李晓琳
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 供职机构：南京农业大学动物医学院更多>>
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- 相关领域：农业科学更多>>
- PCV2通过NF-κB信号途径调节体外培养仔猪淋巴细胞IL-4和IL-12的分泌
- 研究目的：研究猪圆环病毒2 型(porcine circovirus 2, PCV2)对仔猪淋巴细胞分泌IL-4 和IL？12动态影响及其调控的信号途径,旨在进一步了解PCV2 引起仔猪免疫抑制的机制及防治PCVD 的新...
- 段滇宁郭华李晓琳陈萌萌张亚群韩俊源张书霞
- 关键词：猪圆环病毒2型感染信号途径淋巴细胞
- PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞TLR的影响
- PCV2是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原。自1991年在加拿大首次报道以来,在世界各地已广泛传播,给世界的养猪业造成了巨大的经济损失。PCV2感染后,可引起仔猪固有免疫和适应性免疫的障碍,导致严重的免疫抑...
- 李晓琳
- 关键词：仔猪猪圆环病毒2型淋巴细胞蛋白印迹法
- 文献传递
- PCV2通过激活NF-κB信号途径调节体外培养仔猪淋巴细胞IL-4和IL-12的分泌被引量：2
- 2014年
- 选取8头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗原、抗体阴性的普通断奶仔猪,无菌取其脾脏制成单细胞悬液后,随机分为4组:对照组、NF-κB抑制剂组(抑制剂组)、PCV2组和NF-κB抑制剂-PCV2组(抑制剂-PCV2组),体外培养24 h后收获淋巴细胞及培养上清液。ELISA方法检测培养上清液中IL-4和IL-12的含量;间接免疫荧光定位检测PCV2感染淋巴细胞的情况和核因子κB(NF-κB)蛋白入核情况,Western blot定量检测细胞浆中髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化抑制性核因子кB(p-IкB)及NF-κB/p65和细胞核中NF-κB/p65蛋白含量的变化,电泳迁移率法(EMSA)检测细胞核中NF-κB与DNA的结合活性。结果显示,细胞培养上清液中,PCV2组IL-4含量明显低于对照组及抑制剂-PCV2组(P<0.05),对照组与抑制剂-PCV2组无差异;PCV2组细胞培养上清液中IL-12含量显著高于对照组(P<0.05),抑制剂-PCV2组极显著低于PCV2组(P<0.01)。PCV2感染后可在淋巴细胞内观察到PCV2抗原,并主要存在于细胞浆中。淋巴细胞胞浆内MyD88蛋白含量,PCV2组极显著高于对照组(P<0.01),PCV2组与抑制剂-PCV2组之间无显著差异。PCV2组淋巴细胞胞浆内p-IκBα的蛋白含量,胞核中NF-κB/p65含量及NF-κB与DNA结合活性均显著高于对照组;抑制剂和抑制剂-PCV2组淋巴细胞胞浆内p-IκBα的蛋白含量,胞核中NF-κB/p65含量及NF-κB与DNA结合活性均显著低于对照组。结论:PCV2可感染体外培养的仔猪淋巴细胞,介导MyD88-NF-κB信号途径激活从而调节淋巴细胞IL-4和IL-12的分泌。
- 段滇宁郭华李晓琳陈萌萌张亚群韩俊源张书霞
- 关键词：淋巴细胞核因子ΚB白介素4白介素12
- PCV2诱导体外培养PAMs分泌IL-1β、IL-6和IL-10信号途径的研究
- 研究目的：了解猪圆环病毒2型(PCV2)引起猪肺泡巨噬细胞(PAMs)分泌主要细胞因子的变化及其调控途径,为阐明PCV2致病机制奠定基础。材料方法：选取20头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原抗体均为阴性...
- 韩俊源郭华张亚群段滇宁李晓琳陈萌萌张书霞
- 关键词：猪圆环病毒2型猪肺泡巨噬细胞体外培养
- PRRSV通过激活MyD88依赖的TLRs信号途径调节体外培养PAMs分泌IL-10
- 本试验将15头PRRSV和PCV2血清抗原和抗体均为阴性的35日龄仔猪PAMs 进行体外培养,并随机分为4组:对照组、PRSSV组、髓样分化因子88(MyD88)干扰组(干扰组)和MyD88干扰-PRRSV组(干扰-PR...
