李宁求
- 作品数：177 被引量：451H指数：12
- 供职机构：中国水产科学研究院珠江水产研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 水生生物在人体公共卫生研究中应用的思考
- 2006年
- 简要介绍涉水人体疫病及水环境有害因子对人体健康的影响,水生实验动物在人类疾病研究及环境检测方面的研究进展。探讨以水生生物为材料进行涉水人体公共卫生研究的应用前景。
- 吴淑勤李宁求李凯彬巩华黄志斌潘厚军张敏
- 关键词：水生生物公共卫生人畜共患病动物
- 基于病毒mRNA监测的传染性脾肾坏死病毒灭活快速检验方法建立及其应用被引量：1
- 2017年
- 为建立传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)灭活快速检验方法,从ISKNV感染CPB细胞系转录谱筛选并经q RT-PCR验证表达量最高的病毒ORF099基因作为快速检测靶基因。以质粒p MDORF099为标准品,采用q PCR方法绘制了CT值与质粒拷贝数的标准曲线,其线性方程为CT=–3.42lgx+39.455,最低检测限为3拷贝/μL,结果显示组间和组内变异系数均小于2%,表明该方法具有较高的灵敏度和较好的重复性。将ISKNV病毒悬液10倍稀释成100~103拷贝/m L,分别取1 m L病毒稀释液接种CPB细胞,在第7、9和11天提取细胞总RNA,经基因组DNA去除试剂盒去除残留DNA后采用qRT-PCR方法检测ORF099基因转录本,结果显示在第7天即可从接种1个拷贝病毒的细胞中检测出ISKNV ORF099转录本。将3个浓度梯度(0.05%、0.1%、0.2%)的甲醛灭活ISKNV制备的模拟样品以及实验室制备的3批次ISKNV细胞灭活疫苗样品接种CPB细胞9 d,采用上述快速检验方法进行检测。0.05%、0.1%甲醛灭活模拟样品可检测到ISKNV ORF099基因转录本,其他样品均未检测到。而细胞盲传实验显示,0.1%终浓度甲醛灭活ISKNV接种细胞盲传3代未出现CPE,鱼体安全实验显示接种鱼体后无临床发病症状和实验鱼死亡,表明本研究建立的病毒灭活快速检验方法比细胞盲传法和鱼体安全实验具有更高的灵敏度,与传统检测方法相比具有灵敏度高、耗时短、检测效率高等优点,对提高ISKNV灭活疫苗生产效率具有重要意义。
- 张醴溪杨圆圆方伟付小哲林强林强刘礼辉梁红茹刘礼辉吴志新梁红茹
- 关键词：传染性脾肾坏死病毒灭活疫苗MRNA荧光定量RT-PCR
- 斑点叉尾鮰败血症3种病原多重PCR检测方法的建立被引量：3
- 2016年
- 【目的】建立可同时快速检测斑点叉尾鮰败血症3种病原(嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和鮰爱德华菌)的多重PCR检测方法。【方法】根据嗜水气单胞菌溶血素基因(Hly)、维氏气单胞菌脱氧核糖核酸酶Ⅰ基因(DNaseⅠ)以及鮰爱德华菌溶血活化基因(Eha)的保守序列,设计3对特异性引物,优化并建立斑点叉尾鮰败血症3种主要病原菌的多重PCR方法,对其特异性和灵敏度进行考察,并将其用于临床样品的检测。【结果】建立的多重PCR方法,当Hly基因、DNaseⅠ基因以及Eha基因的引物浓度分别为1.0,1.0和0.5μmol/L,退火温度为59.5℃时,各目的片段均可较好地扩增。