杨金菊
- 作品数：18 被引量：26H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所蛋白质组学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PON2单克隆抗体的制备与初步鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:制备PON2(paraxonase2)单克隆抗体(mAb),并进行初步鉴定。方法:利用生物信息学方法分析人类PON2蛋白序列,选取与小鼠同源性低,而免疫原性与亲水性均较强的片段,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-PON2和PET-32a-PON2,GST-PON2和HIS-PON2融合蛋白在大肠杆菌中进行表达,以HIS-PON2作为免疫原制备鼠mAb,以GST-PON2作为筛选抗原。采用Western blot、间接免疫荧光鉴定mAb的特异性。结果:GST-PON2和HIS-PON2融合蛋白均在大肠杆菌中获得高效表达,经常规的细胞融合和筛选获得2株可稳定分泌抗PON2的杂交瘤细胞株,这2株抗体可以识别HepG2细胞中的靶蛋白。结论:成功制备出2株抗PON2的mAb,并通过免疫荧光技术检测了该蛋白在HepG2细胞中的分布,为进一步进行PON2蛋白的的研究提供了有效的工具。
- 于占红杨金菊刘静迟俊陈苗柳晓兰刘莹高建恩孙启鸿
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- 血红蛋白A2单克隆抗体的制备与鉴定
- 2007年
- 本研究目的是制备鼠抗人血红蛋白A2(HBA2)单克隆抗体(McAb)并进行初步鉴定。将正常人胎肝组织匀浆离心并分离出人胎肝核总蛋白,用人胎肝核总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组织化学的方法对单克隆抗体进行特异性鉴定,通过免疫沉淀和Uni-ZAPXR表达文库筛选鉴定抗原。结果表明:通过间接ELISA筛选获得分泌AEE091抗体的杂交瘤细胞1株,其分泌的单克隆抗体Ig亚类(型)为IgG1(κ);Western blot结果显示,该抗体识别分子量为15kD的蛋白;Western blot识别AEE091免疫沉淀获得的分子量为15kD的抗原;同时应用单克隆抗体AEE091对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAPXR)进行筛选,筛选所获得的阳性噬菌斑测序结果显示两个阳性克隆插入序列均为HBA2。结论:经筛选获得了分泌AEE091抗体的杂交瘤细胞株。AEE091抗体能特异识别HBA2抗原,因而其在HBA2的功能研究和珠蛋白生成障碍性贫血筛查等方面具有应用价值。
- 陈志成杨金菊刘蓉曲海霞王婉刘莉柳晓兰陈勇刘莹高建恩孙启鸿
- 关键词：血红蛋白A2单克隆抗体CDNA表达文库地中海贫血
- 烯酰辅酶A水合酶单克隆抗体的制备与鉴定
- 2009年
- 目的制备抗人烯酰辅酶A水合酶(ECH1)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blotting及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAPXR表达文库筛选鉴定抗原。结果获得1株可稳定分泌抗人ECH1mAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),该mAb可用于ELISA检测、Western blotting、免疫组化和免疫沉淀实验。结论成功制备了抗人ECH1的mAb,为ECH1的研究提供了有力的工具。
- 鞠艳芳刘蓉柳晓兰杨金菊高建恩孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体ELISA
- 烯脂酰辅酶A水解酶单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:制备小鼠抗人烯脂酰辅酶A水解酶(enoyl CoA hydratase,ECHS1)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA、Western blot、免疫沉淀、免疫组化和间接免疫荧光等方法对mAb进行特异性鉴定,通过Uni-ZAP XR正常成人肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原。结果:获得1株可稳定分泌抗人ECHS1 mAb的杂交瘤细胞株BGB095。该mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),可用于ELISA检测、Western blot、免疫沉淀、免疫组化等实验。结论:成功制备了抗人ECHS1的mAb,为代谢疾病和肿瘤的研究提供了有力的工具。
- 刘蓉鞠艳芳杨金菊杜雪梅陈勇刘莹高建恩孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体线粒体
- 应用单克隆抗体鉴定人类肝脏线粒体蛋白质组中的抗原优势蛋白
- 2010年
- 对线粒体蛋白质组的鉴定和分析有助于理解线粒体的功能和相关疾病的发病机制,包括能量代谢、凋亡、自由基产生、产热作用、钙离子信号通路等.本实验旨在鉴定人类肝脏线粒体蛋白质组中的抗原优势蛋白.用线粒体蛋白质作为免疫原,经过细胞融合、筛选和克隆,制备了240多个单克隆抗体杂交瘤细胞系.单克隆抗体识别的线粒体蛋白抗原通过人类肝脏cDNA表达文库筛选方法鉴定,相应的线粒体蛋白质的亚细胞定位通过免疫组化证实.发现了肝脏线粒体中6个抗原优势蛋白,分别被至少两种特异性的单克隆抗体所识别.这6个蛋白分别是乙酰辅酶A酰基转移酶(线粒体3-酮酯酰辅酶A硫解酶)2、醛脱氢酶1家族A1、氨甲酰磷酸合成酶1、二氢硫辛酰胺S乙酰转移酶(丙酮酸脱氢酶复合物的E2组分)、烯酰辅酶A水合酶1和羟基类固醇(11β)脱氢酶1.这些单克隆抗体有望应用于人类肝脏蛋白质组计划的相关研究,如去除优势蛋白、蛋白与蛋白之间相互作用的研究和验证等.
