张国华
- 作品数：10 被引量：136H指数：5
- 供职机构：北京大学第一医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达
- 3α-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD,E.C.1.1.1.50)是睾酮假单胞菌分泌的多种类固醇脱氢酶的一种,可作用于多种类固醇基质,可逆地催化C<,19-27>类固醇3位羟基/酮基的氧化还原<'[1]> .胆汁酸是3α-H...
- 张国华徐国宾朱立华
- 关键词：原核表达系统
- 文献传递
- SARS患者及其医护人员血中特异IgG抗体变化规律的初步研究被引量：31
- 2003年
- 目的 :对临床诊断严重急性呼吸道综合征 (SevereAcuteRespiratorySyndrome,SARS ,即非典型肺炎 )患者血抗SARS冠状病毒IgG抗体的变化规律和密切接触SARS患者的医护人员有无隐性感染作初步调查。 方法 :用酶联免疫吸附测定 (ELISA)检测 5 7例正常人、12 7例在SARS病房工作 1个月的医护人员和 73例不同病程SARS患者血浆抗SARS冠状病毒IgG抗体的水平。 结果 :正常人和医护人员血浆中尚未检测到抗SARS冠状病毒IgG抗体。SARS患者发病第 0～ 7、8～ 10、11～ 14、15～ 2 0天后血浆中抗SARS冠状病毒IgG抗体的阳性率分别为 0、33%、5 2 %和 86 % ,总阳性率为 6 1%。结论 :ELISA检测血浆中抗SARS冠状病毒IgG抗体的特异性和敏感度均很好。呈阳性反应病例可确诊已受病毒感染 ,对于发病早期还未产生抗体的病人 ,阴性结果不能说明未受感染 ,应做进一步观察。
- 徐国宾陆海英李杰李勇华冯珍如霍娜王广发赵振东张国华闫存玲李海霞高晓明徐小元王贵强庄辉
- 关键词：SARS医护人员血浆ELISA
- 胆汁酸的代谢及其测定的临床意义
- 胆汁酸(BA)是胆固醇在体内的一组代谢产物，通过胆汁酸的肠肝循环，机体可有效利用肝脏合成的有限的胆汁酸。随着研究的进展，人们对胆汁酸的代谢、调节及其生理功能和病理作用都有更深入的了解。由于胆汁酸在疾病的诊断和鉴别诊断中的...
- 张国华
- 关键词：胆汁酸胆固醇
- 文献传递
- SARS冠状病毒的生物学性状及实验室检测方法研究进展被引量：11
- 2003年
- 杨瑞锋徐国宾闫存玲张国华李海霞夏铁安
- 关键词：SARS冠状病毒生物学性状
- B型钠尿肽的生物学特性及其在心脏病学中的临床应用进展被引量：80
- 2004年
- 张国华胡韵史晓敏徐国宾夏铁安
- 关键词：B型钠尿肽生物学特性心脏病学
- 睾酮假单胞菌3α-羟类固醇脱氢酶基因的质粒载体构建及表达被引量：6
- 2002年
- 从土壤中分离睾酮假单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α hsd)基因 ,将扩增产物用NdeⅠ /BamHⅠ消化 ,切下目的基因片段克隆到质粒 pET 15b中构建重组pET 15b .将重组 pET 15b转化入E .coliDH5α中 ,经酶谱分析和测序 ,鉴定出正确的重组质粒 pET 15b .将重组pET 15b转化入宿主菌E .coliBL2 1(DE3) pLysS中 ,用硫代半乳糖苷 (IPTG)进行诱导表达 .提取细菌总蛋白质进行SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)分析并测定酶活性 .粗提物中酶活性高达 2 4 5× 10 5U/L .利用重组蛋白中的 6个组氨酸(His)组成的“标签”进行亲和层析 ,经一步金属螯合亲和层析纯化后 ,重组蛋白在SDS PAGE上呈现出均一的单一条带 ,回收率达 6 8% .活性和纯度均较高的目的蛋白 3α HSD的获得 。
- 张国华徐国宾刘英民夏铁安
- 关键词：质粒载体胆汁酸血清
- 检验科SARS标本检测安全管理介绍
- 2003年