特异性试验结果表明,建立的多重PCR方法可从嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和鮰爱德华菌分别扩增出1 091,262和450bp的目的片段,从多种细菌DNA的混合种也可扩增出上述目的片段,而对其他对照组的扩增结果均为阴性;敏感性试验结果表明,建立的多重PCR最低可分别检测出200CFU/mL的嗜水气单胞菌、300CFU/mL的维氏气单胞菌和200CFU/mL的鮰爱德华菌;对临床样本的检出率为100%,与传统生物学检测结果的符合率为100%。【结论】建立的多重PCR检测方法特异、灵敏、快速,可单独或同时检测斑点叉尾鮰败血症嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和鮰爱德华菌3种主要病原菌,也可以用于其他水生动物上嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和鮰爱德华菌的检测。
- 刘礼辉张德锋李宁求付小哲林强石存斌
- 关键词：斑点叉尾鮰败血症嗜水气单胞菌维氏气单胞菌多重PCR
- 传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)ORF086基因的表达·纯化及其抗体的制备
- 2009年
- [目的]构建传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)ORF086基因的融合表达载体,制备抗体为进一步研究ORF086蛋白的免疫保护性提供前提条件。[方法]PCR扩增目的基因,构建重组质粒,经酶切鉴定,PCR和核酸序列分析后,IPTG诱导表达,Ni-柱纯化,注射新西兰白兔获得抗血清。[结果]扩增出ORF086基因,成功构建了重组质粒pET32a-ORF086,SDS-PAGE电泳和Western-blot分析显示,获得一条36.0 kD的融合蛋白。[结论]成功构建了原核表达载体,融合蛋白主要以包涵体的形式存在,经柱层析纯化蛋白,纯度达90%以上。
- 彭媛媛付小哲石存斌余露军李宁求吴淑勤
- 关键词：纯化抗体
- 鳜传染性脾肾坏死病毒重组主衣壳蛋白免疫效果的初步验证被引量：3
- 2009年
- 将大肠杆菌重组表达的鳜(Siniperca chuatsi)传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)主衣壳蛋白(MCP),以不同剂量(20μg/尾、50μg/尾、100μg/尾)腹腔注射免疫幼鳜(2月龄),测定各免疫组的血清抗体效价变化规律、头肾淋巴细胞增殖刺激指数(SI)、肝脏Mx蛋白表达及相对免疫保护率(RPS)。结果表明,各免疫组抗体效价在第14天时达到峰值,其中50μg/尾免疫组的抗体效价最高,随后各组的效价均下降,至第35天时与对照组无差异;头肾淋巴细胞经LPS、ConA刺激后,50μg/尾免疫组及100μg/尾免疫组的刺激指数均升高,其中50μg/尾免疫组的刺激指数最高,20μg/尾免疫组与对照组无差异;在免疫后48h各剂量免疫组Mx蛋白均有低量表达,对照组无表达,各免疫组表达量无显著差异;免疫后第36天攻毒,50μg/尾免疫组的相对保护率最高,为64.3%。研究结果表明,重组MCP蛋白有较好的免疫原性,可以激发鳜特异性免疫及非特异性免疫应答,当免疫剂量为50μg/尾时,免疫保护效果最好。
- 付小哲李宁求彭媛媛石存斌白俊杰吴淑勤
- 关键词：传染性脾肾坏死病毒免疫保护
- 水产立体养殖模式传播禽流感的风险分析
- 2013年
- 立体养殖模式是水产养殖的重要类型,在我国具有悠久的历史,曾被联合国粮农组织作为合理利用物质能量典型在全球进行推广。但现存落后的立体养殖模式存在传播人兽共患病的隐忧,对公共卫生造成威胁,特别是禽流感传播被疑与水产立体养殖模式有关。因此,论文对水产养殖可能传播禽流感的推测进行了总结,概述我国水产立体养殖模式类型与现状,并对其传播禽流感的风险进行了分析,提出了相关建议。