- 鞠艳芳杨金菊刘蓉柳晓兰杜雪梅刘莉陈志成迟俊刘淑娥高媛高建恩贺福初孙启鸿
- 关键词：线粒体单克隆抗体肝脏
- 抗尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶2单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2007年
- 本研究制备抗人尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶2(UDP-glucose pyrophosphorylase2)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。将正常成人肝组织匀浆离心并分离肝脏胞浆总蛋白,用肝脏胞浆总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,通过间接ELISA法、Western blot及免疫组织化学的方法对单克隆抗体进行特性鉴定,通过Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗体特异性。结果表明:通过间接ELISA筛选获得1株可稳定分泌抗人UGP2mAb的杂交瘤细胞系BAD062,其分泌的单克隆抗体的Ig亚类(型)为IgG2b(κ),Western blot结果显示该抗体可以特异地识别分子量为56kD的蛋白;应用单克隆抗体BAD062对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAPXR)进行筛选,阳性噬菌斑测序结果显示2个阳性克隆插入序列均为UGP2。结论:单克隆抗体BAD062特异地识别抗原UGP2,该抗体可用于ELISA检测、Western blot、免疫组织化学实验,为UGP2的研究提供了有力的工具。
- 王婉高媛杨金菊柳晓兰鞠艳芳刘莉陈志成刘蓉迟俊邢维贤高建恩安立国孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体CDNA表达文库
- 抗二羰基/L-木酮糖还原酶单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的制备抗人二羰基/L-木酮糖还原酶(Dicarbon-yl/L-xylulosereductase,DCXR)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Westernblot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAPXR表达文库筛选鉴定抗原。结果获得1株可稳定分泌抗人DCXRmAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),该mAb可用于ELISA检测、Westernblot、免疫组化和免疫沉淀实验。结论成功制备了抗人DCXR的mAb,为DCXR的研究提供了有力的工具。
- 鞠艳芳杨金菊刘蓉高媛柳晓兰高建恩孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体
- 乙醛酸还原酶/羟基丙酮酸还原酶单克隆抗体的制备与鉴定
- 2007年
- 目的:制备鼠抗人乙醛酸还原酶/羟基丙酮酸还原酶单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离出肝脏胞质总蛋白,用肝脏胞质总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特异性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱和Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原。结果:通过间接ELISA筛选获得杂交瘤细胞株ADB291,其分泌的mAb Ig亚类(型)为IgG1(κ),Western blot结果显示该mAb识别相对分子质量(Mr)为35 000的蛋白;对免疫沉淀获得的相应抗原回收、酶切、质谱鉴定为GRH-PR。同时应用mAb ADB291对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAP XR)进行筛选,筛选所获得的阳性噬菌斑测序结果显示2个阳性克隆插入序列均为GRHPR;阳性克隆转化表达后的Western blot结果确认该抗体识别Mr35 000的表达蛋白。结论:mAb ADB291特异识别的抗原为GRHPR,该mAb在GRHPR的功能研究和二型原发性尿草酸盐过多遗传疾病的临床诊断等方面具有应用价值。
- 陈志成杨金菊刘蓉王婉柳晓兰刘莹高建恩孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体CDNA表达文库
- T7噬菌体展示文库在鉴定单克隆抗体所识别的抗原及表位中的应用
- 2007年
- 目的:用T7噬菌体展示文库鉴定1株单克隆抗体(mAb)DBD02的特异性。方法:用Protein G Sepharose结合mAb后对T7噬菌体展示文库进行2轮生物淘洗,用洗脱的通过特异mAb富集的噬菌体铺板后,以DBD02为一抗进行Dotblot筛选,阳性克隆进一步通过Western blot检测,PCR扩增阳性噬菌体插入的肝脏cDNA片段,测序后,通过BLAST比对确定mAb DBD02所识别的抗原。结果:在2轮淘洗后得到了>50个阳性克隆,取其中2个点扩增后进行了Western blot检测,并对这2个阳性克隆进行了PCR,序列测定后鉴定了此mAb所识别的抗原为乙醇脱氢酶,并将此mAb识别的表位限定于22个多肽内。结论:T7噬菌体展示文库可应用于mAb特异性的鉴定,与cDNA表达文库的免疫筛选相比,具有省时、省力和经济的特点,是mAb特异性鉴定的有力工具。
- 何湘杨金菊刘莹柳晓兰陈勇高建恩孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体乙醇脱氢酶
- 肝癌相关的单克隆抗体的制备及其抗原表位分析
- 2011年
- 目的:制备肝癌相关的单克隆抗体(mAb)用于肝癌的诊断。方法:用高转移肝癌细胞系HCCLM-6细胞免疫BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与Sp2/0融合建立杂交瘤细胞系。通过ELISA法筛选HCCLM-6细胞蛋白的特异性mAb,用免疫组化染色法筛查对肝癌组织阳性率高的mAb,并用免疫荧光方法鉴定其在不同肿瘤细胞系中的表达,最后通过筛选Uni-ZAP XR人肝细胞cDNA表达文库初步鉴定mAb识别的抗原及其表位。结果:建立了28株杂交瘤细胞株,用ELISA法和免疫组化染色法筛选出肝癌阳性率较高的mAbQGA062。通过人肝细胞cDNA表达文库筛选初步鉴定表明mAb QGA062识别的抗原是纤维连接蛋白(FN),经分析其抗原表位位于肽段YTVSLVAIKGNQESPK。结论:获得与肝癌相关的mAb QGA062,并鉴定了其识别的抗原和表位,为肝癌的诊断和FN参与肝癌转移的机制研究提供了重要的制剂。
- 杨秉芬刘蓉刘莹杨金菊柳晓兰高建恩孙启鸿
- 关键词：肝癌单克隆抗体表位分析
