杨向东
- 作品数：74 被引量：201H指数：8
- 供职机构：南华大学医学院心血管病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金湖南省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- cDNA文库基础上运用热启动聚合酶链反应末端延伸快速分离全长cDNA序列被引量：2
- 2002年
- 建立一种cDNA文库基础上运用热启动聚合酶链反应末端快速扩增分离人类新基因全长cDNA序列的新技术。以文库载体序列与待扩增目的基因片段为模板各设计引物进行热启动聚合酶链反应扩增 ,从人胎肝cD NA文库中获得氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞泡沫化过程中差异表达序列标签片段 (FRG4 )的全长cDNA序列 ,聚合酶链反应产物克隆到pGEM T载体中 ,并测序鉴定 ,从而成功获得FRG4的全长cDNA序列。
- 闾宏伟杨向东何淑雅杨永宗
- 关键词：CDNA聚合酶链反应热启动序列标签
- MG132诱导HepG_2细胞凋亡及其对p53表达的影响被引量：2
- 2005年
- 目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞系HepG2的致凋亡作用及其对凋亡相关基因p53蛋白表达的影响。方法采用多个浓度(2,5,10μmol/L)的蛋白酶体抑制剂MG132处理HepG2细胞;流式细胞术和Hoechst荧光染色检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测HepG2细胞p53蛋白含量。结果对照组HepG2细胞凋亡率低于5%,在2,5,10μmol/LMG132作用下,细胞凋亡率分别为42.9%,66.1%和72.8%,MG132诱导HepG2细胞凋亡具有剂量—效应关系。经Hoechst荧光染色可见细胞染色质浓缩等凋亡改变。免疫组织化学检测HepG2细胞p53蛋白表达水平增高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导HepG2细胞凋亡,其作用呈剂量—效应关系;p53蛋白表达增加与MG132抑制泛素—蛋白酶体系统降解细胞内p53蛋白有关。
- 何慧郭芳屈顺林任重刘俊文杨向东汤劲松
- 关键词：P53表达人肝癌细胞系HEPG2剂量-效应关系泛素-蛋白酶体系统
- 聚合酶3′外切活性对3′硫化修饰引物聚合反应的影响被引量：8
- 2003年
- 目的 探讨硫化修饰的次 3′末端不配对引物能否引发高保真 DNA聚合酶介导的聚合反应的非成熟性终止 ,即所谓聚合反应的“关”效应。方法 采用配对及非末端不配对的 3′硫化修饰引物 ,研究其对不同保真度 DNA聚合酶引物延伸反应的影响。结果 非末端不配对的 3′硫化修饰引物也能引发高保真 DNA聚合酶介导的聚合反应非成熟性终止 ,而对低保真 DNA聚合酶所介导的聚合反应则无明显影响。同时 ,3′硫化修饰的配对引物对不同保真度 DNA聚合酶引物延伸反应均无影响。结论 硫化修饰的次 3′末端不配对引物与 3′末端不配对引物对引物延伸的影响相似 ,同样能引起高保真 DNA聚合酶介导的聚合反应的“关”的效应。显然 ,在单基因遗传病的诊断及单核苷酸多态性 (single nucleotide polymorphism,SNP)的高通量分析等方面 ,硫化修饰的碱基特异性引物与高保真 DNA聚合酶所构成的对 SNP敏感的“开 /关”系统 ,具有广阔的应用前景。
- 郭紫芬陈琳玲张佳彭翠英杨向东张旭何淑雅廖端芳李凯
- 关键词：DNA单基因遗传病
- 蛋白酶体抑制剂MG132诱导人血管内皮细胞凋亡及其机制被引量：2
- 2009年
- 目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人血管脐静脉内皮细胞(ECV-304)的致凋亡作用,并从泛素-蛋白酶体途径(UPP)相关基因E1、E2和E3及天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达初步探讨MG132的致细胞凋亡机制。方法采用蛋白酶体抑制剂MG132(2μmol/L和5μmol/L)处理ECV-304细胞;流式细胞术检测细胞凋亡率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测UPP相关基因E1、E2、E3和凋亡相关基因caspase-3的转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase-3蛋白表达。结果MG132处理组细胞的凋亡率明显增加;细胞内UPP相关基因E1、E2、E3 mRNA表达下降,而凋亡相关基因caspase-3 mRNA表达上调;细胞内caspase-3蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导ECV-304细胞凋亡,其机制可能是MG132抑制UPP活性,使细胞内caspase-3蛋白降解减少,同时上调caspase-3基因转录而促进细胞凋亡。
- 郭芳孙文清屈顺林何慧杨向东
- 关键词：泛素-蛋白酶体途径蛋白酶体抑制剂血管内皮细胞CASPASE-3
- MG132诱导人血管平滑肌细胞凋亡及对caspase3表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMC)的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)表达的影响。方法采用多个浓度(2.5,5,10μmol/L)的蛋白酶体抑制剂MG132处理人脐静脉VSMC48h;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测caspase3基因转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase3蛋白表达。结果蛋白酶体抑制剂MG132处理48h后细胞凋亡率增加;RT-PCR检测发现细胞内凋亡相关基因caspase3mRNA表达上调;免疫细胞化学检测细胞caspase3蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导人脐静脉VSMC凋亡,其作用呈量-效关系;MG132诱导VSMC凋亡的机制可能与MG132抑制泛素-蛋白酶体途径(UPP)活性,促进caspase3基因转录,使细胞内caspase3增加而促进细胞凋亡。