- 李宁求付小哲赖迎迢王亚军任燕石存斌吴淑勤
- 关键词：禽流感风险分析
- 基于层次分析法的牡蛎养殖过程中副溶血弧菌风险评估模型建立和初步应用被引量：6
- 2017年
- 副溶血弧菌是一种重要食源性致病菌,牡蛎是其主要携带者之一。为了量化评估牡蛎养殖过程中副溶血弧菌感染的风险,采用德菲尔法、层次分析法和多指标综合体系评价法,将专家经验知识和现代数学方法结合,构建了由评估指标体系、风险因素权重、评分标准、综合评价函数等组成的牡蛎养殖过程中副溶血弧菌风险评估模型。其中,评估指标体系包括水质、养殖管理、健康状况等3个准则层和水温、盐度、pH、氨氮、亚硝酸盐、溶解氧、养殖模式、养殖密度、场址选择、日常管理、细菌感染、病毒感染、寄生虫感染等13个指标层风险因素;3个准则层风险因素权重值集合为W={0.5278,0.3325,0.1396},指标层风险因素中水温(0.2270)、盐度(0.1368)和养殖密度(0.1409)等权重值较高,为影响副溶血弧菌感染的主要风险因子;分别建立了定性和定量评估指标的评分标准。以广东阳江某牡蛎养殖场为例,运用多指标综合体系评价法对该模型进行验证,得出该牡蛎养殖场春季、夏季、秋季和冬季副溶血弧菌感染发生风险概率为分别0.2281、0.5833、0.2723和0.1347,评估结果与实际调查结果相符,说明该模型可用于牡蛎养殖中副溶血弧菌感染风险估算。
- 林强李宁求付小哲刘礼辉梁红茹石存斌
- 关键词：牡蛎副溶血弧菌风险评估层次分析法
- 鱼源致病性弧菌重组OmpK疫苗交叉免疫保护的分子基础
- 本文根据弧菌OmpK基因序列设计了一对兼并引物,分别从19株鱼源致病性弧菌中PCR扩增得到约800bp片断,将其克隆至pMD18-TVector载体,序列分析表明19株弧菌外膜蛋白OmpK基因分别含有786～849bp的...
- 李宁求杨智慧吴淑勤白俊杰石存斌潘厚军
- 关键词：海水养殖鱼病防治人工免疫
- 文献传递
- 用于区分鳜鱼弹状病毒vRNA、cRNA和mRNA的引物组合及试剂盒
- 本发明提供了用于区分鳜鱼弹状病毒vRNA、cRNA和mRNA的引物组，所述引物组包括用于反转录的引物和用于荧光定量扩增的引物，所述荧光定量扩增的引物序列如SEQ ID NO:4～9所示。本发明通过在鳜鱼弹状病毒vRNA、...
- 林强李宁求付小哲梁红茹刘礼辉牛银杰
- 文献传递
- 山姜素对鱼源耐药性嗜水气单胞菌体外抗菌作用的研究被引量：7
- 2021年
- 旨为探究山姜素对耐药性嗜水气单胞菌的体外抑菌效果及其作用机制。通过测定山姜素对嗜水气单胞菌生长、细菌形态、电导率、乳酸脱氢酶(LDH)、蛋白质代谢和DNA的影响,研究山姜素对耐药性嗜水气单胞菌的抑菌机制。山姜素对5株鱼源耐药性嗜水气单胞菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别为128-256μg/mL和512-1024μg/mL。与对照组相比,2MIC山姜素作用于嗜水气单胞菌CW株8 h、16 h后,菌体皱缩,细胞壁和细胞膜破损,细胞质丢失,内部空化;作用2 h后,菌悬液电导率、乳酸脱氢酶含量、DNA外渗量分别增长了3.97%、26.09%和10.50μg/mL;作用2、4和8 h后,菌悬液核酸荧光强度和密度呈现随时间降低的趋势。山姜素对嗜水气单胞菌的体外抑菌机制为损伤菌体的细胞壁、增加细胞膜的通透性来抑制其生长繁殖。
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- 关键词：山姜素嗜水气单胞菌菌体形态