- 目的 :为防止SARS患者的标本对实验室人员的感染和污染环境 ,制定适应本科室实际情况的恶性传染病实验室规章制度。方法 :(1)加强安全观念教育 ,制定生物安全制度 ,明确安全职责 ,实行科主任、各组组长、消毒隔离监督员三级监督制 ;(2 )建立专用实验室或SARS工作区 ,由指定专人进行操作 ,实验室内按照安全消毒工作指南定时定期对空气、地面、门窗、台面以及仪器等进行消毒 ;(3)工作人员进入、离开实验室必须按要求采取防护措施 ;(4 )SARS样本的采集、运输和前处理等过程均要注意预防渗漏和溅出 ,SARS标本的分类、显微镜检查和酶联免疫测定在生物安全柜中进行 ,检测后一切污染过的物品和用具按照规定进行处理。结果 :SARS爆发至今 ,检验科尚无一例工作人员感染SARS。结论 :我们的防范措施是切实可行而有效的 。
- 李海霞屈晨雪徐国宾闫存玲张国华李传保王建中夏铁安
- 关键词：检验科安全管理
- 3α-羟类固醇脱氢酶的表达、纯化和酶学性质研究被引量：4
- 2004年
- 从土壤中分离睾酮丛毛单胞菌 ,提取其基因组DNA ,PCR扩增 3α 羟类固醇脱氢酶 (3α HSD)基因。以质粒pET 1 5b为载体 ,构建 3α HSD的原核表达系统。经IPTG诱导后 ,得到了具有酶活性的融合蛋白 ,细菌总蛋白的表达量为 0 73g L ,其中融合酶蛋白占 1 6 4 % ,活性达 1 38× 1 0 5U L。利用融合蛋白N末端的His tag,经金属螯合亲和层析纯化后 ,得到了纯度较高的融合酶蛋白 ,酶蛋白的得率为 6 8% ,比活性为 1 94 7U mg。凝血酶切除His tag后 ,经质谱鉴定 ,重组蛋白的分子量为 2 6 5kD ,与理论推测值基本相同。 2 5℃以雄酮为底物 ,以NAD+ 和thio NAD+ 为辅因子时 ,融合蛋白参与酶促反应的最适pH分别为 1 0 5和 9 4。 37℃条件下酶促反应较快 ,2 5℃时的反应速度只有 37℃时的 5 2 % ,Q1 0 ( 2 5℃～ 35℃ ) 为 1 7。 2 5℃、pH1 0 5、以雄酮和各级胆汁酸为底物、NAD+ 为辅因子时 ,融合酶蛋白的动力学常数Km位于 4 2～ 5 1 1 μmol L范围内。融合酶蛋白发挥催化作用并不需要金属离子的参与 ,而Fe3+ 、Fe2 + 、Zn2 + 则抑制酶活性 ,反应体系中加入EDTA也并不影响酶的活性。活性和纯度均较高的融合蛋白 3α HSD的获得及其生物学性质的研究 。
- 张国华丛爱日徐国宾夏铁安
- 关键词：纯化酶学性质
- 睾丸酮丛毛单胞菌的分离和鉴定及3α-羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的克隆表达被引量：6
- 2005年
- 目的:从自然界中分离鉴定产 3α 羟类固醇脱氢酶(3α hydroxysteroiddehydrogenase, 3α HSD)的睾丸酮丛毛单胞菌,并在大肠杆菌(E.coli.)中克隆表达 3α HSD。方法:将池塘泥浆样品接种到以雄酮为唯一碳源的培养基中,对分离到的菌株根据形态学和生理生化特征进行初步鉴定。为进一步鉴定该菌株,根据睾丸酮丛毛单胞菌中的 3α HSD的基因设计引物,PCR扩增细菌基因组DNA,将扩增片段插入到载体pET15b中,构建重组质粒pET15b,并在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中进行诱导表达,对表达得到的蛋白进行鉴定并测定其酶活力。结果:一系列生化反应和培养特征证实,该菌与睾丸酮丛毛单胞菌的符合率为 85%,最适生长pH值为 7. 0,最佳生长温度为 30℃。在E.coli. BL21 (DE3 )pLysS中经诱导表达得到了相对分子质量约为 29×103具有酶活性的融合蛋白,可催化雄酮(3α 羟类固醇)脱氢。结论:从池塘泥浆中分离到一株产 3α HSD的睾丸酮丛毛单胞菌,并在E.coli.中表达得到了具有酶活性的融合 3α HSD。这为利用金属螯和亲和层析纯化融合 3α HSD,并进一步建立以其为工具酶的血清总胆汁酸酶循环测定方法奠定了基础。
- 张国华丛爱日徐国宾孙立颖严岩夏铁安
- 关键词：睾丸酮丛毛单胞菌克隆表达大肠杆菌亲和层析纯化生化特征扩增片段
- 睾酮假单胞菌-3α羟类固醇脱氢酶及其在总胆汁酸测定中的应用被引量：2
- 2003年
- 张国华朱立华李志艳
- 关键词：总胆汁酸革兰氏阴性菌基因核苷酸血清
