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耐热普鲁兰酶CBM68结构域中关键位点对其酶学性质的影响被引量：2: 2016年; 通过对Anoxybacillus sp.LM18-11来源的耐热普鲁兰酶(Pul A)与麦芽三糖共结晶的晶体结构分析,在新命名的底物结合域CBM68中预测出4个与底物结合有关的氨基酸位点(Y14、D16、K62和R96),分别将4个氨基酸位点突变为丙氨酸,得到突变体Pul A^(Y14A)、Pul A^(D16A)、Pul A^(K62A)和Pul A^(R96A)。其中,突变酶Pul A^(Y14A)和Pul A^(R96A)的底物结合力及催化效率与野生酶Pul A相比均有明显降低,其K_m值分别比Pul A提高了4.2倍和2.5倍,k_(cat)/K_m分别为Pul A的29%和37%。同时,Pul A^(Y14A)和Pul A^(R96A)的最适作用温度均降低了10℃,Pul A^(R96A)的最适作用p H也降低了0.5个单位。说明Y14和R96是CBM68结构域中的关键氨基酸位点,这两个位点的发现为进一步探究CBM68结构域的作用机制奠定了基础。; 申莹莹郑宏臣李树芳付晓平徐健勇宋诙; 关键词：定点突变

一种耐热性及比活力提高的β-甘露聚糖酶突变体及其编码基因: 本发明涉及生物技术及酶工程领域，具体公开了一种耐热性及比活力均有提高的β‑甘露聚糖酶突变体Man5AS11R及其编码基因。通过将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β‑甘露聚糖酶Man5A进行K16C和D296C的双...; 郑宏臣宋诙徐健勇李树芳付晓平; 文献传递

提高普鲁兰酶热稳定性的研究: 普鲁兰酶是一类重要的淀粉脱支酶，能专一性的水解支链淀粉和普鲁兰多糖的()糖苷键形成直链淀粉和麦芽三糖，能够协同糖化酶或淀粉酶的作用，提高葡萄糖或麦芽糖的含量，在淀粉加工业中有着重要的用途。具有耐热和耐酸性质的普鲁兰酶是工...; 李树芳徐建勇宋诙; 关键词：普鲁兰酶热稳定性

一个新型耐热普鲁兰酶的结构与功能被引量：17: 2014年; 新型普鲁兰酶的研究对于普鲁兰酶制剂的国产化、打破国外垄断具有非常重要的意义。从我国云南腾冲地区轮马热泉的淤泥中分离获得了一株耐热普鲁兰酶产生菌LM 18-11,经16S rDNA序列系统进化树分析,确定该菌为厌氧芽胞杆菌Anoxybacillus属种,并从中克隆获得了耐热普鲁兰酶的编码基因,该酶在55℃-60℃、pH 5.6-6.4的范围内具有最大的反应活性。此外,该酶具有较好的热稳定性,在60℃下处理48 h,仍可保持50%以上的活力;动力学分析该酶的Vmax和Km分别为750 U/mg和1.47 mg/mL,是目前文献报道中比活力最高的耐热普鲁兰酶。同时还对该酶进行了晶体结构分析,结果显示该酶具有?-淀粉酶家族中典型的结构,在N端具有一个特殊的底物结合域,该结构域的缺失导致比活力和底物结合力都有相应降低,Vmax和Km分别为324 U/mg和1.95 mg/mL。同时,将该普鲁兰酶编码基因导入枯草芽胞杆菌中,在P43启动子的控制下,普鲁兰酶基因获得了高效表达,胞外酶活可达42 U/mL,相比初始菌种,表达活力提高40倍以上。研究表明该普鲁兰酶具有很好的应用前景。; 甄杰胡政李树芳徐健勇宋诙; 关键词：普鲁兰酶酶促动力学晶体结构异源表达

提高普鲁兰酶热稳定性的研究: 普鲁兰酶是一类重要的淀粉脱支酶,能专一性的水解支链淀粉和普鲁兰多糖的糖苷键形成直链淀粉和麦芽三糖,能够协同糖化酶或淀粉酶的作用,提高葡萄糖或麦芽糖的含量,在淀粉加工业中有着重要的用途。具有耐热和耐酸性质的普鲁兰酶是工业上...; 李树芳徐建勇宋诙; 关键词：普鲁兰酶热稳定性; 文献传递

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李树芳