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殷瑛: 作品数：21 被引量：38H指数：3; 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项北京市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

合作作者

结核分枝杆菌分泌蛋白EspB在RAW264.7细胞中的稳定表达: 2011年; 【目的】建立能够稳定表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白EspB(Rv3881c)的RAW264.7细胞系,为研究EspB蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用提供科学依据。【方法】首先成功构建的重组质粒pEGFP-C1-EspB,然后将重组载体pEGFP-C1-EspB和空载体pEGFP-C1以脂质体介导的方法转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,经过G418筛选后建立稳定表达EGFP-EspB融合蛋白以及EGFP的细胞系,并通过RT-PCR、荧光显微镜及Western blot方法,在基因和蛋白两个水平对所建立的稳转细胞系进行鉴定。【结果】EGFP-ESAT6融合基因成功整合入RAW264.7细胞基因组并能够稳定表达,成功获得了能够稳定表达EGFP-EspB融合蛋白以及EGFP的细胞系。【结论】本试验利用脂质体介导的方法,将构建的重组载体pEGFP-C1-EspB和空载体pEGFP-C1转染至Raw264.7细胞系中,获得了稳定表达EGFP-EspB融合蛋白的巨噬细胞系,为阐明EspB分泌蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用以及EspB与巨噬细胞蛋白之间的相互作用提供了研究平台。; 李浩殷瑛董大勇张军付玲任军徐俊杰陈薇; 关键词：EGFP RAW264.7 稳定转染

结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6对小鼠巨噬细胞凋亡的诱导作用被引量：2: 2014年; 【目的】研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)分泌蛋白ESAT-6(early secreted antigenic target of 6 kD)对小鼠巨噬细胞凋亡的影响及机理。【方法】应用流式细胞仪分析稳定表达ESAT-6和经重组ESAT-6蛋白作用的小鼠RAW264.7细胞的凋亡;应用Caspase-3检测试剂盒检测caspase-3活性变化;进一步应用Western blotting分析稳转细胞系ESAT-6表达情况。【结果】RAW-EGFP-ESAT-6细胞系培养48 h后的凋亡率与caspase-3活性显著高于RAW264.7和RAW-EGFP细胞系(P<0.05);RAW-flag-ESAT-6细胞系培养48 h后的凋亡率与caspase-3活性显著高于RAW264.7和相应对照细胞系(P<0.01)。10μg/ml重组ESAT-6可显著诱导RAW264.7细胞凋亡,而5μg/ml重组ESAT-6无明显诱导细胞凋亡效果。稳转细胞系RAW-flag-ESAT-6细胞内flag-ESAT-6浓度大约只有500 ng/ml。【结论】胞内低水平表达结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6可依赖caspase-3信号通路诱导小鼠RAW264.7细胞凋亡。; 屈野殷瑛李浩杨秀旭董大勇徐俊杰陈薇; 关键词：ESAT-6 CASPASE-3 流式细胞仪

结核分枝杆菌VII型分泌系统研究进展: 有研究表明结核分支杆菌的培养滤液中含有缺少传统信号序列的并且具有高度免疫性的蛋白，这表明在结核分支杆菌中可能存在一种新的蛋白分泌体系。最近这种分泌机制已经在结核分枝杆菌中已经得到证实，并将这种新发现的分泌体系命名为ESX...; 李浩殷瑛徐俊杰陈薇; 关键词：结核分枝杆菌分子机制; 文献传递

肿瘤血管内皮细胞标志物8突变体、其融合蛋白及应用: 本发明公开了一种肿瘤血管内皮细胞标志物8的蛋白突变体，所述蛋白突变体与人血清白蛋白的融合蛋白及其在制备治疗和/或预防炭疽感染药物中的应用。本发明公开的蛋白突变体显著提高了与炭疽PA抗原的亲和力，对炭疽毒素的抑制活性与sC...; 陈薇徐俊杰李亮亮郭强张军董大勇殷瑛蔡晨光付玲

