廖敏
- 作品数：20 被引量：82H指数：4
- 供职机构：浙江大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家科技支撑计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
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- 鸡传染性支气管炎病毒山西株的分离鉴定及致病性分析
- 2022年
- 为分离鉴定鸡传染性支气管炎病毒(IBV)并研究其致病性,本研究对山西运城疑似传染性支气管炎(IB)感染的送检临床样品研磨后反复冻融,提取基因组进行RT-PCR检测,结果显示其为IBV核酸阳性;进一步对样品研磨液过滤后接种9日龄~11日龄SPF鸡胚,并传至F3代,RT-PCR检测仍为IBV阳性;将阳性样品F11代鸡胚尿囊液接种SPF鸡胚后能引起典型的“侏儒胚”病变,接种气管环能导致气管环纤毛失去活性,表明分离到一株IBV,命名为YC181031。提取分离株基因组进行S1基因的PCR扩增及测序分析,结果显示YC181031株属于致肾病变型的GI-22基因型IBV。将该分离株感染7日龄SPF雏鸡以鉴定其致病性,结果显示YC181031分离株感染能引起雏鸡张口呼吸、精神沉郁、排水样稀粪等临床症状以及死亡,雏鸡死亡率为20%;剖检感染鸡和死亡鸡,能观察到肾脏肿大,并发生明显的尿酸盐沉积等病变;取感染雏鸡和死亡雏鸡的各脏器制备病理切片,观察各脏器的病变,并送公司制备各组鸡各组织的免疫组化切片,检测IBV感染情况。结果显示肾脏、气管、肺脏、腺胃、脾脏、肝脏均能观察到明显病变及病毒感染。对感染鸡每两天采集各组鸡的咽肛拭子,采用RT-PCR检测排毒情况,结果显示感染鸡在试验期14 d内均能持续检测到排毒。采用荧光定量PCR检测各组织器官病毒的载量,结果显示各组织病毒载量由高到低依次为肾脏、气管、肺脏、腺胃、脾脏、肝脏,其中肾脏病毒载量显著高于其他组织的病毒载量(P<0.05)。本研究首次系统研究了GI-22基因型IBV的致病特征,为该病的防制提供了参考依据。
- 卞希一盛豪肖鹏崔明仙蓝嘉宁周继勇廖敏
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒
- 禽传染性支气管炎病毒S1蛋白单克隆抗体制备及其中和抗原表位的鉴定
- 2023年
- 为鉴定禽传染性支气管炎病毒(IBV)刺突(S1)蛋白的中和抗原表位,本研究通过IBV全病毒免疫BALB/c小鼠,经融合、亚克隆筛选获得了4株稳定分泌抗IBV S1蛋白抗体的杂交瘤细胞株4A11、1B11、5E5和7C9。经鉴定制备的单克隆抗体腹水抗体ELISA效价为106以上,Western blot和间接免疫荧光试验分析显示该单克隆抗体反应性和特异性良好。随后用8种基于S1分型的IBV毒株为试验毒株,同实验室已有的8株IBV S1单抗(1E9、1H1、1E4、3C6、3C7、2F3、2E5、4F9)共12株单抗进行气管环中和活性检测,发现S1蛋白单抗与8种S1亚型的毒株均有不同程度的中和作用。随后,在抗原表位和Western blot分析的基础上,鉴定出单克隆抗体识别的抗原表位区域,获得了6个中和抗原表位,其中除^(416)IQTRTEP^(422)表位,其他5个表位仍未有相关报道。本研究成功制备出4株特异性识别S1蛋白且具有中和活性的单克隆抗体,不仅丰富了IBV的单克隆抗体库,为今后研究IBV S1蛋白分子结构提供了关键生物材料;获得的6个S1蛋白中和抗原表位也为后续建立IBV疫苗免疫效果评价方法和亚单位疫苗开发提供了工具。
- 彭莉张焕东李忠斐肖鹏颜焰董伟仁周继勇廖敏
- 关键词：禽传染性支气管炎病毒S1蛋白单克隆抗体
- 冠状病毒非结构蛋白的研究进展被引量：19
- 2013年