- 郭华陈萌萌段滇宁韩俊源张亚群李晓琳张书霞
- 关键词：肺泡巨噬细胞白细胞介素10
- 文献传递
- PCV2通过激活MyD88调控体外培养PAMs分泌IL-1β、IL-6和IL-10被引量：3
- 2014年
- 试验选取6头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原、抗体均为阴性的30日龄断奶仔猪,无菌分离肺泡巨噬细胞(AMs),分4组进行体外培养:对照组、髓样分化因子88(MyD88)干扰组(干扰组)、PCV2感染组(PCV2组)、PCV2感染-MyD88干扰组(PCV2-干扰组)。采用小干扰RNA(siRNA)方法使MyD88基因沉默,并分别于培养后0、6、12、24和48h收集细胞及培养上清液。用荧光定量PCR法检测干扰效率,Western Blot方法检测细胞内MyD88蛋白的表达变化,ELISA方法检测培养上清液中IL-1β、IL-6和IL-10的动态变化。结果显示,siRNA能使78%的MyD88基因沉默,并显著影响其蛋白表达;AMs中MyD88表达量,PCV2组从6h开始显著升高(P<0.05),PCV2-干扰组与PCV2组相比在12、24、48h差异极显著(P<0.01)。培养后各时间点,PCV2均能明显促进AMs分泌IL-1β(P<0.01或P<0.05),PCV2-干扰组和PCV2组相比,IL-1β的分泌量均显著降低(P<0.05)。PCV2能显著增加感染后6和12hIL-6的分泌量(P<0.01),PCV2-干扰组和PCV2组相比,IL-6的分泌量在6和12h显著降低(P<0.05)。PCV2明显促进感染后12、24和48hAMs分泌IL-10的能力(P<0.01),PCV2-干扰组和PCV2组相比,IL-10的含量在24和48h均极显著的降低(P<0.01)。结果表明,PCV2可引起体外培养的PAMs分泌IL-1β、IL-6和IL-10发生不同的变化,而MyD88是引起这些变化的重要调节因子。
- 韩俊源郭华张亚群段滇宁李晓琳陈萌萌张书霞
- 关键词：猪圆环病毒2型猪肺泡巨噬细胞髓样分化因子88
- PCV2对体外培养仔猪淋巴细胞TLRs的影响被引量：4
- 2013年
- 选取6头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原及抗体均为阴性的普通断奶仔猪,无菌取脾脏,制成单个细胞悬液进行体外培养,并分为PCV2组和对照组,PCV2组用PCV2与脾细胞共同培养,对照组加等量RPMI-1640培养液。分别于培养0、6、12、24和48 h后收取悬浮的淋巴细胞,用间接免疫荧光法检测PCV2感染淋巴细胞的情况,相对定量RT-PCR法检测淋巴细胞中TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR8和TLR9 mRNA的表达量,Western blot检测TLR3和TLR4的蛋白表达情况。结果显示:PCV2感染后,TLR2和TLR9 mRNA的表达量在12、24和48 h时均极显著高于对照组(P<0.01),TLR3和TLR4 mRNA的表达量在24 h时极显著高于对照组(P<0.01)。TLR3蛋白在6和12 h显著高于对照组(P<0.05),TLR4蛋白在6、12、24和48 h均显著高于对照组(P<0.05)。结果表明:PCV2感染能显著上调体外培养的仔猪淋巴细胞TLR2、TLR3、TLR4和TLR9 mRNA水平,并进一步显著上调仔猪淋巴细胞TLR3和TLR4蛋白的表达,从而导致机体炎性细胞因子的分泌紊乱。
- 李晓琳郭华刘子臣段滇宁张亚群韩俊源张书霞
- 关键词：猪圆环病毒2型蛋白印迹法
