沈俊杰
- 作品数：16 被引量：6H指数：2
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗肝癌干细胞单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种抗肝癌干细胞单克隆抗体，由保藏编号为CGMCC No.8800的小鼠杂交瘤细胞4P-120分泌产生，该单克隆抗体经实验证实，能够特异性结合肝癌细胞并特异性识别肝癌组织，其所识别的抗原在人肝癌的癌组织中高表...
- 钱程洪娟赵文旭沈俊杰单娟娟
- 文献传递
- 利用CRISPR/Cas9技术制备B2M^–细胞模型
- 2018年
- Ⅰ型主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex class I,MHC I)是造成免疫排斥的重要分子,该研究利用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspersed short palindromic repeats)技术靶向其β2微球蛋白(beta-2 microglobulin,B2M)亚基实现MHC I的敲除,并在分子和细胞水平进行验证。设计针对B2M基因的g RNA(guide RNA)并构建对应的CRISPR/Cas9基因敲除质粒,通过电穿孔转染技术将同时带有Cas9蛋白与g RNA骨架的质粒瞬时转入HEK293细胞中进行蛋白表达与基因组核酸切割,流式分选得到HEK293 B2M阴性细胞,提取其基因组并对g RNA靶向区域与脱靶区域进行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),将PCR产物连接T载体测序检测基因打靶与脱靶情况。同时,利用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)与实时定量荧光聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)测定B2M基因在RNA水平的表达。综上所述,该研究发现了一种利用CRISPR/Cas9技术快速便捷、低成本的可用于敲除B2M基因的方法,经检测可使目的细胞中B2M基因发生移码、插入、缺失、单碱基突变,且未发现脱靶现象,这在未来解决免疫排斥相关难题上意义重大。
- 李戊玲沈俊杰钱程
- 关键词：HEK293电穿孔
- 干扰SIRT1表达试剂在制备抑制肝癌干细胞干性转录因子表达的试剂中的应用
- 本发明属于化学领域，具体公开了干扰SIRT1表达试剂在制备抑制肝癌干细胞干性转录因子表达的试剂中的应用，通过抑制肝癌干细胞中干性转录因子的表达，降低肝癌干细胞的增殖能力、克隆形成能力和成球能力，从而抑制肝癌干细胞的自我更...
- 钱程刘丽梅刘春刚沈俊杰单娟娟
- 文献传递
- IGF-FOXO3a通路对肝癌干细胞自我更新能力的调控被引量：2
- 2017年
- 目的探讨FOXO3a对肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)自我更新能力的调控作用以及其相关机制。方法流式细胞仪分选获取肝癌干细胞,实时荧光定量PCR(real time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)检测FOXO3a在肝癌干细胞中的表达情况;利用类胰岛素生长因子(insulin-like growth factor,IGF)的抑制剂或激活剂改变IGF活性,Western blot和qRT-PCR检测FOXO3a表达的改变;包装、纯化表达和干扰FOXO3a的慢病毒并进行细胞的感染,Western blot检测其过表达和干扰效率;采用细胞克隆形成实验和细胞成球生长能力实验检测过表达或干扰FOXO3a后细胞自我更新能力的改变,以及肝癌细胞中激活IGF信号,同时过表达FOXO3a后细胞自我更新能力的改变。结果 FOXO3a在肝癌干细胞中的表达明显低于肝癌细胞(P<0.01),并且受到IGF的负向调控;构建了稳定过表达和干扰FOXO3a的细胞模型,并发现过表达FOXO3a后,细胞的克隆形成能力和成球生长能力均降低,而干扰FOXO3a后,细胞的克隆形成能力和成球生长能力均得到了提升;激活IGF信号,同时过表达FOXO3a后,细胞的克隆形成能力和成球生长能力下降。结论 FOXO3a对肝癌干细胞的自我更新能力具有负向调控作用,且可受到IGF的负调节,并介导IGF对肝癌干细胞的自我更新能力的调控。
- 李志芬沈俊杰单娟娟陈军钱程
- 关键词：肝癌干细胞FOXO3A
- 干扰SIRT1表达试剂在制备抑制肝癌干细胞干性转录因子表达的试剂中的应用
- 本发明属于化学领域，具体公开了干扰SIRT1表达试剂在制备抑制肝癌干细胞干性转录因子表达的试剂中的应用，通过抑制肝癌干细胞中干性转录因子的表达，降低肝癌干细胞的增殖能力、克隆形成能力和成球能力，从而抑制肝癌干细胞的自我更...
- 钱程刘丽梅刘春刚沈俊杰单娟娟
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- Matrigel诱导肿瘤细胞逆转为肿瘤干细胞的应用及方法
- 本发明公开了一种Matrigel诱导肿瘤细胞逆转为肿瘤干细胞的应用及方法，将肿瘤细胞溶液与Matrigel混合，得到混合液；将混合液加入到细胞培养基中进行细胞培养即得到逆转的肿瘤干细胞。得到的肿瘤干细胞可以用于肿瘤细胞发...
- 钱程沈俊杰单娟娟
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- 干扰SIRT1表达试剂在制备抑制肝癌干细胞自我更新的药物中的应用
- 本发明属于化学领域，公开了干扰SIRT1表达试剂在制备抑制肝癌干细胞自我更新的药物中的应用，通过在肝癌干细胞中抑制SIRT1表达能够显著降低肝癌干细胞的增殖能力、克隆形成能力和成球能力，从而抑制肝癌干细胞的自我更新；因此...
- 钱程刘丽梅刘春刚沈俊杰单娟娟
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- SIRT1抑制剂联合索拉菲尼在制备治疗肝癌的药物中的应用
- 本发明属于化学领域，具体涉及SIRT1抑制剂联合索拉菲尼在制备治疗肝癌的药物中的应用，利用本发明的方法能够抑制肝癌干细胞的增殖、分化和克隆形成，提高肝癌干细胞对索拉菲尼的敏感性和降低肝癌干细胞对索拉菲尼的耐药性，同时还能...
- 钱程刘丽梅刘春刚沈俊杰单娟娟
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- 干扰SIRT1表达试剂在制备抑制肝癌干细胞自我更新的药物中的应用
- 本发明属于化学领域，公开了干扰SIRT1表达试剂在制备抑制肝癌干细胞自我更新的药物中的应用，通过在肝癌干细胞中抑制SIRT1表达能够显著降低肝癌干细胞的增殖能力、克隆形成能力和成球能力，从而抑制肝癌干细胞的自我更新；因此...
- 钱程刘丽梅刘春刚沈俊杰单娟娟
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- Matrigel诱导肿瘤细胞逆转为肿瘤干细胞的应用及方法
- 本发明公开了一种Matrigel诱导肿瘤细胞逆转为肿瘤干细胞的应用及方法，将肿瘤细胞溶液与Matrigel混合，得到混合液；将混合液加入到细胞培养基中进行细胞培养即得到逆转的肿瘤干细胞。得到的肿瘤干细胞可以用于肿瘤细胞发...
- 钱程沈俊杰单娟娟
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