- 冠状病毒(Coronavirus)家族成员是许多家畜、宠物包括人类的重要病原,引起多种急性和慢性疾病。冠状病毒有一巨大的基因组RNA,全长27~32 kb,编码结构蛋白、非结构蛋白和一些辅助蛋白。冠状病毒非结构蛋白(nonstructural prtein,nsp)由病毒编码的多聚蛋白1a/1ab水解而来,共有15或16个。这些非结构蛋白参与调节病毒基因组RNA的复制和亚基因组RNA的转录,或作为转录/复制复合体参与基因组的复制转录,并参与感染宿主等过程,是冠状病毒重要的功能蛋白。随着冠状病毒引起的严重急性呼吸系统综合症(severe acute respiratory syndrome,SARS)在中国乃至全球的爆发,对冠状病毒尤其是其非结构蛋白的研究得到越来越多的重视。本文就冠状病毒非结构蛋白的研究进展做一综述。
- 边葶苈周继勇廖敏
- 关键词：冠状病毒非结构蛋白
- 5株传染性囊病病毒超强毒株的分离与鉴定被引量：2
- 2014年
- 本研究从浙江余姚、上虞、海南3个疑似发生传染性囊病的鸡场采集病料共20份,通过观察临床症状、病理变化、RT-PCR检测、SPF鸡胚接种、基因测序等试验,证实鸡场送检样品的鸡群发生了传染性囊病,且分离到5株传染性囊病病毒,对VP2基因进行测序分析后,发现具有超强毒株的特征。并与Gen Bank上的已知的强毒OKYM D49706、HK46 AF092943、D78 AF499929、Harbin-1 AF454945的VP2氨基酸序列的同源性在99.22%。说明此次分离的5株病毒与已知病毒存在一定的差异性。为以后的IBDV病毒的研究提供了一定的依据。
- 孙晓媛周继勇廖敏
- 关键词：传染性囊病病毒测序分析
- 传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp15的体外表达及其单克隆抗体的制备被引量：2
- 2016年
- 以实验室保存的肾型传染性支气管炎病毒(IBV)毒株SC021202作为模板,扩增IBV非结构蛋白nsp15基因后,成功构建了原核表达载体PET-28a(+)-nsp15,将其转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达出约45ku的目的蛋白。纯化的nsp15蛋白可与IBV感染鸡血清发生良好反应。用纯化的重组nsp15蛋白免疫小鼠,制备单克隆抗体。经过3轮有限稀释和筛选阳性克隆,最终获得3株稳定分泌nsp15蛋白抗体的细胞株,分别为1A6、2B6和4D7。Western-blot分析显示,3株单克隆抗体都与nsp15蛋白有很好的特异性反应。IFA检测显示,nsp15单克隆抗体与IBV感染的细胞和nsp15基因转染的细胞均出现明显的反应。IBV nsp15单克隆抗体的制备为传染性支气管炎流行病学的监测、鉴别诊断及对其蛋白功能的进一步研究奠定了基础。
- 李乐超石婷婷郎咸勇牟小东王丹丹周继勇廖敏
- 关键词：传染性支气管炎病毒单克隆抗体
- 鸡传染性支气管炎病毒变异株的分离及分子特征研究被引量：4
- 2013年
- 为了解近年来鸡传染性支气管炎病毒（IBv）分子生物学特征及其变异情况，本研究以最近从山东潍坊某鸡场产蛋鸡卵巢中分离的一株IBV WF2011为研究对象，进行基因2～基因6的基因组测序及分析。结果表明分离株3’端基因组具有典型的IBV基因编码特征5’．S．3a．3b．E．M．5a．5b．N．3’，S蛋白裂解位点为ⅫRRSRR，，与美国株Gray、Holte、JMK、Conn46和韩国株SNU8067的s蛋白裂解位点相同。同源性比较和系统进化分析显示，WF2011分离株与常见的参考病毒株的同源性普遍较低，s1基因的同源性在49．7％～86．0％之间，并且与LX4、SAlBK和Mass类型的病毒株存在较大的遗传距离。WF2011是一株变异程度比较大的IBV变异株。
- 边葶苈朱林文思雷静任景乐李烨周继勇廖敏
