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禽流感病毒NP基因的酵母双杂交饵载体表达及自激活检测: 2007年; 目的构建H5N1亚型禽流感病毒NP基因的酵母双杂交诱饵载体,验证其在酵母中的表达并检测其自激活作用。方法以PCR法从pGEMT/H5NP扩增NP基因编码区序列,将其定向克隆到PGBKT7载体,经测序鉴定后,PEG/Li-Ac法转化酵母菌株AH109,用表型筛选法及颜色筛选法检测其自激活作用同时Westernblot验证诱饵蛋白的表达。结果获得NP编码区基因,并成功构建酵母双杂交系统中的诱饵载体pGBKT7-NP,对宿主细胞酵母菌株AH109无毒性和自激活作用,并能在酵母细胞中稳定表达。结论诱饵载体pGBKT7-NP可用于GAL4酵母双杂交系统钓取与禽流感病毒核蛋白相互作用的蛋白。; 柳斌李文平屈孝初唐宇龙张传福周晓巍黄培堂; 关键词：NP基因诱饵载体酵母双杂交自激活作用

H3N2亚型禽流感病毒核蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达: 2007年; 目的:获得H3N2亚型禽流感病毒核蛋白(NP)全长基因,并在大肠杆菌中表达,以用于对NP功能的研究。方法:从感染了H3N2亚型禽流感病毒的MDCK细胞培养液中收获病毒,提取病毒RNA,用RT-PCR扩增出NP基因的编码区序列,将其定向克隆到pTIG-TRX原核表达载体并测序,在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达,用SDS-PAGE和Western印迹检测表达产物。结果:所克隆的核苷酸片段包含了NP基因编码区完整阅读框架,编码498个氨基酸;构建的重组表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达出相对分子质量约66000的重组蛋白。结论:克隆和表达了禽流感病毒核蛋白编码区基因,为获得大量NP以制备抗体,以及对其进行功能性研究奠定了基础。; 柳斌杨志新李文平屈孝初周晓巍黄培堂; 关键词：禽流感病毒核蛋白原核表达大肠杆菌

禽流感病毒核蛋白基因的克隆、表达及其相互作用蛋白的筛选: 核蛋白（Nucleoprotein）基因是禽流感病毒（AIV）基因组的第5片段。在AIV复制早期，NP与AIV的RNA及多聚酶蛋白共同装配成RNP复合体，通过RNP复合体感染宿主细胞上的某些大分子来影响...; 柳斌; 关键词：禽流感病毒 NP 克隆表达酵母双杂交; 文献传递

三种结核分枝杆菌分泌蛋白的抗体制备及其在抗原检测中的应用被引量：11: 2007年; 目的制备结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6、MPT84和MPT63-MPT70重组蛋白抗体,探讨其在检测结核抗原中的应用价值。方法应用重组蛋白CFP10-ESAT-6、MPT64和MPT63- MPT70免疫血清,制备包被抗体和标记抗体,建立检测3种蛋白的双抗体夹心法,并将其用于17种分枝杆菌培养上清液和341份临床血清标本的检测。结果CFP10-ESAT-6的最低检出浓度为25 ng/mL,MPT64和MPT63-MPT70均为50 ng/mL。CFP10-ESAT-6检测17种分枝杆菌培养上清液,只有结核分枝杆菌为阳性;而MPT64和MPT63-MPT70检测除结核分枝杆菌阳性外,还各有5种非结核分枝杆菌培养上清液为阳性结果。CFP10-ESAT6、MPT64和MPT63-MPT70检测165例临床诊断的肺结核患者血清标本阳性率分别为33.9%、41.2%和47.9%;检测112例非结核患者血清标本的假阳性率分别为1.8%、7.1%和10.7%;检测64例健康对照的假阳性率分别为0、3.1%和7.8%。结论CFP10-ESAT-6、MPT64和MPT63-MPT70重组蛋白制备的抗体检测血清标本结核抗原的阳性率均不高,但特异性较好。; 唐宇龙杨华刘湘新柳斌秦莲花郑瑞娟丁元生胡忠义; 关键词：分枝杆菌结核重组蛋白质类结核分枝杆菌

有机铬在养猪生产中的营养研究与应用被引量：1: 2007年; 本文综述了有机铬的来源、吸收排泄、作用机理以及有机铬与猪生长、繁殖、胴体品质、应激和免疫间的关系，同时也提出今后在猪的营养中有机铬仍需探讨和研究的方向。; 朱南山柳斌王洁; 关键词：有机铬营养作用

动物微生态制剂在畜牧生产中的应用被引量：15: 2006年; 简单的介绍了动物微生态制剂的基本概念及分类情况,重点阐述了动物微生态制剂在畜牧生产中的应用情况,分析了目前动物微生态制剂存在的问题,对动物微生态制剂的前景进行了分析和展望。; 柳斌李文平; 关键词：微生态制剂益生菌畜牧生产

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柳斌