张念慈
- 作品数：5 被引量：23H指数：3
- 供职机构：湖州师范学院生命科学学院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金湖州市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 抗病毒基因MxA真核表达载体的构建及在鸡细胞中的表达被引量：6
- 2008年
- 将人抗病毒蛋白基因MxA与携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达质粒重组后构建MxA基因真核表达载体pEGFP-C1-MxA。经PCR和酶切方法鉴定后,重组质粒在脂质体介导下转染鸡成纤维细胞和睾丸组织原代细胞,通过荧光观察,RT-PCR及细胞免疫组化检测目的基因的表达。结果表明,MxA基因片段已经被克隆到pEGFP-C1表达载体,成功构建了MxA基因真核表达载体pEGFP-C1-MxA。经该重组质粒转染后的鸡细胞的胞质中呈现颗粒状分布的绿色荧光,RT-PCR扩增出EGFP和MxA基因的特异性片断,免疫组化结果显示EGFP报告基因在细胞内的阳性表达,并表现出MxA的表达特征,间接证明了MxA可在鸡细胞中表达。MxA基因真核表达载体的成功构建以及在鸡细胞中的表达为进一步研究MxA基因在抗禽病毒性疾病中的应用打下了基础。
- 刘莉采克俊张易祥何湃丁志丽张念慈
- 关键词：转染
- 鸡胚睾丸支持细胞的分离、纯化与鉴定被引量：3
- 2008年
- 以18天鸡胚睾丸为实验材料,经胶原酶和胰蛋白酶两步酶消化法得到生精上皮细胞悬液。在原代培养过程中经差异贴壁和低渗处理后,获得了纯度约为90%的单层支持细胞。对纯化的培养物染色鉴定,结果显示支持细胞为碱性磷酸酶(AKP)阴性,而混杂在其中的另一种体细胞管周细胞为AKP阳性;油红O染色显示,支持细胞胞质内含有大量的脂肪滴,核内见双极小体;吖啶橙染色证实支持细胞富含RNA;罗丹明123染色显示支持细胞富含线粒体;Hoechst33342染色显示支持细胞细胞核呈长卵圆形,核的长轴与细胞长轴平行;免疫荧光染色显示支持细胞胞质中表达波形蛋白。建立了一套简单、易行的鸡胚睾丸支持细胞分离纯化与鉴定方法。
- 采克俊刘莉丁海雷张易祥丁志丽张念慈
- 关键词：鸡胚睾丸支持细胞纯化
- 第28期鸡胚原始生殖细胞的分离培养被引量：1
- 2009年
- [目的]进一步优化生殖细胞(PGCs)细胞体外培养条件。[方法]从第28期(5.5 d)鸡胚生殖嵴分离PGCs,将PGCs与性腺基质细胞共培养进行原代培养,比较2种培养温度和3种培养浓度对PGCs原代培养的影响,以及2种饲养层细胞对PGCs传代培养的影响,并通过倒置显微镜下形态学观察、碱性磷酸酶(AKP)和过碘酸希夫反应(PAS)染色方法鉴定PGCs。[结果]培养浓度为2.5×105个/m l和培养温度为37℃时PGCs增殖较多,不易分化,存活能力较强,以第2代鸡胚成纤维细胞作饲养层时传代培养效果较好,获得了PGCs增殖的未分化集落,为后期的细胞标记及移植研究提供了较多数量和较高活力的PGCs。[结论]获得了PGCs原代与传代培养较好的培养体系,为禽类EG细胞系的建立和转基因研究奠定了基础。
- 丁志丽采克俊刘莉张易祥张念慈
- 关键词：鸡胚原始生殖细胞
- 禽类胚胎干细胞的研究进展被引量：5
- 2008年
- 采克俊周国庆李连茅张易祥张念慈刘莉
- 关键词：胚胎干细胞禽类产品STEM分化潜能增殖能力发育分化
- 精原干细胞的分离纯化方法被引量：10
- 2008年
- 采克俊张易祥丁志丽丁海雷张念慈刘莉
- 关键词：精原干细胞分离纯化方法遗传资源保护精子细胞增殖分化生精细胞
