌裸鼠模型,给予病毒总剂量1×109pfu的CNHK200和CNHK200-hA治疗。观察期结束,取肿瘤标本进行柯萨奇病毒-腺病毒受体(CAR)和腺病毒壳蛋白Hexon的免疫组化定位。结果:在CAR水平高表达的A549细胞内,CNHK200-hA和CNHK200均可以有效增殖并杀伤肿瘤细胞,产生明显的疗效。相反,在CAR水平低下的MBD-231细胞内,CNHK200-hA和CNHK200没有增殖复制能力,CNHK200几乎没有任何治疗效果,CNHK200-hA的治疗效果仅由Angiostatin基因表达所产生。结论:CAR在E1B55kDa缺失的增殖腺病毒的感染和增殖过程中起着至关重要的作用,肿瘤细胞CAR表达低下可以影响腺病毒载体的感染力和增殖力,从而降低用腺病毒进行肿瘤基因治疗的疗效。
- 王伟国苏长青马炬明施建国胡慧珍李林芳姜梨华钱其军
- 关键词：增殖腺病毒肿瘤模型基因治疗
- 特异性增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ治疗胃癌的体外实验研究
- 2010年
- 目的研究增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ在胃癌细胞BGC．823中的特异性增殖能力、目的基因表达能力、肿瘤杀伤作用及安全性。方法通过增殖实验比较CNHK300-mIFN-γ与CNHK300在胃癌细胞BGC-823与成纤维细胞BJ中的增殖能力；ELISA法检测CNHK300-mIFN-γ和复制缺陷型腺病毒Ad-mIFN-γ不同细胞中mIFN-γ蛋白的表达量；MTT与细胞病变效应（CPE）实验观察CNHK300-mIFN-γ对胃癌细胞的杀伤效应及安全性。结果增殖实验结果表明CNI-IK300-mIFN-γ能选择性地在端粒酶阳性的胃癌细胞中大量增殖；ELISA实验结果表明CNHK300-mIFN-γ在胃癌细胞BCG-823中mIFN-γ的表达量可至（171．93±33．61）ng／ml，表达量高于复制缺陷型腺病毒Ad-mIFN-γ【（0．92±0．24）ng／ml]；MTT与CPE实验表明CNHK300-mIFN-γ对胃癌细胞BGC．823有较强的杀伤作用，对正常细胞并无明显杀伤。结论增殖型腺病毒CNHK300-mIFN-γ感染胃癌细胞BGC-823后能高效增殖并大量表达mIFN-γ蛋白，对胃癌细胞有明显杀伤作用且安全性良好。
- 陈坚刘绪舜王峰宗光全苏长青李林芳姜梨华
- 关键词：增殖型腺病毒
- 微RNA-200家族对程序性死亡配体1的调控及其在非小细胞肺癌中的临床意义被引量：1
- 2020年
- 目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)免疫检查点分子程序性死亡配体1(PD-L1)的表达及其与miRNA-200家族之间的调控关系,阐明PD-L1在NSCLC中的临床意义及调控机制。方法选取138例NSCLC患者癌组织及配对的癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色检测PD-L1表达,qRT-PCR检测miRNA-200家族(miRNA-200a、miRNA-200b、miRNA-200c、miRNA-429、miRNA-141)的表达水平。培养肺癌A549细胞,通过转染miRNA-200家族5个miRNA模拟物使其过表达,采用蛋白质印迹法检测miRNA-200家族过表达对PD-L1表达的影响,CCK-8实验检测miRNA-200家族过表达对A549细胞增殖活性的影响,荧光素酶报告基因实验验证miRNA-200家族对PD-L1的调控作用。结果138例NSCLC患者癌组织PD-L1总阳性率为58.7%(81/138),高于癌旁组织(3.6%,5/138),差异有统计学意义(P<0.05);PD-L1表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型无关,而与淋巴结转移、脉管侵犯、临床TNM分期有关(P均<0.05)。NSCLC癌组织中miRNA-200家族表达水平均低于癌旁组织(P均<0.01),且PD-L1表达阳性的患者具有更低水平的miRNA-200家族表达水平(P均<0.01)。A549细胞过表达miRNA-200家族能下调PD-L1的表达(P均<0.01),且抑制癌细胞增殖活性(P均<0.01)。荧光素酶报告基因实验证实miRNA-200家族直接负调控PD-L1的表达(P均<0.01)。结论PD-L1高表达预示NSCLC患者预后不良。PD-L1是miRNA-200家族的靶基因,miRNA-200家族表达水平低可能是NSCLC患者高表达PD-L1的重要原因。
- 孙伟白宗科姜梨华邵晓轶
- 关键词：非小细胞肺癌分子调控机制免疫治疗