结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的重组表达及膜定位研究被引量：1: 2011年; 从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ESAT-6基因,克隆入pET21a(+)载体。将成功构建的pET21a(+)-ESAT-6重组质粒转化入感受态BL21(DE3)中,经诱导表达后,使用SDS-PAGE和Western blot鉴定。超声破碎后发现目的蛋白以可溶性表达形式存在,经过Ni-NTA柱和DEAE-SepharoseTMFast Flow柱纯化,获得纯度约为95%的重组ESAT-6蛋白。将目的蛋白和RAW264.7细胞共孵育后,使用免疫荧光技术发现ESAT-6蛋白能够直接和RAW264.7的细胞膜结合。; 李浩殷瑛毛亚丽董大勇张军付玲郭继红徐俊杰陈薇; 关键词：结核分枝杆菌 ESAT-6 纯化免疫荧光

结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6增强巨噬细胞吞噬功能的研究: 目的研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)分泌蛋白ESAT-6(early secreted antigenic target of 6kD)对巨噬细胞吞噬功能的影响。方法用重组质粒pF...; 屈野殷瑛李浩刘炬杨秀旭董大勇徐俊杰陈薇; 关键词：ESAT-6 RAW264.7 共聚焦显微镜

肿瘤血管内皮细胞标志物8突变体、其融合蛋白及应用: 本发明公开了一种肿瘤血管内皮细胞标志物8的蛋白突变体，所述蛋白突变体与人血清白蛋白的融合蛋白及其在制备治疗和/或预防炭疽感染药物中的应用。本发明公开的蛋白突变体显著提高了与炭疽PA抗原的亲和力，对炭疽毒素的抑制活性与sC...; 陈薇徐俊杰李亮亮郭强张军董大勇殷瑛蔡晨光付玲; 文献传递

携带被插入到乙肝核心抗原蛋白或其片段内的炭疽保护性抗原表位的重组融合蛋白及其用途: 本发明涉及包括携带炭疽保护性抗原的一种或数种表位的一种或数种多肽的重组融合蛋白，所述的表位多肽以单表位或组合在一起的多个表位的形式插入到乙肝核心抗原(HBcAg)蛋白或其片段的相同或不同的许可位点，形成了能够刺激机体对炭...; 陈薇徐俊杰殷瑛张军李建民付玲易绍琼董大勇赵剑郭强; 文献传递

结核分枝杆菌ESX-1分泌蛋白ESAT-6增强巨噬细胞吞噬功能被引量：1: 2013年; 【目的】研究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)分泌蛋白ESAT-6(early secreted antigenictarget of 6 kDa)对巨噬细胞吞噬功能的影响。【方法】用重组质粒pFLAG-ESAT-6和pFLAG-EGFP转染RAW264.7细胞,经G418筛选,PCR、RT-PCR和Western blot鉴定,获得稳定表达flag-ESAT-6和flag-EGFP的RAW细胞系,然后用流式细胞术观察各稳转细胞系吞噬荧光微球的能力,并用共聚焦显微镜和菌落计数法检测稳转细胞系吞噬大肠杆菌(Escherichia coli)的能力。【结果】获得了稳定表达flag-ESAT-6的RAW-E6细胞系和表达flag-EGFP的RAW-EGFP细胞系;流式细胞术检测结果表明RAW-E6吞噬荧光微球的能力显著强于野生型细胞系RAW264.7和对照细胞系RAW-EGFP;菌落计数和激光共聚焦分析表明RAW-E6细胞系吞噬E.coli的能力也显著强于RAW264.7和RAW-EGFP。【结论】通过胞内表达发现结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6能够增强巨噬细胞的吞噬功能,这将为深入理解结核分枝杆菌的致病机制提供新的思路。; 屈野殷瑛李浩刘炬杨秀旭董大勇徐俊杰陈薇; 关键词：ESAT-6 巨噬细胞

乙肝核心蛋白与结核抗原或抗原片段的重组融合蛋白及用途: 本发明涉及乙肝核心蛋白和结核分枝杆菌抗原或抗原片段所构成的一种或数种重组融合蛋白，所述的结核抗原或抗原片段以单抗原或抗原片段，或者组合在一起的多种抗原或抗原片段的形式插入到乙肝核心蛋白的相同或不同的许可位点。本发明所述的...; 陈薇徐俊杰殷瑛张军董大勇李浩侯利华付玲; 文献传递