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒变异株遗传进化分析
- 传染性法氏囊病病毒蛋白功能的研究进展被引量：2
- 2015年
- 传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)是引起急性、高度接触性鸡传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)的病原体。该病毒感染引起的高传染性和免疫抑制给养禽业带来巨大的经济损失,3周龄以下鸡群感染是导致免疫抑制和免疫缺陷时诱发二次感染和对其他病原免疫失败的重要原因。IBDV的研究得到越来越多的重视,对IBDV编码蛋白功能的认识有助于深入了解IBDV的致病机制,也为IBD的防控提供了重要依据。
- 孙晓媛王三应周继勇廖敏
- 关键词：传染性法氏囊病病毒蛋白
- GST pull-down结合质谱筛选猪圆环病毒2型ORF4潜在互作蛋白
- 2019年
- 猪圆环病毒2型编码的ORF4蛋白是近年来发现的新蛋白。迄今为止,人们对ORF4所参与的细胞生物学过程知之甚少。本研究首先构建了带双标签的真核表达载体pCMV-N-Flag-GST,再将ORF4基因插入该载体中,形成pCMV-N-Flag-GST-ORF4。将质粒转染293T细胞表达ORF4后,通过GSTPull-down试验捕获细胞内潜在与ORF4互作的蛋白库。经SDS-PAGE分离及银染后,对所得的特异性条带进行质谱鉴定,筛选出5个与ORF4潜在互作的蛋白,包括丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶6催化亚基、α心肌蛋白、β肌动蛋白、SEC-14样蛋白5和肌球蛋白myosin 9。上述研究结果为深入揭示ORF4在病毒感染细胞过程中发挥的作用提供新的思路与方向。
- 林翠唐雯顾金燕顾金燕金玉兰廖敏廖敏
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 鸭传染性产蛋减少症(暂定名)的病原分离初报被引量：29
- 2011年
- 本文对2010年在成年蛋鸭中流行的以产蛋下降为特征的未知疫病病原进行了初步鉴定。病原能在鸭胚、鸡胚和细胞上复制增殖,对鸭胚、鸡胚的致死率达100%。鸭胚病毒分离物不具有血凝性,在透射电镜下可观察到直径为50~100 nm、有囊膜带突起的病毒粒子。病毒对酸敏感、能耐受pH9的碱性环境,50℃1 h可使病毒失去感染能力。SPF鸡人工感染试验结果显示,感染鸡生长缓慢、致死亡率低、能回收病毒。说明引起鸭产蛋量下降的疫病病原是病毒性的,并导致鸡感染发病,我们将此病暂称为鸭传染性产蛋减少症。
- 廖敏牟小东耿阳边葶苈陆新浩陈秋英任祖伊丁铲周继勇
- 关键词：蛋鸭产蛋下降病毒分离鉴定
- 传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp10单克隆抗体的制备被引量：1
- 2014年
- 为了体外获得大量表达的传染性支气管炎病毒(IBV)的非结构蛋白10(nsp10)并制备其单克隆抗体,通过RT-PCR扩增获得了IBV nsp10基因,并将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中。重组载体pET-28a(+)-nsp10转化的表达宿主菌在1mmol/L IPTG诱导5h获得高效表达。用纯化的重组蛋白Hisnsp10免疫小鼠制备单克隆抗体,采用有限稀释法经过3轮筛选和鉴定最终获得了2株分泌抗nsp10单克隆抗体的细胞株1G2和3G7。2株单克隆抗体在Western-blot分析中均与重组His-nsp10蛋白反应,并通过间接免疫荧光试验识别了4种不同毒株感染的DF-1细胞。IBV nsp10单克隆抗体的成功制备为IBV的检测和nsp10蛋白功能的研究奠定了基础。
- 雷静凌吉飞周继勇廖敏
- 关键词：单克隆抗体
