栾慎顺
- 作品数：26 被引量：48H指数：4
- 供职机构：辽宁出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学经济管理更多>>
- 水貂阿留申病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立与应用被引量：4
- 2016年
- 为建立一种快速、敏感检测水貂阿留申病毒(AMDV)的方法,本研究根据AMDV的VP2基因保守区设计特异性引物和MGB探针,并优化检测反应条件,建立了AMDV的TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,以重组质粒为标准品建立的标准曲线在1.0×10~2拷贝/μL^1.0×10~8拷贝/μL内具有良好的线性关系,相关系数(R^2)为0.998。该方法仅对AMDV的靶基因扩增呈阳性,而对猪细小病毒、犬细小病毒、水貂肠炎细小病毒等相关病毒检测结果均为阴性,特异性良好。该方法对AMDV检测的灵敏度为10拷贝/μL,为普通PCR灵敏度的100倍;组内和组间重复性试验表明该方法的组内和组间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。应用建立方法和普通PCR方法分别对40份疑似临床组织病料样品进行检测,该方法检出率比普通PCR高约7.5%。本研究结果表明建立的AMDV TaqMan-MGB荧光定量PCR方法灵敏、快速、特异性强、重复性好,适用于对AMDV的快速定量检测。
- 贾赟刘钊宋大贺李艳伍张岩岩栾慎顺王全凯孙颖杰
- 关键词：水貂阿留申病毒TAQMAN-MGB探针荧光定量PCR
- 全文增补中
- 正常人肝细胞cDNA文库的构建及应用分析被引量：2
- 2007年
- 目的利用Gubler-Hoffman法构建了正常人肝细胞的cDNA文库以筛选肝细胞内部与乙肝病毒感染相关的基因。方法首先采用TRIzol法提取正常人肝细胞总RNA,纯化mRNA。逆转录合成单链cDNA,然后合成双链cDNA。用Spin Column回收0.4kb以上片段,然后与Vector pAP3neo进行连接,利用电刺激转化法导入E.coliDH10B,利用PCR法检测文库的重组效率。结果扩增后的文库重组率为93.3%。结论已经成功地构建了正常人肝组织的cDNA文库,该文库可用于筛选与乙肝相关的基因及用于基因芯片的制作。
- 栾慎顺张敬武刘恒贵
- 关键词：CDNA文库乙肝病毒
- 非洲猪瘟病毒P54基因原核表达载体的构建与表达被引量：7
- 2009年
- 根据GenBank中非洲猪瘟病毒(ASFV)P54基因序列,设计合成了2对引物,采用PCR方法从ASFV DNA中分别扩增出了P54基因片段和经过改造的跨膜信号肽缺失的P54基因,将其克隆到表达载体pET28b中,构建了重组质粒pET-P54和pET-P54q,测序验证后转化入表达宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE,Western-blotting检测。结果显示,经过改造的信号肽缺失的重组菌pET-P54q可表达出分子质量约24.5 ku的重组融合蛋白,表达的蛋白以可溶形式存在于菌体中,经镍柱亲和层析纯化可获得纯度较高的目的蛋白。纯化的蛋白能与ASFV阳性血清发生特异性的免疫印迹反应,证实,表达的蛋白具有较好的反应原性。
- 侯艳梅董志珍赵祥平李琳肖妍陈本龙蔡国瑞栾慎顺王建华
- 关键词：非洲猪瘟病毒原核表达
- PRRSV与PCV2混合感染的临床检测试验
- 2008年
- 沈阳地区某猪场出现了母猪流产、仔猪腹泻、呼吸困难等症状,根据其临床症状、剖检变化、RT-PCR及PCR等检测,确诊该场此次发病为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)及猪2型圆环病毒(PCV2)的混合感染。
- 金苗苗张敏栾慎顺沈国顺
- 关键词：PCR猪繁殖与呼吸综合征病毒猪2型圆环病毒
- 我国部分地区传染性羊痒病基因型的分布情况调查被引量：2