- 郭芳何慧孙文清屈顺林杨向东
- 关键词：血管细胞凋亡
- 氧化型低密度脂蛋白诱导U937细胞凋亡时泛素缀合酶和p53的表达被引量：2
- 2003年
- 为研究氧化型低密度脂蛋白致U937细胞凋亡时泛素—蛋白酶体通路中泛素缀合酶、p5 3与泡沫细胞凋亡之间的关系 ,用氧化型低密度脂蛋白处理人单核细胞U937细胞 ,诱导其凋亡 ,采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测细胞凋亡 ,逆转录聚合酶链反应检测泛素缀合酶和p5 3的基因表达 ;流式细胞术分析泛素缀合酶、载脂蛋白B和P5 3的蛋白表达。结果发现 ,氧化型低密度脂蛋白可以诱导U937细胞凋亡 ,在U937细胞凋亡过程中泛素缀合酶表达降低 ,p5 3表达增高 ,而且细胞内载脂蛋白B也增加。结果提示 ,泛素缀合酶的表达降低可能使P5 3和载脂蛋白B经泛素—蛋白酶体通路的降解减慢 ,从而引起P5 3和载脂蛋白B在细胞内积聚 。
- 杨向东刘俊文唐蔚青李红霞王仁
- 关键词：P53载脂蛋白B
- 蛋白酶体抑制剂联合表阿霉素杀伤肝癌细胞的研究
- 2008年
- 目的观察蛋白酶体抑制剂MG132与表阿霉素(epirubicin,EPI)联合应用对人肝癌HepG2细胞系体外生长的影响。方法实验分为4组:空白对照组;1μg/mL EPI处理组;1μmol/L MG132处理组;1μmol/L MG132+1μg/mL EPI共同处理组。应用MTT法检测小剂量MG132与表阿霉素处理后对HepG2细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果MTT法显示MG132与表阿霉素合用时对HepG2细胞的抑制率增加。流式细胞术测定显示对照组的HepG2细胞凋亡率为(0.87±0.19)%,1μmol/L MG132处理组细胞凋亡率为(5.53±0.99)%;1μg/mL EPI处理组细胞凋亡率为(13.8±1.37)%;1μmol/L MG132和1μg/mL EPI共处理组细胞凋亡率增加至(27.0±1.15)%。结论小剂量MG132与表阿霉素联合应用可增强致HepG2细胞凋亡作用。
- 何慧苏波杨向东郭芳孙文清
- 关键词：蛋白酶体抑制剂表阿霉素肝癌细胞凋亡
- 蛋白酶体抑制剂对肝癌细胞多药耐药基因表达的影响
- 2007年
- 目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对表阿霉素(EPI)诱导肝癌细胞系HepG2细胞多药耐药(MDR)基因表达的影响。方法采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测多药耐药(MDR)基因mRNA的表达。结果经1μg/mlEPI处理12h后,HepG2细胞MDR基因mRNA转录水平增高。联合应用1μg/mlEPI和1μmol/LMG132,HepG2细胞MDR基因mRNA表达较单用EPI时降低。结论MG132能够下调表阿霉素处理后HepG2细胞MDR基因mRNA转录水平。
- 何慧苏波杨向东郭芳孙文清
- 关键词：蛋白酶抑制药肝肿瘤基因表达
- 转ARL-1基因HepG2细胞耐药相关基因的筛选被引量：7
- 2003年
- 背景与目的:醛糖还原酶相似基因1(aldose-reductaselikegene-1,ARL-1)在原发性肝癌中高表达,与肝癌细胞对化疗药物耐药有关。本研究拟建立转染ARL-1的人肝癌细胞株,观察转染ARL-1的HepG2细胞对含醛基抗肿瘤药物耐药性的改变,利用基因表达谱芯片筛选HepG2细胞转染ARL-1后差异表达耐药相关基因。方法:采用脂质体转染PBK/ARL-1质粒到HepG2细胞,获得高表达ARL-1的单克隆细胞株;RT-PCR、流式免疫荧光和免疫组化鉴定高表达ARL-1的HepG2细胞;应用MTT法和细胞凋亡分析研究HepG2细胞和转染ARL-1的HepG2细胞对含醛基抗肿瘤药物阿霉素(ADM)和丝裂霉素(MMC)的耐药性,以5-氟尿嘧啶(5-FU)(不含醛基)为对照;将Cy3和Cy5两种荧光染料分别标记两种细胞的cDNA探针,与人肝癌基因表达谱芯片进行杂交与扫描,观察转染ARL-1基因HepG2与对照组HepG2细胞在基因表达谱方面的差异,筛选耐药相关基因,并运用RT-PCR和Westernblot对部分差异表达相关基因进行初步证实。结果:与对照组HepG2细胞相比,转染ARL-1基因HepG2细胞高表达ARL-1蛋白,明显增强对含醛基的抗肿瘤药物如ADM、MMC的耐药性,分别提高2.6倍和3.47倍,用5-FU处理两组细胞,则未发现有明显的耐药差异(ADM组t=6.39,P<0.05;MMC组t=30.06,P<0.01;5-FU组t=0.684,P>0.05);芯片扫描结?
- 杨向东唐大年王建曹德良
- 关键词：HEPG2相关基因耐药性癌细胞
- 粘附分子与动脉粥样硬化的关系被引量：12
- 1998年
- 粘附分子包括粘合素超家族、选择素家族、免疫球蛋白超家族、钙离子依赖的细胞粘附素家族及其它未归类的粘附分子，它参与机体许多重要的病理和生理过程．粘附分子介导的单核细胞对内皮细胞的粘附、迁移和分化，在动脉粥样硬化早期病变中有重要作用。氧化型低密度脂蛋白可促进粘附分子的表达，抗氧化剂可抑制其表达。提示抗氧化剂防治动脉粥样硬化既与其抗脂质过氧化有关，也与抑制粘附分子的表达有关。
- 杨向东
- 关键词：粘附分子动脉粥样硬化氧化型低密度脂蛋白
