李树芳
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：山东大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 雪貂螺杆菌α1，2岩藻糖基转移酶酶学性质的研究及H-typeV抗原的合成
- 寡糖或蛋白的岩藻糖基化是通过岩藻糖基转移酶将岩藻糖基转移到寡糖或蛋白上完成的。岩藻糖基化糖链结构在真核生物的多种生理和病理过程中发挥重要作用,这些过程包括神经的发育、受精作用、细胞粘连、炎症的反应以及肿瘤转移等。例如岩藻...
- 李树芳
- 文献传递
- 重组人GALNT3-sol蛋白在毕赤酵母中的高效表达和活性鉴定
- 2012年
- 目的:为了获得有催化活性的人乙酰半乳糖胺转移酶3(GALNT3),构建了GALNT3可溶性区域(GALNT3-sol)的真核分泌表达载体,在巴斯德毕赤酵母中表达并纯化GALNT3-sol蛋白,体外检测其转糖基活性。方法:以构建好的pET15b/GALNT3-sol为模板进行PCR,扩增编码人GALNT3-sol的cDNA片段(1 755 bp),将其克隆至真核表达载体pPIC9K,载体线性化后采用电击法转化毕赤酵母GS115。通过MD平板和G418平板筛选出阳性高拷贝重组菌株。阳性菌株经过甲醇诱导表达人GALNT3-sol重组蛋白,表达上清进行Ni-NAT分离纯化。分别采用SDS-PAGE和Western blot鉴定纯化的重组蛋白,并使用HPLC和MALDI-TOF/MS分析其转糖基化反应的活性。结果:成功构建了能够分泌表达GALNT3-sol的毕赤酵母菌株。阳性表达菌株在BMMY培养基(pH 6.0)中20℃培养,经0.5%甲醇诱导表达96 h,摇瓶表达量可达5mg/L。SDS-PAGE和Western blot结果显示表达重组蛋白为糖基化形式。活性检测显示表达的重组蛋白具有转糖基活性。结论:成功获得可以高效分泌表达具有活性的人GALNT3-sol蛋白的毕赤酵母菌株,为进一步研究人GALNT3的性质及其应用提供了基础。
- 孔蕴郜海涛李树芳王鹏顾国锋顾黎
- 关键词：毕赤酵母分泌表达活性
- 人GALNT3-sol蛋白的原核表达和抗体制备被引量：3
- 2011年
- 目的:构建人乙酰半乳糖胺转移酶3可溶性区域(GALNT3-sol)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化GALNT3-sol蛋白,制备小鼠抗人GALNT3-sol多克隆抗体,并对抗体的基本特性进行了检测。方法:RT-PCR扩增编码人GALNT3-sol的cDNA片段(1755bp),将其克隆至原核表达载体pET15b中,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,诱导表达人GALNT3-sol重组蛋白。将变性、复性和电泳纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗血清。分别采用ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性。结果:成功构建了pET15b/GALNT3-sol原核表达载体,转化BL21(DE3)后可高效表达重组蛋白GALNT3-sol,获得的小鼠抗人GALNT3-sol多克隆抗血清效价达1∶25600,并有良好的特异性。结论:成功获得人GALNT3-sol蛋白,得到了效价和特异性良好的小鼠抗人GALNT3-sol抗体,为进一步研究人GALNT3在肿瘤组织中的表达提供了可靠的材料。
- 孔蕴郜海涛李树芳王鹏顾黎
- 关键词：大肠杆菌多克隆抗体
- 雪豹螺杆菌α1,2岩藻糖基转移酶酶学性质的研究及H-typeV抗原的合成
- 寡糖或蛋白的岩藻糖基化是通过岩藻糖基转移酶将岩藻糖基转移到寡糖或蛋白上完成的。岩藻糖基化糖链结构在真核生物的多种生理和病理过程中发挥重要作用，这些过程包括神经的发育、受精作用、细胞粘连、炎症的反应以及肿瘤转移等。例如岩藻...
- 李树芳
- 关键词：酶学性质
- 文献传递