- 2011年
- 引起羊痒病的病原朊蛋白是一种正常的唾液酸糖蛋白(PrPc)在三级结构发生改变后形成的异常蛋白(PrPsc)。该病的发生与绵羊朊蛋白编码基因PRNP遗传多样性密切相关,主要表现在PRNP第136、154和171位密码子组成的PRNP基因型与绵羊对痒病的抗病性的联系。根据已建立的一种利用荧光定量PCR扩增反应对羊痒病抗性基因进行筛选的方法,对我国部分地区的无角多赛特绵羊羊痒病基因分布情况进行调查,从而从品种选育水平上杜绝羊痒病的发生。
- 肖妍董志珍栾慎顺陈本龙
- 关键词：羊痒病传染性海绵状脑病PRNP
- pSUPER介导的RNAi抗乙肝病毒S基因的研究
- 2008年
- 目的研究RNAi抗乙肝病毒的作用。方法设计并合成一段针对HBV S基因的干扰序列及一段无关的序列,克隆进pSUPER载体中,分别构建pSUPER-HBS、pSUPER-nonsense载体,然后将pSUPER、pSUPER-HBS、pSUPER-nonsense转染进HepG2.2.15细胞中,用ELISA方法对细胞上清中HBsAg、HBeAg进行检测。尾静脉注射HBV转基因小鼠,取血清检测。结果pSUPER-HBS所表达的siRNA成功的抑制了HepG 2.2.15上清及HBV转基因鼠血清中的HBsAg、HBeAg,抑制率分别达到70%、51%以及60%、42%。结论针对HBV S区的siRNA能明显抑制HBV的复制。
- 张敬武栾慎顺杨倬刘长梅张景海
- 关键词：乙肝乙肝病毒S抗原
- 非洲猪瘟病毒检测试剂盒的研制被引量：4
- 2012年
- 针对非洲猪瘟病毒(ASFV)P54基因建立荧光PCR检测方法,通过优化引物、TaqMan探针浓度及反应温度,研发了ASFV检测的荧光PCR检测试剂盒。经灵敏度的重复性试验及3种不同型号荧光PCR仪使用验证,所研发的试剂盒灵敏度为101copy/μL,适用于不同型号荧光PCR仪使用,可用于对非洲猪瘟病毒的快速检测。
- 董志珍赵祥平张霞肖妍栾慎顺
- 关键词：非洲猪瘟病毒荧光定量PCR试剂盒
- 狐狸阴道加德纳氏菌病的诊断与防治
- 2007年
- 1发病情况狐阴道加德纳氏菌病是由阴道加德纳氏菌引起的一种人畜共患传染病。该病在我国各毛皮动物饲养场广泛发生,给养狐造成了极大的经济损失。有调查发现,狐狸发病的阳性率为5.30%,其中北极狐高达8.75%。2006年辽宁凌海某场饲养狐狸万余只,近年来出现屡配不孕,或配种结束后排出少许血色分泌物,或在妊娠期间发生流产,繁殖率极低。养殖者于6月初送病狐和死狐到本实验室求诊。
- 张敏沈国顺金苗苗栾慎顺
- 关键词：狐狸
- 牙鲆弹状病毒研究进展被引量：1
- 2015年
- 牙鲆弹状病毒(Hirame rhabdovirus,HIRRV)可以引起牙鲆、香鱼等肌肉组织器官及内脏出血,造血器官坏死,给鱼类养殖带来巨大经济损失。HIRRV具有囊膜,属于弹状病毒科粒外弹状病毒属。病毒基因组为单股负链的RNA,长约11 000 bp,主要包含5个基因,可编码核蛋白(nucleoperotein,N)、磷蛋白(phosphoperotein,P)、基质蛋白(matrix preotein,M)、糖蛋白(glycoperotein,G)、依赖RNA的RNA酶(RNA polymerase protein,L)和非结构蛋白(nonvirion perotein,NV)。本文就目前国内外关于HIRRV的流行特点、生物学特征、分类地位、基因组及其蛋白产物的特征以及检测方法等方面进行了较为全面的概述,旨在为该病的预防、控制以及致病机理方面的研究提供依据。
- 张小飞孙颖杰贾赟林长军李华王贞钧刘钊张雪栾慎顺
- 关键词：基因组编码蛋白
- 辽宁地区猪无名高热的调查与诊断
- 2007年
- 无名高热具有一定的历史性，当一种新的疾病或多种病原混合感染兽医临床难以解决的时候，则被冠以无名高热之名。过去猪瘟、猪链球菌病、附红细胞体病都被称为无名高热病，现在无名高热综合征多是混合感染。
- 张敏沈国顺金苗苗栾慎顺
- 关键词：无名高热病猪瘟附红细胞体病猪链球菌病兽医临床
